过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面信号淋巴细胞激活分子的表达

杨珺，耿丽娜，彭辉勇，马永明，许化溪，王胜军

（1.江苏大学附属人民医院检验科，江苏镇江212002；2.江苏大学医学院检验医学研究所，江苏镇江212013）

过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面信号淋巴细胞激活分子的表达

杨珺1，2，耿丽娜1，2，彭辉勇1，2，马永明1，许化溪2，王胜军1，2

（1.江苏大学附属人民医院检验科，江苏镇江212002；2.江苏大学医学院检验医学研究所，江苏镇江212013）

目的：探讨信号淋巴细胞激活分子（signaling lymphocytic activation molecule，SLAM）在过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面的表达及意义。方法：选择18例过敏性鼻炎患者和16例健康体检者，淋巴细胞分离液分离提取外周血单个核细胞，流式细胞术检测CD4+T细胞表面SLAM的表达；同时，采用ELISA法检测血浆中IgE的表达；分析CD4+T细胞表面SLAM表达与血浆中IgE表达的相关性。结果：过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM的表达水平明显低于健康体检者（t=2.29，P＜0.05），而IgE水平明显高于健康体检者（t=2.740，P＜0.01）；过敏性鼻炎患者血浆中IgE的表达与CD4+T表面SLAM的表达呈负相关（r=-0.484 8，P＜0.05）。结论：过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM表达降低，在一定程度上可反映疾病的严重程度。

过敏性鼻炎；CD4+T细胞；信号淋巴细胞激活分子

过敏性鼻炎患者机体接触过敏原后，产生特异性IgE并介导Ⅰ型超敏反应引起一系列鼻炎症状，包括鼻塞、鼻痒、喷嚏、清涕，鼻黏膜苍白等［1］，其外周血中CD4+T细胞亚群比例发生变化，细胞因子的产生发生紊乱，即Th1/Th2免疫失衡，Th2免疫反应占优势，Th2类细胞因子IL-4、IL-5、IL-13等分泌增加，从而促进B细胞分泌IgE［2］。信号淋巴细胞激活分子（signaling lymphocytic activation molecule，SLAM）是一种细胞膜表面糖蛋白，属SLAM家族的第1个成员，又称CD150，表达于B细胞、T细胞、单核细胞等表面，参与免疫突触形成，传递TCR共刺激信号［3］。体外SLAM单克隆抗体刺激可诱导外周血T细胞产生IFN-γ，进而使Th2克隆向以产生IFN-γ为特征的Th1克隆转变［4］，不利于IgE的产生。因此，我们猜测过敏性鼻炎患者体内SLAM表达可能发生改变，从而影响Th1/Th2平衡及IgE的表达。本实验拟采用流式细胞术检测SLAM在过敏性鼻炎患者体内CD4+T细胞表面的表达变化并分析其与疾病状态间的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2014年4月至7月江苏大学附属人民医院确诊的过敏性鼻炎患者18例，表现有鼻痒、喷嚏、大量清涕等过敏症状，可见鼻黏膜苍白；年龄18～52岁，其中，男6例，女12例。另选健康体检者16例作为对照组，无过敏性疾病史及症状。

1.2 材料与方法

1.2.1 外周血单个核细胞提取 采集肘静脉血2 mL，K2EDTA抗凝，离心后移去上层血浆，PBS 1∶1稀释血细胞，缓慢加入人淋巴细胞分离液（Ficoll分离液，天津灏洋生物技术有限公司），400×g离心20 min，吸取中间白膜层分离出外周血单个核细胞（PBMC），1 mL PBS洗涤2遍，弃上清液，加入100 μL PBS重悬细胞。

1.2.2 流式细胞术检测CD4+T细胞表面SLAM的表达 表面染色采用PE-Cy5标记的抗人CD3抗体（eBioscience公司），APC标记的抗人CD4抗体（BioLegend公司），PE标记的抗人SLAM（CD150）抗体（eBioscience公司），同型抗体采用小鼠IgG1，κIso对照（eBioscience公司）。将抗体加入细胞悬液，4℃避光孵育30 min。1mL PBS洗涤2遍，弃上清液，加入300μL PBS重悬细胞。用流式细胞仪（FACSCalibur，BD公司）进行检测分析。

1.2.3 ELISA检测血浆IgE 采用IgE检测试剂盒（eBioscience公司），按照说明书操作进行检测。

1.3 统计学分析

采用GraphPad Prism 5软件分析实验数据，数据用均数±标准差表示，两组间均数比较采用独立样本t检验，相关性分析采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血中CD4+T细胞表面SLAM的表达

流式细胞术检测结果显示，与健康体检者比较，过敏性鼻炎患者CD4+T表面SLAM的表达明显降低（t=2.29，P＜0.05）。见图1。

图1 过敏性鼻炎患者CD4+T细胞表面SLAM的表达

2.2 血浆中总IgE的表达

ELISA检测结果显示，与健康体检者比较，过敏性鼻炎患者血浆中总IgE的表达水平明显上升（t= 2.740，P＜0.01）。见图2。

2.3 血浆中IgE表达与CD4+T细胞表面SLAM表达的相关性

相关性分析结果显示，过敏性鼻炎患者血浆中IgE的表达与外周血CD4+T细胞表面SLAM的表达呈负相关（r=-0.484 8，P＜0.05）。见图3。

图2 血浆总IgE的表达

图3 过敏性鼻炎患者血浆IgE与SLAM表达的相关性

3 讨论

SLAM是属于免疫球蛋白超家族CD2亚型的一类表面受体［5］，通过SH2区域与衔接蛋白SAP相结合，招募活化PKC-θ和BCL10，从而增强NF-κB的活化并影响下游分子的表达；SLAM可通过共刺激信号引起T细胞增殖，并根据不同的刺激调节CD4+T淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞相关的细胞因子的分泌；此外，SLAM还与生发中心的形成和免疫球蛋白的产生有关［6］。研究发现，在一些自身免疫性疾病中SLAM表达升高，如实验性狼疮小鼠以及人多发性硬化症［7］。在类风湿关节炎患者的滑膜液中也发现表达升高的可溶性SLAM［8］。上述研究提示SLAM分子在免疫失调性疾病的发生发展中起重要作用。

本研究结果表明，与健康体检者相比，过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM的表达明显降低。研究表明，初始T细胞、TCRγδ+T细胞和B细胞经激活后，细胞表面SLAM表达迅速增加；采用SLAM单克隆抗体体外刺激可引起T细胞增殖，并促进活化的T细胞分泌IFN-γ，且在SLAM特异性单克隆抗体刺激下，即使是抗原特异的Th2也会发生该改变［4］。研究发现，从特应性皮炎患者皮损组织中分离出的呈高度极化状态的抗原特异性Th2细胞在接受体外SLAM刺激后可转变成高表达IFN-γ的细胞群，并且该细胞群在与纯化的B细胞进行共培养时无法诱导B细胞分泌IgE［9］。以上研究提示SLAM刺激可使Th2向Th1发生转变，从而抑制IgE的产生。由此我们猜测，过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM表达降低导致IFN-γ产生减少，从而使CD4+T细胞向Th1细胞分化的能力降低，而向Th2细胞分化增强，最终促进IgE产生。本研究ELISA结果表明，过敏性鼻炎患者血浆中IgE呈高表达，且IgE表达与CD4+T细胞表面SLAM表达呈负相关。这一结论支持了上述CD4+T细胞表面SLAM表达降低可促进IgE产生的猜测；同时IgE作为评价过敏性疾病的指标之一，可反映疾病的严重程度，SLAM与IgE之间明显的相关性提示SLAM在一定程度上反映过敏性疾病的状态。

但目前关于SLAM的研究仍然存在大量争议。有研究发现，在SLAM基因缺陷的小鼠中，其CD4+T细胞分泌IL-4和IL-13水平下降，IFN-γ水平上升［10］，在其下游信号SAP、Fyn基因缺陷的小鼠中也发现了类似现象，说明SLAM及其相关信号通路与Th2细胞释放因子有关。我们猜测这一差异可能是由于动物与人类之间种属不同或基因缺陷小鼠并不能完全模拟人体内SLAM降低的内环境引起。

本研究证实过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM表达降低，SLAM是否通过调节IFN-γ的表达来发挥作用以及具体机制尚待进一步研究与证实。

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Signaling lym phocytic activation molecule expression on CD4+T cells surface in patients w ith allergic rhinitis

YANG Jun1，2，GENG Li-na1，2，PENG Hui-yong1，2，MA Yong-ming1，XU Hua-xi2，WANG Sheng-jun1，2
（1.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated People′s Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212002；2.Institute of Laboratory Medcine，School of Medicine，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013，China）

Objective：To explore the changes of signaling lymphocytic activationmolecule（SLAM）expression on CD4+T cells surface in patientswith allergic rhinitis and the relationship between SLAM expression and the disease state.M ethods：Eighteen patients with allergic rhinitis and sixteen healthy controls were enrolled in the study.PBMCwere isolated from the whole blood by Ficoll gradient centrifugation.The expression of SLAM on CD4+T cell surfacewas assessed by using flow cytometry，the expression of plasma IgE was tested by ELISA.Then we analyzed the correlation between SLAM expression and plasma IgE level.Results：Compared with the healthy controls，the expression of SLAM on CD4+T cell surface was significantly decreased in allergic rhinitis patients（t=2.29，P＜0.05），but the plasma IgE level was significantly increased（t=2.740，P＜0.01）；and therewas a negative correlation between SLAM expression and plasma IgE level（r=-0.484 8，P＜0.05）.Conclusion：Patientswith allergic rhinitis showed low expression of SLAM in CD4+T cells in peripheral blood，which might reflect the disease severity to some extent.

allergic rhinitis；CD4+T cells；signaling lymphocytic activation molecule

R392.8

A

1671-7783（2015）04-0346-03

10.13312/j.issn.1671-7783.y150120

国家自然科学基金资助项目（31470881）；教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助项目（20133227110008）

杨珺（1988—），女，硕士研究生；王胜军（通讯作者），教授，博士生导师，E-mail：sjwjsu@aliyun.com

2015-06-01 ［编辑］ 刘星星