RP-HPLC 法测定参竹精颗粒中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量
2015-07-13董志同
董志同 李 妍
(1.内蒙古大唐药业有限公司,内蒙古,呼和浩特 010010; 2.内蒙古自治区食品药品检验所,内蒙古,呼和浩特 010020)
本方来源于包头市中蒙医院的蒙医验方,是蒙医常用的蒙药制剂。1988 年内蒙古卫生厅编写起草《内蒙古蒙成药标准》补充本时収载本方。1998 年收载于《卫生部药品标准》蒙药分册[1],为现行有效标准,该标准项下规定了性状项和制剂的通项检查。质量控制标准低,为了提高质量控制标准,经过对收集的7 批参竹精颗粒中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的定量分析,可控制其质量,为参竹精颗粒的质量评价提供可靠的方法。
1 仪器与试剂试药
日本岛津LC-20AT 型高效液相色谱仪(带SPD-M20A 型二极管阵列检测器)和LC-10ATvp 型高效液相色谱仪(带SPD-10Avp 型紫外检测器),Sartorius ME5 型电子天平,Mettler AE-100 电子天平,JD200-2 型电子天平;AS 5150A 超声清洗仪。
2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品:中国药品生物制品检定所提供(批号:110844-200606)
乙腈为色谱纯,其他均为分析纯试剂,水为高纯水。
2 方法
2.1 色谱条件的选择:色谱柱:岛津C18(250 ×4. 6mm 5μm)色谱柱;流动相乙腈-水(25:75);检测波长320nm;柱温30℃;流速1.0mL/min;进样量10μL。
2.2 对照品溶液的制备:精密称取2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量,置100mL 量瓶中,加稀乙醇制成每1mL 中含25μg 的溶液,摇匀,即得。
2.3 供试品溶液制备方法:取本品,研细,取约3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加稀乙醇25mL,称定重量,超声处理20、30、40、60min,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,静置,上清液滤过,取上清液5mL 加至10mL 量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得(避光操作)。
2.4 线性考察:按“2.2”项下,分别精密吸取浓度为0.025mg/mL 的对照品溶液2μL、5μL、10μL、20μL、30μL 注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,以峰面积对进样量进行回归分析,结果二苯乙烯苷在50.62ng ~759.3ng 范围内分别呈良好的线性关系。回归方程分别为:
图1 二本乙烯苷对照品
图2 供试品色谱图
2.5 重复性试验:取同一批号供试品6 份,分别按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件进行测定,进样量各20μL,计算RSD 为0.13%。
2.6 稳定性试验:取同一供试品溶液分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h 进行测定,计算RSD 为2.69%。
2.7 回收率实验:取同一批号供试品6 份,各约1.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,按“2.3”项下分别加入对照品溶液,同法测定,结果见表1。
表1 二苯乙烯苷加样回收试验
3 样品测定方法
分别收集内蒙古凯蒙制药有限公司样品6 批,内蒙古奥特奇股份有限公司样品1 批,按上述色谱条件,测定2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的峰面积。结果7 批样品的含量(mg/袋)分别为0.943、0.812、0.917、0.665、0.654、0.739、4.215。
4 讨论
《中国药典》2010 年版一部“何首乌”及注册标准YBZ12992009 含量测定项下均采用超声提取法[2-3],提取液过滤后直接进样。实验过程中发现,因流动相为乙腈-水(20:80),无机相比例大,提取液直接进样时易析出不溶物,导致色谱预柱堵塞,不利于操作,将样品液用水稀释1 倍,此现象得到改善。故采用稀乙醇超声提取,提取液再用水稀释后进样。
以稀乙醇作为提取溶剂分别考察超声20、30、40、60min后含量的变化,发现30min 后结果相差不大,故选择以稀乙醇超声30min 作为提取方法。
本试验的方法工作曲线线性关系好,结果的准确度和精密度均能满足要求,分析方法简便、快速、重复性好、对提高参竹精颗粒质量标准的控制水平很有价值。
[1]国家药典委员会.卫生部药品标准蒙药分册[S].127.
[2]国家药典委员会.中国药典[S].版一部.北京;中国医药科技出版社,2010:164.
[3]国家食品药品监督管理局注册标准YBZ12992009