蒙药忠伦阿汤的长期毒性实验研究△

湛春波 董秋梅 郝 华 刘春慧 王 琦 屈爱桃 邢雅儒 陈 琨

(1.内蒙古医科大学2011 级研究生，内蒙古 呼和浩特 010110;2.内蒙古医科大学中医学院，内蒙古 呼和浩特010110;3.内蒙古医科大学2012 级研究生，内蒙古 呼和浩特010110;4.内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特010110 5.赤峰市第二蒙医中医医院，内蒙古 赤峰 024000;)

蒙药忠伦阿汤由栀子、诃子、川楝子、苦参和地格达(蒙药又名当药、紫花地丁)5 味药组成，具有清热、凉血、舒筋、止痛功效，是传统蒙医治疗热性黄水病，游痛证、痛风等的常用方剂［1］，其症状病程相当西医学的类风湿关节炎、急性风湿热等，目前国内已有报道，在临床上使用忠伦阿汤原方及加减类方在治疗风湿免疫病、骨关节炎等方面具有一定疗效［2］。既往的基础研究已表明蒙药忠伦阿汤抗炎镇痛作用明确，并能抑制胶原诱导性关节炎大鼠模型的足肿胀，具有较好的抑制肿瘤坏死因子、白介素等免疫炎症的作用［3］。本研究旨在观察药物实验大鼠的长期毒性，为进一步指导临床合理用药提供依据，现将实验结果报道如下。

1 材 料

1.1 实验药物：忠伦阿汤散，蒙药复方制剂，黄色粉末，味苦，由内蒙古国际蒙医院提供，生产批号：20121216 规格：3g/袋，每袋含生药3g，临床成人用药剂量为：1 袋/次(3g/次)，2 次/日。

1.2 实验动物：Wistar 大鼠80 只，雌雄各半，由内蒙古大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK(蒙)2002-0001，清洁级。

2 方 法

2.1 动物饲养室环境：动物实验观察室温度为(18 ±2)℃，相对湿度为40% ～60%，动物饲养于独立通风隔离笼具中。

2.2 实验过程

2.2.1 动物分组：Wistar 大鼠80 只，雌雄各半，按体重随机分组，分高剂量组、中剂量组、低剂量组、空白对照组共4组，每组雌鼠10 只，雄鼠10 只，雌雄分笼饲养，每笼5 只。

2.2.2 实验药物煎煮配置方法、药物浓度及给药剂量的确定：忠伦阿汤散剂分别按大鼠临床等效给药剂量的50 倍、25 倍、12.5 倍作为高、中、低各组的给药剂量，耐药倍数取近似值6，每星期称体重1 次，按体重调节给药剂量，实验药物轻煎冷却至室温后萃取上清液，按实验要求蒸发掉多余水分，至所需体积后放入4℃冰箱备用，每日定时灌胃2次。

2.2.3 实验方法：研究方法参考彭城［5］《中医药动物实验基本技术方法》，及陈奇《中药药理研究方法学》［6］。长期毒性实验给药15 周后停药，每组随机抽取10 只大鼠做血常规，血液生化指标分析，并解剖，相关脏器称重，计算脏器系数，将所取脏器进行固定，准备进行病理组织学实验观察，余下大鼠停止灌胃给药，正常饲养2 周进行解剖观察。

2.2.4 观测指标：一般情况：每天2 次灌胃后观察大鼠的反应，包括自主活动，精神状态、饮水、摄食、尿液粪便等情况，进行记录。血液学检查：白细胞总数及其分类、红细胞计数、血红蛋白、血小板等。血液生化学检查：AST、ALP、ALT、BUN、TP、ALB、Cr、TC、T-BIL、GLU 等十项指标。大鼠病理组织学检查：大鼠乙醚吸入麻醉后心脏取血，解剖，取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、卵巢、睾丸、胸腺、甲状腺、脑组织，经10%中性福尔马林溶液浸泡固定，常规石蜡切片，HE染色。

2.3 统计方法：统计资料用±s 表示，用SPSS17.0 医学统计软件进行分析，结果取α=0.05，P＜0.05 认为有统计学意义。

3 结 果

3.1 一般情况：忠伦阿汤给药组尿量明显多于对照组，高剂量组大鼠尿量高于中剂量组，中剂量组高于低剂量组(鼠笼托盘内尿液可见)，且高剂量组有蓝绿色尿液，停药后各组小便情况无差别。给药期间各组大鼠偶有大便稀，可自行缓解。行为活动和毛色各组无显著差异。

3.2 体重：由表1、表2 可知，对照组与高、中、低各组比较，蒙药忠伦阿汤灌胃给药15 周，停药恢复性观察2 周，各组大鼠体重递增，P＞0.05，没有统计学意义。

表1 给药期各组忠伦阿汤对大鼠体重的影响(±S，单位g ，n=20)

表2 停药2 周后各组蒙药忠伦阿汤对大鼠体重的影响(±S，单位g，n=10)

表3 给药期各组忠伦阿汤对大鼠生化指标的影响(±S，n=10)

表4 停药后忠伦阿汤停药后对大鼠生化指标的影响(±S，n=10)

3.3 血常规：给药期血常规，各项指标对照组和高、中、低各组均无显著差异，即P＞0.05，没有统计学意义。恢复期各组血常规各组间比较均无统计学意义(P＞0.05)。

3.4 生化指标：表3、表4 所示，与对照组比较，忠伦阿汤高、中、低剂量组给药15 周和恢复性观察2 周各组之间没有显著性差异，P＞0.05。

3.5 脏器系数：忠伦阿汤给药15 周，肝、脾、肾、肺、卵/睾对照组和高、中、低各组比较无差异，P＞0.05。肾上腺、胸腺、心脏、甲状腺、脑的脏器系数经分析，P＜0.05，有统计学意义，经两组间比较，各组的对照组和高剂量组、中剂量组之间没有差异，P＞0.05。

忠伦阿汤恢复期脏器系数，肝、脾、肾、卵/睾对照组和高中低各组比较无差异，P＞0.05。肾上腺、胸腺、心、肺、甲状腺、脑，经两组间比较，对照组和高剂量组、中剂量组没有显著差异，P＞0.05。

3.6 病理变化：长期毒性实验中给药组和对照组各组大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、卵巢、睾丸、胸腺、甲状腺、脑组织未见明显的增生和坏死，未见其他异常病理改变。

4 讨 论

对天然药物的安全性评价及毒理学研究目前越来越受到重视，对于指导临床合理用药，降低药物的毒副作用及减少因毒性导致的新药研发失败具有重要意义［7］。天然药中包括大量在少数民族地区使用的民族药物，蒙药在内蒙古地区应用广泛，临床疗效显著，虽然在大多数情况下使用安全有效，副作用相对较小，但是对于某些特殊疾病或人群，需长期用药者，是否存在毒性反应等，要深入研究，通过实验研究客观科学评价药物的毒性作用。

目前，关于忠伦汤散剂的临床毒副作用反应，急慢性毒性实验研究国内尚未见报道，由于缺乏临床的安全性评价，及毒理学方面的实验研究，严重限制了该药物的推广应用。本实验结果显示，给药期间大鼠行为活动和毛色各组无显著差异，饮水、摄食未见异常，体重均呈增长趋势，血液学及血液生化学指标未见异常改变，各组脏器系数未见明显差异，病理组织学检查相关组织和脏器未见异常改变，停药2周进行恢复性观察，未见药物有延迟毒性反应，因此，该实验表明蒙药忠伦阿汤在实验阶段内未见明显毒性反应，提示该药临床给药途径和给药剂量是基本安全的。

值得注意的是，在既往的研究中虽有报道指出川楝子在体内有蓄积作用，长期服用可引起蓄积中毒，苦参提取物也对肝肾细胞活力有明显的抑制作用［8-10］，但本实验中，并未发现蒙药复方忠伦阿汤的肝肾病理损伤，推测是否由于组成蒙药复方后，通过药物之间的相互配伍，起到了减毒增效作用，需要在今后的实验中，进一步深入探讨。

另外，在实验中由于大鼠脏器较小，取材时有可能附带周围结缔组织、脂肪组织，空腔脏器中附带的体液或血液，称重时尚不能彻底剥离或清除，可能对脏器重量产生影响，实验数据表现脏器系数组内差异较小，在今后的实验中应尽量避免这些影响因素造成的误差。

［1］李艳春，胡志忠，罗素琴，等.蒙药三子散中还原糖的含量测定［J］. 内蒙古医学院学报，2010，32(16)：551 ～553.

［2］斯琴高娃，董秋梅.甲氨蝶呤联合蒙药忠伦阿汤治疗类风湿关节炎的疗效观察［J］. 环球中医药，2014，(5)：385 ～387.

［3］李林，高自立，屈爱桃，等.蒙药忠伦阿汤的抗炎镇痛作用研究及对胶原诱导性关节炎大鼠足肿胀的影响［J］.中国实验方剂学杂志.2011，17(3)：184 ～186.

［4］高自立，董秋梅，松林，等. 蒙药忠伦阿汤对胶原诱导性关节炎大鼠血清IL-1、IL-6 及TNF-α 的影响［J］.中医杂志，2012，53(7)：1816 ～1817.

［5］彭城.中医药动物实验基本技术方法［M］.北京：人民卫生出版社，2008：119.

［6］陈奇.中药药理研究方法学(第二版)［M］.北京：人民卫生出版社，2000：31 ～32.

［7］徐蓓，杜冠华. 药物安全评价及药物毒理学研究进展［J］.中国医药导刊，2006，8(5)：326 ～327.

［8］唐大轩，熊静悦，梁娅君，等.川楝子对大鼠完全急性毒性作用研究［J］. 时珍国医国药，2011，22(10)：2387 ～2389.

［9］张茜，金若敏，祝晓雯，等.用肝肾共培养体系研究细胞毒性的方法学考察［J］. 中国中医药信息杂志，2011，18(11)：36 ～58.

［10］王小莺，李麟，韩哓萍，等.复方苦参注射液的体外抗菌作用及急性毒性试验［J］. 中兽医学杂志，2011(5)：13～14.