胆囊炎合剂主要药效学研究

陈英红等

[摘要] 目的 研究胆囊炎合剂与其功能主治相关的主要药效学。 方法 采用石胆酸引起的豚鼠急性胆囊炎模型观察胆囊炎合剂对胆囊炎的作用；采用四氯化碳及α-萘异硫氰酸酯所致动物急性肝损伤及黄疸型肝损伤模型观察胆囊炎合剂对肝损伤的保护作用；采用二甲苯引起的小鼠耳水肿和酵母所致大鼠发热方法观察其消炎解热作用。 结果 与石胆酸所致的急性胆囊炎模型组比较，豚鼠的肝脏、脾脏指数明显降低（P < 0.05或P < 0.01）；与四氯化碳所致急性肝损伤模型组和α-萘异硫氰酸酯致黄疸型肝损伤模型组比较，血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素活性显著降低（P < 0.05）；胆囊炎合剂对二甲苯引起的炎症及酵母导致的发热也有显著的抑制作用（P < 0.05或P < 0.01）。 结论 胆囊炎合剂具有利胆、消炎、退黄及解热作用。

[关键词] 胆囊炎合剂；急性胆囊炎；肝损伤；药效学

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）06（c）-0008-05

Study on main pharmacodynamics of Cholecystitis Mixture

CHEN Yinghong1 XU Hong1 DONG Fang1 LUO Haoming2 LIU Wei1 JIANG Xiangzhi3▲

1.Institute of Chinese Materia Medica， Jilin Academy of Chinese Medical Sciences， Jilin Province， Changchun 130012， China； 2.College of Pharmacy， Changchun University of Chinese Medicine， Jilin Province， Changchun 130117， China； 3.Department of Pharmacy， Japan-China Union Hospital of Jilin University， Jilin Province， Changchun 130021， China

[Abstract] Objective To study the main pharmacodynamics of Cholecystitis Mixture related to its major functions. Methods The model of guinea pigs with acute cholecystitis caused by lithocholic acid was used to observe the function of Cholecystitis Mixture for cholecystitis； the models of animals with acute liver injury and liver injury of jaundice type caused by carbon tetrachloride and α-naphthylisothiocyanate were used to observe the protective effect of Cholecystitis Mixture for liver injury； the methods of ear edema of mice caused by xylene and fever of rats caused by yeast were used to observe the anti-inflammatory and antipyretic functions. Results Compared with model of acute cholecystitis caused by lithocholic acid， the liver and spleen indexes of guinea pigs were decreased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）； compared with the model of acute liver injury caused by carbon tetrachloride and the model of liver injury of jaundice type caused by α-naphthylisothiocyanate， the activity of alanine transaminase， glutamic oxalacetic transaminase， total bilirubin was decreased significantly （P < 0.05）； Cholecystitis Mixture had marked inhibition effects for inflammations caused by xylene and fever caused by yeast （P < 0.05 or P < 0.01）. Conclusion Cholecystitis Mixture has the effects of choleretic effect， anti-inflammation， removing jaundice and relieving fever.

[Key words] Cholecystitis Mixture； Acute cholecystitis； Liver injury； Pharmacodynamics

按照吉林省对口援疆规划的总体安排和部署，为了充分发挥新疆阿勒泰地区珍贵药材的资源优势，哈医药在疾病治疗、预防保健等方面的传统医药优势，对目前临床使用安全可靠、疗效确切、用量较大的处方做出筛选，帮助新疆人民研究开发哈医药制剂，实现资源共享、互惠互利、共同发展的目标。胆囊炎合剂由一枝蒿、茵陈、大黄、金丝桃、菊苣和绵马贯众六味药制备而成。本方为新疆哈萨克名老中医经验方，临床应用多年，疗效显著。现作为院内制剂进行开发，根据其功能与主治对其进行了药效学的系统研究实验，现将结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 试药

胆囊炎合剂由新疆阿勒泰地区哈萨克医院提供，为棕褐色液体，规格：每瓶100 mL，批号：20131204，临床用量：口服，25 mL/次，2次/d。消炎利胆片由广州白云山和记黄埔中药有限公司生产，规格：薄膜衣小片（0.26 g，相当于饮片2.6 g），产品批号：G2A009，功能主治：清热、祛湿、利胆，用于肝胆湿热所致的胁痛、口苦、急性胆囊炎、胆管炎见上述证候者，用法用量：口服，6片/次，3次/d。

1.2 动物

昆明种大鼠，体重160～200 g，雄性，小鼠，体重22～25 g，均购自吉林大学白求恩医科大学动物实验中心，合格证号：SCXK（吉）2008-0005；豚鼠，自由摄食饮水。豚鼠，体重250～350 g，雄性，购自长春生物制品研究所有限责任公司，合格证号：SCXK（吉）2008-0003。

1.3 方法

1.3.1 对石胆酸所致豚鼠急性胆囊炎的影响[1-3] 取60只豚鼠随机分成6组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性药对照组（消炎利胆片0.8 g/kg）、胆囊炎合剂高、中、低剂量组（12、6、3 mL/kg），每组10只。除正常对照组外，每组按100 mg/kg腹腔给予豚鼠胆石酸（LCA），每日1次，连续16 d，正常对照组等容量灌服常水，自由采食和饮水，供给充足青菜。造模后每组给予相应药物（正常对照组和模型对照组给予等容量常水），每日1次，连续给药15 d，处死前1 d称体重，禁食16 h。第15天，药后1 h处死豚鼠，用注射器吸取胆囊胆汁计量，取肝脏称重。胆囊组织用10%甲醛液（FAA）固定以备进行组织病理学检验。

1.3.2 对大鼠四氯化碳（CCl4）急性肝损伤模型的保护作用[4-13] 取60只大鼠随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性药对照组（消炎利胆片1 g/kg）、胆囊炎合剂高、中、低剂量组（14、7、3.5 mL/kg），每组10只，每天给药1次，连续10 d。末次给药后1 h，给大鼠（正常对照组除外）腹腔注射5 mL/kg、2% CCl4花生油，20 h后断头取血，分离血清，测定血清谷丙转氨酶（ALT）及血清谷草转氨酶（AST）含量。

1.3.3 对α-萘异硫氰酸酯（ANIT）致黄疸型肝损伤小鼠的保护作用[14-18] 将60只小鼠随机分成6组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性药对照组（消炎利胆片1.4 g/kg）、胆囊炎合剂高、中、低剂量组（20、10、5 mL/kg），每组10只，每天给药1次，连续10 d。末次药后1 h，正常对照组灌胃给予花生油，其余各组灌胃给予ANIT 40 mg/kg（花生油配制），造成小鼠急性肝损伤模型，16 h（禁食不禁水）后摘眼球采血，分离血清，检测血清ALT、AST、总胆红素（TB）。

1.3.4 对二甲苯所致小鼠耳水肿的影响[19-22] 取50只雄性小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、阳性对照药组（消炎利胆片1.4 g/kg）、胆囊炎合剂高、中、低剂量组（20、10、5 mL/kg），每组10只，每天给药1次，连续10 d。末次给药40 min后，于小鼠左耳涂二甲苯20 μL，20 min后处死小鼠，利用9 mm铁冲下动物左右耳，以动物左右耳片重之差值作为肿胀度。

1.3.5 对酵母所致大鼠发热的影响[23-26] 取肛温正常的雄性大鼠60只，随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性药对照组（消炎利胆片1 g/kg）、胆囊炎合剂高、中、低剂量组（14、7、3.5 mL/kg），每组10只，每天给药1次，连续10 d。末次给药前4 h以15 mL/kg皮下注射20%干酵母，于注射前测量正常肛温2次，取其均值作为正常体温，并于给药后1、2、3 h各测动物肛温1次，测量值与正常值之差为发热度。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0对所得数据进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，计数资料采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对石胆酸所致豚鼠急性胆囊炎的影响

结果表明，模型对照组胆囊壁明显增厚，多数黏膜增生，甚或增生的黏膜连接成网，少数黏膜下血管扩张充血明显，伴不同程度水肿及大量以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，炎性反应重者胆囊内看见红染的絮状物质和脱落坏死的黏膜上皮，见图1A。正常对照组豚鼠胆囊可见四层结构，黏膜层上皮规整，为单层立方状，黏膜下层、肌层及外膜未见明显炎细胞浸润及血管扩张充血及出血改变，为豚鼠正常胆囊组织结构，见图1B。模型复制成功，胆囊壁增厚，黏膜上皮增生伴黏膜下血管扩张充血及炎症细胞浸润符合胆囊炎改变，试验药的高剂量对胆囊炎有明显的改善作用，阳性药和试验药的中剂量对胆囊炎改善作用次之，试验药的低剂量组效果最差，见图1C～F。

与模型对照组比较，胆囊炎合剂高、中剂量组可明显降低由石胆酸所致的急性胆囊炎，豚鼠的肝脏指数明显降低，胆汁量也明显减少，表明胆囊炎合剂具有明显的利胆作用，见表1。与模型对照组比较，胆囊炎合剂高剂量组对石胆酸引起的豚鼠胆囊炎有较好的治疗作用，见表2。

2.2 对大鼠四氯化碳急性肝损伤模型的保护作用

CCl4致小鼠急性肝损伤模型是经典化学性肝损伤动物模型。CCl4在肝细胞内经细胞色素P450激活生成大量自由基，破坏肝细胞膜，导致转氨酶释放入血。AST、ALT是反映肝损伤最早的、最敏感的指标[5]。当肝受到损害时AST、ALT从肝细胞内逸出而进入血液，致使血清中两者含量升高，其升高程度与肝损伤程度呈正相关。由表3结果可见，给予CCl4后，模型对照组大鼠血清ALT、AST明显升高，胆囊炎合剂能明显对抗这种改变，且以高剂量尤为显著，说明其对CCl4造成的大鼠急性肝损伤具有明显的保护作用。

2.3 对α-萘异硫氰酸酯所致小鼠黄疸型肝损伤的影响

ANIT是一种造成胆汁瘀积的毒物。据文献报道，ANIT于小鼠中毒后48～72 h肝损伤明显，肝细胞变性坏死，小叶间胆管增生，胆管上皮细胞肿胀，部分坏死的上皮细胞脱落后阻塞胆管，导致血清AST、ALT、TB显著升高，可作为退黄药物研究的模型[15]。由表4结果可见，给予ANIT后，模型组小鼠血清ALT、AST、TB明显升高，而胆囊炎合剂能明显对抗这种改变，且以高剂量表现最佳，说明其对ANIT造成的黄疸型急性肝损伤有明显的保护作用，具有一定退黄作用。

2.4 对二甲苯所致小鼠耳水肿的影响

二甲苯致小鼠耳肿胀是用于研究炎症的常见动物模型[19]。表5结果表明，与正常对照组比较，胆囊炎合剂对二甲苯引起的小鼠耳水肿具有明显的抑制作用，且以高、中剂量最为显著。

2.5 对酵母所致大鼠发热的影响

酵母致大鼠发热模型是一种常用的发热模型，由其所致发热的动物全身表现与临床常见明显炎症的里热证类似，常用于考察清热类中药的解热作用[23]。表6结果表明，胆囊炎合剂具有一定的解热作用，且以高、中剂量作用最好。

3 讨论

本实验采用石胆酸所致急性胆囊炎模型，模型对照组与正常对照组比较胆囊壁明显增厚，多数黏膜增生，甚或增生的黏膜连接成网，少数黏膜下血管扩张充血明显，伴不同程度水肿及大量以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，炎性反应重者胆囊内看见红染的絮状物质和脱落坏死的黏膜上皮。实验结果表明胆囊炎合剂能明显降低由石胆酸所致的急性胆囊炎，豚鼠的肝脏指数明显降低，胆汁量也明显减少。

采用CCl4致大鼠急性肝损伤模型，在本研究中，模型组小鼠血清生化指标ALT、AST活性明显增强，胆囊炎合剂可明显降低CCl4所致肝损伤模型大鼠血清中ALT和AST的活性水平，减轻病理改变，表明胆囊炎合剂对CCl4诱导的肝细胞损伤具有保护作用。

采用ANIT灌胃给药诱发大鼠黄疸型急性肝损伤模型。结果显示，与正常组比较，模型组大鼠毛发凌乱、无光泽，活动量及进食均减少，小便呈深黄色，体重下降显著，而肝重、肝指数均显著升高，胆囊炎合剂能有效降低血清转氨酶、胆管酶及胆红素水平。表明胆囊炎合剂对ANIT造成的黄疸型急性肝损伤有明显的保护作用。

上述结果显示，胆囊炎合剂对急性和慢性胆囊炎、急性黄疸型肝炎有很好的治疗作用。本研究内容为下一步的开发利用提供了详实的研究数据。

[参考文献]

[1] 余成浩，文昌凡，张宏，等.清胆颗粒利胆作用的实验研究[J].四川动物，2005，24（4）：628-630.

[2] Staudinger JL，Goodwin B，Jones SA，et al. The nuclear receptor PXR is a lithocholic acid sensor that protects against liver toxicity [J]. Proc Natl Acad Sci USA，2001，98（6）：3369-3374.

[3] Xie W，Radominska-Pandya A，Shi Y，et al. An essential role for nuclear receptors SXR/PXR in detoxification of cholestatic bile acids [J]. Proc Natl Acad Sci USA，2001， 98（6）：3375-3380.

[4] 张海燕，温韬，卢静，等.四氯化碳诱导大鼠慢性肝损伤模型方法的探讨[J].实用肝脏病杂志，2009，1（30）：161-163.

[5] 周琼，刘芳萍，刘颖姝，等.四氯化碳致小鼠急性肝损伤动物模型建立方法的研究[J].东北农业大学学报，2012， 43（6）：77-81.

[6] 黎旸，李瑾翡，蒋忠军，等.CCl4致小鼠急性肝损伤模型的研究[J].热带医学杂志，2010，10（6）：657-659.

[7] 陈壮，肖刚.救必应对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用[J].中国医药导报，2012，9（26）：15-17.

[8] 庞文萧，李勇军，李勇文，等.蝉翼藤中甲基阿魏酸对CCl4致急性肝损伤小鼠模型的影响[J].中国药房，2015， 26（1）：21-24.

[9] 黄铁军，余琼华，戴列军.虾青素对四氯化碳诱导的慢性肝损伤大鼠的保护作用[J].实用肝脏病杂志，2014，17（4）：404-407.

[10] 童方念，罗超，罗丹，等.山奈酚对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用[J].西安交通大学学报，2014，35（6）：816-819.

[11] 阮浩澜，陈琪，黎旸，等.清开灵注射液护肝药效限值测定法的建立[J].中国医药导报，2013，10（27）：98-100.

[12] Jiang W，Gao M，Sun S. Protective effect of L-theanine on carbon tetrachloride-induced acute liver injury in mice [J]. Biochem Biochem Biophys Res Commun，2012， 422（2）：344-350.

[13] Liong EC，Xiao J，Lau YH. Cyclooxygenase inhibitors protect d-galactosamine /lipopolysaccharide induced acute hepatic injury in experimental mice model [J]. Food Chem Toxicol，2012，50（3）：861-866.

[14] 尤梅桂，陈同，倪远宁，等.复方熊去氧胆酸口服液对大鼠淤胆型肝炎的影响[J].中国药科大学学报，2014，45（1）：102-105.

[15] 曹璐，李俊，黄成，等.栀子柏皮汤对α-萘异硫氰酸酯酯诱导的肝内胆汁淤积大鼠的保护作用[J].安徽医科大学学报，2013，48（3）：257-262.

[16] 雷扬，周爱民，郭涛.一种改良的ANIT急性肝损伤方法及痰热清注射液的保护作用[J].中药药理与临床，2014， 30（2）：179-181.

[17] Cullen JM，Falola B，Melich DH，et al. Effects of Kufpper cell depletion on acute alpha-naphthylisothioncyanate-induced liver toxicity in male mice [J]. Toxicol Pathol，2013， 41（1）：7-17.

[18] Wu T，Chang MJ，Xu YJ，et al. Protective effect of calculus bovis sativus on intrahepatic cholestasis in rats induced by α-naphthylisothiocyanate [J]. Am J Chin Med，2013，41（6）：1393-1405.

[19] 欧阳芳，薛敏菲，吴声振.咽一方对小鼠耳肿胀及腹腔毛细血管通透性的影响[J].中国实用医药，2014，9（19）：6-7.

[20] 徐富翠，刘明华，孙玉红，等.青果抗炎镇痛活性部位的筛选研究[J].中药药理与临床，2014，30（6）：121-123.

[21] 钟璐，纪宏宇，王树圆，等.乳癖消颗粒抗炎镇痛作用实验研究[J].中国药师，2015，18（1）：149-151.

[22] 陶小军，闫宇辉，徐志立，等.薏苡仁油抗炎消肿作用研究[J].辽宁中医药大学学报，2015，17（1）：45-46.

[23] 万红叶，孔祥英，李晓敏，等.不同寒热药性中药对酵母致热大鼠体温调节及温度敏感瞬时感受器电位离子通道（TRPs）蛋白的影响[J].中国中药杂志，2014，39（19）：3813-3817.

[24] Habib M，Waheed I. Evaluation of anti-nociceptive，anti-inflammatory and antipyretic activities of Artemisia scoparia hydromethanolic extract [J]. J Ethnopharmacol，2013，145（1）：18-24.

[25] 刘沛，马乐，王琼，等.三黄颗粒中黄芩素代替黄芩苷素的药理比较[J].中成药，2015，37（2）：265-268.

[26] 闫同建，闫萌.青银汤解热、镇痛作用的实验研究[J].海南医学院学报，2015，21（1）：4-6.

（收稿日期：2015-02-06 本文编辑：张瑜杰）