炎性因子对儿童原发性肾病综合征激素抵抗中的意义

欧阳水长

炎性因子对儿童原发性肾病综合征激素抵抗中的意义

欧阳水长

目的 分析炎性因子白细胞介素2（IL-2）、IL-12、IL-13在儿童原发性肾病综合征激素抵抗中的表达意义。方法 选取原发性肾病综合征患儿60例，根据糖皮质激素治疗情况分为激素耐药性肾病综合征(SRNS)组和激素敏感性肾病综合征(SSNS)组，选取同期体检的健康儿童40例，对3组儿童IL-2、IL-12、IL-13水平及其表达进行检测。结果 3组儿童血清中IL-2、IL-12、IL-13水平分别为：正常儿童（98.30±15.60）pg/mL、（6.45±3.08）pg/mL、（47.24±2.85）pg/mL，SSNS组（68.54±6.38）pg/mL、（16.74±3.87）pg/mL、（49.31±3.21）pg/mL，SRNS组（68.32±5.69）pg/mL、（23.45±4.01）pg/mL、（52.29±3.36）pg/mL。SSNS组与SRNS组血清中IL-2均显著低于正常儿童，且2组间对比差异无统计学意义，2组IL-12、IL-13均显著高于正常儿童（P＜0.05），且SRNS组血清中IL-12、IL-13均显著高于SSNS组（P＜0.05）。3组儿童PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表达情况：正常儿童（0.32±0.03）、（0.76±0.18）、（0.35±0.06），SSNS组（0.28±0.04）、（0.85±0.13）、（0.47±0.03），SRNS组（0.27±0.02）、（0.93±0.17）、（0.51±0.05）。SRNS组、SSNS组PBMC IL-2mRNA显著低于对照组且2组间差异无统计学意义，2组PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表达表达均显著高于正常儿童（P＜0.05），且SRNS组各指标显著高于SSNS组（P＜0.05）。结论 原发性肾病综合征患儿均有炎性因子IL-2降低、IL-12、IL-13水平及其表达升高表现，且IL-12、IL-13水平及其表达升高和原发性肾病综合征激素抵抗的发生有密切关系。

原发性肾病综合征；激素抵抗；炎性因子；表达

儿童原发性肾病综合征(PNS)是较为常见的一种泌尿系统疾病，通常需采用糖皮质激素(GC)加以治疗，而部分患儿在GC质量时表现为激素抵抗[1-2]，也即激素耐药性肾病综合征(SRNS)，这不仅会影响到疾病治疗效果，同时也可导致患儿病情逐步进展，因此近年来PNS激素抵抗已引起了高度重视[3]。已有研究表明，白细胞介素等炎性因子再肾小球疾病发病急进展中有重要作用[4]，然而其与肾病综合征患儿激素抵抗之间是否存在相关性并不清楚。本研究通过对60例PNS患儿经GC治疗后是否出现激素抵抗进行分组，同时与健康儿童对比白细胞介素2（IL-2）、IL-12、IL-13水平，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年6～2013年10月瑞金市人民医院收治PNS患儿共60例作为研究对象，患儿均为初发或之前未用过激素及其他免疫抑制剂，排除继发性因素,且无任何并发症，且均经肾脏穿刺活检确诊为PNS。PNS患儿均采用正规GC治疗8周后,根据治疗效果分别分为激素敏感性肾病综合征(SSNS)组及SRNS组。SSNS组36例患儿男20例，女16例，年龄2～11岁，平均（6.9±1.8）岁；病程12d～7年，平均（1.8±1.2）年；SRNS组24例患儿男15例，女9例，年龄1.8～12岁，平均（6.7±1.6）岁；病程13d～6年，平均（1.9±1.4）年；另选择40例健康体检儿童作为健康对照组，男22例，女18例，年龄1.6～12岁，平均（6.6±1.6）岁。各组患者临床资料比较差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法 采集3组儿童清晨空腹状态下的静脉血液3mL与外周血3mL，分装在2个试管中，均在3000r/min速度下进行5min离心，采集上清液并在-70℃冰箱中保存备用。利用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒（上海森雄试剂盒公司制造）对患儿静脉血血清中IL-2、IL-12、IL-13进行检测。采用泛影葡胺-聚蔗糖法分离人外周血单个核细胞（PBMC）并进行培养，利用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测PBMC IL-2mRNA、IL-12mRNA、IL-13mRNA表达情况。RT应用Promega公司所制逆转录试剂盒及Poly A引物，PCR采用上海生工公司试剂盒，自主设计引物序列病采用PE480型扩增仪展开检测。

1.3 观察指标 记录3组儿童血清中IL-2、IL-12、IL-13表达水平及其PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表达情况。

1.4 统计学方法 采用统计学软件SPSS 17.0分析数据，以“x±s”表示计量资料，计量数据对比采用t检验，计数数据对比采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 3组儿童血清中 IL-2、IL-12、IL-13表达情况SSNS组与SRNS组血清中IL-2均显著低于正常儿童（SSNS组与正常儿童对比，t=3.5410，P=0.0205；SRNS组与正常儿童对比，t=3.8842，P=0.0200），且2组间对比差异无统计学意义，血清中IL-12、IL-13均显著高于正常儿童（IL-12：SSNS组与正常儿童对比，t=2.6638，P=0.0362；SRNS组与正常儿童对比，t=6.7451，P=0.0008；IL-13：SSNS组与正常儿童对比，t=1.9325，P=0.0387；SRNS组与正常儿童对比，t=3.8021，P=0.0224），且SRNS组血清中IL-12、IL-13均显著高于SSNS组（P＜0.05）。见表1。

表1 3组儿童血清中IL-2、IL-12、IL-13水平比较（x±s，pg/mL）

2.2 3组儿童 PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表达情况 SSNS组与SRNS组患儿PBMC IL-2mRNA显著低于正常儿童（SSNS组与正常儿童对比，t=2.8850，P=0.0.308；SRNS组与正常儿童对比，t=2.3302，P=0.0395），PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表达水平均显著高于对照组（IL-12mRNA：SSNS组与正常儿童对比，t=3.6620，P=0.0361；SRNS组与正常儿童对比，t=5.2684，P=0.0060；IL-13mRNA：SSNS组与正常儿童对比，t=4.0087，P=0.0105；SRNS组与正常儿童对比，t=3.2208，P=0.0387），2组PBMC IL-2mRNA差异无统计学意义，SRNS组患儿PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表达水平显著高于SSNS组（P＜0.05）。见表2。

表2 3组儿童PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表达情况（x±s）

3 讨论

GC作为PNS最重要和首选的治疗药物在临床上使用已逾半个多世纪。根据对GC的反应,PNS临床上分为SSNS和SRNS[5]。尽管大多数PNS对GC敏感而预后较好;但仍有约20%表现为SRNS预后较差[6]。PNS发展与转归在很大程度上取决于患者对GC治疗敏感或耐药程度,SRNS是引起患者终末期肾脏疾病ESRD的主要原因之一。因此对于肾病综合征耐药机制的研究一直是肾脏病领域的热点问题。

近年来研究显示，SRNS患儿存在IL及其受体等一些免疫指标的改变[7]。为探讨炎性因子在INS激素抵抗中的意义，笔者对60例PNS患儿与40例正常儿童血清IL-2、IL-12、IL-13水平与PBMC IL-2mRNA、PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA表达情况展开分析。IL-2是Th1类细胞因子，为免疫调节网络中主要细胞因子，可对诸多免疫细胞加以激活，有较高的免疫效应及应答，同时可诱导细胞因子等诸多免疫活性物质的生成，经复杂免疫调节作用，可促使人体免疫状态得到改善。在本研究中SSNS组与SRNS组血清中IL-2、PBMC IL-2mRNA均显著低于正常儿童，说明IL-2表达减少和PNS发病之间有一定联系。同时SRNS组、SSNS组IL-2及其表达差异无统计学意义，从中无法推断IL-2是否和PNS激素抵抗之间是否有关。IL-13是由活化Th2细胞生成，有免疫调节与免疫抑制作用，已有研究发现肾病患儿B细胞表达IL-13R升高，最终发现肾病患儿IgE、IgG4过度增生和IL-13之间有密切联系[8]。IL-12属于另一种重要细胞因子，对于Th1/Th2分化有重要调控作用，有研究显示活动性狼疮肾炎患者有IL-12mRNA过度表达现象[9]。本研究结果显示，SRNS组、SSNS组IL-12、IL-13及PBMC IL-12mRNA、PBMC IL-13mRNA均显著高于正常儿童，且SRNS组血清中IL-12、IL-13及SRNS组、SSNS组均显著高于SSNS组。从中可以看出，IL-12、IL-13及其表达与PNS的发病密切相关，同时二者表达水平升高是造成PNS激素抵抗的重要原因。

综上所述，PNS患儿均有炎性因子IL-2降低、IL-12、IL-13水平及其表达升高表现，且IL-12、IL-13水平及其表达升高与PNS激素抵抗的发生有密切关系。

[1] 彭华保，易著文，何庆南，等.儿童原发性肾病综合征激素抵抗与糖皮质激素受体基因多态性的相关性[J].中国当代儿科杂志，2004，6（4）：274-276.

[2] 陈春梅，夏运成.原发性肾病综合征激素抵抗的研究现状[J].广东医学，2014，35（3）：461-464.

[3] 孙忠康.补阳还五汤加减治疗难治性肾病综合征激素抵抗型21例观察[J].当代医学，2012，18（3）：161-162.

[4] 刘艾芹，于磊，李晖云，等.原发性肾病综合征患者外周血T淋巴细胞亚群变化及临床意义[J].河北医学，2014，20（3）：458-459.

[5] 乔丽，李荣发，曹礼应，等.激素抵抗肾病综合征患者激素受体和细胞因子的表达及意义[J].西南国防医药，2010，20（11）：1188-1189.

[6] 陈春梅，夏运成.原发性肾病综合征激素抵抗的研究现状[J].广东医学，2014，35（3）：461-462.

[7] 李宇颖，刘素雁，刘晓刚.原发性肾病综合征患者血清IL-2 、IL-13的研究[J].哈尔滨医科大学学报，2005，39（2）：190-193.

[8] 中华医学会儿科学会肾脏病学组．小儿肾小球疾病的临床分类、诊断及治疗[J]．中华儿科杂志，2001，39(12)：746.

[9] 张曲矗，陆进明，盛君，等.SLE患者血清及外周血单个核细胞中IL-12、IL-18的检测及临床意义[J].山东医药，2010，50（29）：13-14.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.26.035

江西 342500 瑞金市人民医院儿科 （欧阳水长）