丹参注射液对脑梗死大鼠外周血NSE及NGF水平的影响

唐 映,杨万章,刘杰文

丹参注射液对脑梗死大鼠外周血NSE及NGF水平的影响

唐 映1,杨万章2,刘杰文3

目的观察丹参注射液对脑梗死大鼠外周血神经元特异性烯醇化酶(NSE)及神经生长因子(NGF)水平的影响。方法将符合标准模型-大脑中动脉闭塞(MCAO)的24只大鼠分为丹参注射液组、生理盐水组,另随机取12只大鼠为假手术组。丹参注射液组每天注射丹参注射液2 ml,生理盐水组每天注射生理盐水2 ml,假手术组不用药。观察治疗前,治疗后7 d、14 d,外周血NSE、NGF水平及神经功能缺损评分(mNSS)。结果 丹参注射液组NSE水平7 d、14 d均低于生理盐水组和假手术组;NGF水平7 d变化不大,14 d均高于生理盐水组和假手术组。mNSS评分较于生理盐水组明显下降。结论 丹参注射液能降低NSE水平,调高N GF含量,促进脑梗死大鼠神经功能恢复,其重要机制考虑与丹参注射液能改善细胞缺血缺氧状态,减少神经元细胞的损伤、变性坏死有关,其中外周血NSE、NGF水平对脑梗死预后判断有积极的临床意义。

脑梗死;神经元特异性烯醇化酶;神经生长因子;丹参注射液

丹参是传统中药中公认的对脑梗死最有效的药物之一,具有活血化瘀的作用,现代医学认为能够改善微循环,提供局部血供量、抗氧化、抑制血小板聚集、改变血黏度等作用。丹参注射液不但对血管内皮生长因子(VEGF)及脑源性神经生长因子(BDNF)有积极作用,还能促进双侧脑室室管膜下区(SVZ)神经细胞增殖[1,2]。

神经元特异性烯醇化酶(NSE)是参与糖酵解途径的烯醇化酶,脑神经细胞损害后,NSE从胞质释放至脑脊液,同时通过损伤的血脑屏障进入血液循环,脑组织损伤越重,NSE释放越多。本研究观察丹参注射液对急性脑梗死大鼠外周血NSE及NGF的影响,探讨丹参注射液治疗脑梗死的机制作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取健康成年雄性SD大鼠60只 (广州中医药大学实验动物中心提供),体重250 g～ 300 g,饲养于正常昼夜环境中,给予标准饲料和水。

1.2 脑梗死大鼠模型 采用改良颈总动脉线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉闭塞模型致局灶性永久性脑缺血梗死模型。大鼠手术后12 h根据Zea lLonga 5分制评分标准进行神经功能学评分,丹参注射液组及生理盐水组均选取1分～3分为实验对象,假手术组只剪开颈部中央,暴露颈总动脉和颈内动脉,但不予大脑中动脉阻断。

1.3 纳入标准 剔除因麻醉意外、手术死亡和未达标的大鼠。将符合标准模型的24只大鼠分为丹参注射液组、生理盐水组;另随机取12只大鼠为假手术组。

1.4 治疗方法 丹参注射液组:入选大鼠12 h后使用丹参注射液(杭州正大青春宝药业公司生产批号: 1208181)2 ml腹腔注射,每日1次,连续14 d。生理盐水组:入选大鼠12 h后使用生理盐水2 ml腹腔注射,每日1次,连续14 d。假手术组:不使用任何药物。

1.5 评定指标

1.5.1 神经功能缺损指标评定 采用改良神经功能缺损评分(m NSS),分别在模型制备后24 h,治疗7 d、14 d后评定。评分0～18分,分数越高,表明神经功能缺损越严重。

1.5.2 外周血NSE、NGF指标 模型制备后24 h 1 d、7 d、14 d,分别在大鼠眼眶后静脉丛采取静脉血2 ml,分离出血清后置-80°冰箱保存备用。NSE、NGF均采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,试剂盒由美国Rapidbio公司提供。

1.6 统计学处理 采用统计软件SPSS 16.0进行处理,计量资料以均数±标准差(±s)表示,满足正态性和方差齐性后采用配对t检验;不满足正态性和方差齐性时采用秩和检验。

2 结 果

丹参注射液能降低脑梗死大鼠外周血NSE水平(见表1),提高血液中NGF水平(见表2)。丹参注射液治疗脑梗死SD大鼠,7 d后随着脑神经元细胞损伤的增加,血清释放的NSE明显升高,2周后NSE逐渐下降,同时血液中NGF含量较前升高,明显优于对照组。丹参注射液组神经功能缺损评分显著下。

表1 3组血清NSE浓度比较(±s)μg/L

表1 3组血清NSE浓度比较(±s)μg/L

1 d 7 d 14 d丹参注射液组12 9.03±0.27 12.86±0.391)2)10.71±0.19组别n生理盐水组 12 8.94±0.26 15.73±0.581)2)13.79±0.231)2)假手术组 12 9.04±0.47 8.97±0.155 9.01±0.02与假手术组比较;1)P<0.01;与生理盐水组比较,2)P< 0.01。

表2 3组血清NGF浓度比较(±s)ng/ml

表2 3组血清NGF浓度比较(±s)ng/ml

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表3 3组神经功能缺损评分比较(±s)分

表3 3组神经功能缺损评分比较(±s)分

1 d 7 d 14 d丹参注射液组12 10.49±0.76 6.47±1.271)4.43±0.721)2)组别n生理盐水组12 10.20±1.03 8.93±0.66 7.09±0.822)与生理盐水组比较,P<0.05;与本组治疗7 d时比较,2) P<0.05

3 讨 论

脑梗死(ACI)是由于脑组织局部供血动脉血流的突然减少或停止,造成该血管供血区的脑组织缺血、缺氧,脑组织坏死、软化。NSE存在于神经组织和神经内分泌组织中,在缺血缺氧24 h内,NSE弥散至细胞间隙,导致NSE应激性升高,颅内水肿范围扩大,颅内压增高,NSE高水平持续,2周后才开始下降。NSE可作为判断脑梗死患者病情严重程度、临床转归及预后的重要生化指标[3]。脑梗死大鼠血清NSE浓度在起病1 d、3 d、7 d均显著升高,经神经节苷脂治疗后其表达水平明显下降[4]。Chabok等[5]认为NSE是脑损伤的早期生物标记物,甚至头颅CT上无明显改变时,血浆中的NSE水平已明显升高。在缺血性卒中中,NSE水平与梗死体积及神经功能缺损评分有关,NSE能够作为评价ACI患者预后的有效指标[6-8]。

NGF是一种可促进与维持神经生长、分化的特殊蛋白,Lu jan等[9]与de Laporte等[10]对脊髓损伤大鼠神经的NGF总RNA分析发现,脊髓损伤4 d后,其受伤区域NGF受体RNA的表达量明显升高,脊髓损伤后7 d达高峰,脊髓损伤后28 d,其表达量仍然高于正常水平,证实脊髓受伤后局部NGF增高与其髓内神经损伤有一定相关性,这提示神经营养因子表达上调可能是限制神经细胞凋亡过程的内在机制。电针夹脊穴治疗后,损伤段脊髓组织中的NGF含量多,使受损脊髓神经元及其神经通路得到明显修复[11]。乌芪通络胶囊使大鼠坐骨神经细胞中NGFm RNA的量显著增高,也证实NGF提高能增强神经功能修复[12]。NGF含量的改变及脑缺血的病理变化与脑缺血区神经元变性、坏死密切相关[13]。运动训练能促进SD大鼠脑组织NGF含量增加,从而较快使大鼠运动功能恢复[14]。丹参能降低血黏度,改善细胞缺血缺氧状态,促进血管侧支循环的建立。丹参注射液能改善脑梗死SD大鼠神经功能,NSS、m NSS评分下降,上调脑组织VEGF水平,促进SVZ内NSCs增殖。

本研究证实丹参注射液不但能降低脑梗死大鼠外周血NSE水平,同时能提高血液中NGF水平。丹参注射液治疗脑梗死SD大鼠,7 d后随着脑神经元细胞损伤的增加,血清释放的NSE明显升高,2周后NSE逐渐下降,同时血液中NGF含量较前升高,明显优于对照组,考虑丹参注射液通过改善细胞缺血缺氧状态,推迟和减少脑部神经元细胞的损伤、变性坏死,缩小脑神经细胞坏死范围,挽救濒死神经细胞,减少NSE的释放;提高神经细胞周围NGF营养因子的含量,保证缺血灶区神经元细胞的营养,支持神经元的营养存活,加速神经细胞的生长和修复,NGF的上调也抑制了细胞凋亡的发生,促进大鼠神经运动功能的进一步恢复, m NSS评分明显下降。

外周血NSE及NGF检测简单易行,且能较敏感推断病情发展和预测病后恢复。

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[3] 李辉华,李名生.神经元特异性烯醇化酶与急性脑梗死的相关性研究[J].中国医药科学,2013,3(23):12-14.

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Effect of Danshen Injection on the Levels of Blood NSE and NGF in Rats with Cerebral Infarction

Tang Ying,Yang Wanzhang,Liu Jiewen
The Ninth Peop le’s Hospita l of Shenzhen,Shenzhen 518116,Guangdong,China

ObjectiveTo observe the e ffect of Danshen in jection(DSI)on the levels of blood neuron-specific enolase(NSE)and nerve grow th factor(NGF)in rats with cerebral infarction(CI).MethodsTwenty-four with the standard m ode l-m idd le cerebra lartery occlusion(MCAO)were divided into DSIgroup,saline group and the other 12 rats were randomly selected for the shamgroup. DSIgroup were injected with DSI 2 mldaily,saline group were injected with saline 2 ml daily and shamgroup withoutmedicine.The levels of blood NSE,NGF,and neurological deficits scores m NSS were observed before treatment,after 7 days,14 days.ResultsThe leve ls of blood NSE in DSIgroup a fter 7 days,14 days were lower than that in sa line group and shamgroup.The leve ls of blood NGF in DSIgroup a fter 7 days,14 days were higher than that in sa line group and shamgroup.The m NSS scores in DSIgroup were lower than that in saline group.Conc lusionDSIcan reduce the levels of b lood NSE,increase the NGF,and promote the recovery in rats with acute cerebral infarction.

cerebral infarction;neuron-specific enolase;nerve grow th factor;Danshen injection

R743 R289

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2015.05.013

1672-1349(2015)05-0597-03

2014-11-09)

(本文编辑 王雅洁)

广东省中医药管理局资助课题项目(No.20132021)

1.深圳市第九人民医院龙岗中心医院(深圳518116), E-m ail:fengqin361@163.com;2.深圳市第六人民医院南山区人民医院;3.深圳市第五人民医院罗湖区人民医院