HPLC-ELSD 法测定黄芪泡腾片中黄芪甲苷的含量

2015-07-12金平，顾燕

现代医药卫生 2015年21期

关键词：泡腾片甲苷项下

金平，顾燕

（1.江苏省中医院，南京210029；2.江苏睿博医药有限公司，江苏南京211112）

HPLC-ELSD 法测定黄芪泡腾片中黄芪甲苷的含量

金平1，顾燕2

（1.江苏省中医院，南京210029；2.江苏睿博医药有限公司，江苏南京211112）

目的建立黄芪泡腾片中黄芪甲苷含量测定方法。方法采用高效液相色谱和蒸发光检测器（HPLCELSD）方法，十八烷基硅烷键合硅胶柱（5 μm，250.0 mm×4.6 mm），流动相水∶乙腈（68∶32），流速1 mL/min；柱温30℃，载气流量为2.7 L/min。结果黄芪甲苷为1.112～6.672 μg时呈良好的线性关系，平均回收率为99.56%（RSD=1.67%），3批样品每片含黄芪甲苷均在2.00 mg以上。结论该方法准确可靠、重现性好，可用于黄芪泡腾片中黄芪甲苷的含量测定。

黄芪甙/分析；色谱法，高压液相；含量测定

黄芪泡腾片是黄芪经提取、浓缩、干燥后加辅料制备而成的。功能主治：固本止汗。用于气虚血亏，表虚自汗，四肢乏力，精神不足或久病衰弱。同类品种黄芪精口服液在临床上广泛应用于呼吸系统、消化系统、心血管系统、内分泌系统等疾病[1-2]。现代研究表明，黄芪中主要活性成分黄芪甲苷具有调节机体免疫功能、保护肾上腺皮质和骨髓功能的效应。本文用高效液相色谱和蒸发光检测器（HPLC-ELSD）法建立了黄芪泡腾片中黄芪甲苷的含量测定方法，为产品质量的提高提供参考[3-4]。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 Agilent1100 HPLC仪，蒸发光散射检测器；黄芪购自江苏省药材公司，经鉴定符合《中华人民共和国药典》一部2010年版黄芪项下有关规定。黄芪甲苷对照品（供含量测定用，批号：0781-2003113）购自中国药品生物制品检定所。黄芪泡腾片，自制。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

1.2.1 色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶柱（5 μm，250.0 mm×4.6 mm）；流动相：水∶乙腈（68∶32），流速1 mL/min；柱温30℃；蒸发光散射检测器。理论塔板数按黄芪甲苷计算应不低于3 000。

1.2.2 对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液的制备

1.2.2.1 对照品溶液精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.5 mg/mL的对照品溶液。

1.2.2.2 供试品溶液取黄芪泡腾片10片，研细，取细粉2 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量提取3 h，蒸干甲醇，残渣加水10 mL溶解，水饱和正丁醇提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，氨试液洗涤2次，每次40 mL，氨试液弃去，正丁醇液蒸干，残渣以少量甲醇转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，即得。

1.2.2.3 阴性对照液按处方比例称取除去黄芪的辅料1.4 g，精密称定，按1.2.2.2项下供试品溶液制备方法制成阴性对照液。

1.2.3 测定法取对照品溶液5、10 μL及供试品溶液10 μL，注入HPLC仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。

1.3 方法学验证

1.3.1 专属性试验按1.2.2项下方法制备阴性对照液、对照品溶液及供试品溶液，按测定方法进行检测，取阴性对照液、黄芪甲苷对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入HPLC仪，考察阴性制剂是否对检测存在干扰。

（5）获取贷款的回收款后，按照约定，贷款服务机构严格履行约定。一方面，履行时限约定，对保管部门完成资金划拨。另一方面，履行信息披露约定，向信托公司提交数据分析及管理报告。

1.3.2 线性关系考察精密称取黄芪甲苷对照品11.12mg于10 mL的容量瓶中，用甲醇溶解定容，作为储备液。分别精密吸取储备液 1、2、3、4、5、6 mL于 10mL容量瓶中，用甲醇定容至10 mL。精密吸取6个不同浓度的对照液10 μL，注入HPLC仪，各进2针，用HPLC仪测定，计算回归方程与相关系数。

1.3.3 精密度试验按照1.2.2.2项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液重复进样测定6次，测定，计算相对标准偏差（RSD），考察精密度。

1.3.4 稳定性试验按照1.2.2.2项下方法制备供试品溶液，每隔2 h按1.2.3项下测定方法进行检测，共考察12 h，考察溶液的稳定性。

1.3.5 重现性试验取黄芪泡腾片10片，研细，取细粉2 g，精密称定，平行6份，按1.2.2.2项下方法制备供试品溶液，按1.2.3项下测定方法进行检测，考察重现性。

1.3.6 加样回收率试验取黄芪泡腾片细粉1 g，精密称定，平行9份，另取配制成一定浓度的黄芪甲苷对照品溶液，分别精密移取相当于样品中黄芪甲苷量的80%、100%、120%的黄芪甲苷对照品溶液各3份加入样品中，制备加样回收供试品液，按1.2.3项下测定方法进行检测，计算回收率。

1.3.7 样品含量测定分别取3个批号（120302、120909、120404）的黄芪精泡腾片细粉2 g，精密称定，每个批号平行2份，按1.2.2.2项下方法进行制备，按1.2.3项下测定方法进行检测，计算黄芪甲苷的含量。

2 结果

2.1 专属性试验结果阴性制剂在黄芪甲苷的保留时间处无干扰，见图1、2、3。

图1 黄芪甲苷对照品

图2 黄芪泡腾片供试品

图3 黄芪泡腾片阴性制剂

2.2 线性关系考察结果黄芪甲苷为1.112～6.672 μg时呈良好的线性关系。见表1。

表1 线性关系考察结果

2.3 精密度试验结果连续进样6针，RSD为0.54%，本方法精密度良好。见表2。

表2 精密度试验结果

2.4 稳定性试验结果 12 h内峰面积对数 RSD为0.20%，表明供试品溶液在12 h内稳定。见表3。

表3 稳定性试验结果

2.5 重现性试验结果平行测定6份，结果黄芪甲苷含量为0.0977%，RSD为1.42%，表明该方法重现性好。见表4。

表4 重现性试验结果

2.6 加样回收率试验结果加样回收率为 97%～103%，平均回收率为99.56%，RSD为1.67%，该含量测定方法的回收率较好。见表5。

表5 加样回收率试验结果

2.7 样品含量测定结果 3批样品的每片含黄芪甲苷的含量均在2.00 mg以上，可作为制定质量标准的参考。见表6。

表6 样品含量测定结果

3 讨论

黄芪甲苷紫外吸收弱，仅在末端有弱吸收，参照药典中黄芪项下的含量测定方法，采用HPLC-ELSD法选择合适的流动相及检测器参数。《中华人民共和国药典》中黄芪药材的含量测定方法，样品处理复杂，而黄芪泡腾片中黄芪是经过加工制成的，对有效成分进行了富集，因而处理简单。

黄芪单方或复方中黄芪甲苷的含量测定方法均有文献报道，早期有薄层扫描法等，近几年均采用HPLCELSD法。流动相有甲醇与水或乙腈和水，经比较本制剂采用乙腈与水作为流动相。有研究报道各方法中柱温有30、35、40℃，漂移管的温度也从65～100℃不等[5-12]。经过试验，本制剂柱温采用30℃，漂移管温度80℃，氮气作为载气，流速2.7 L/mim，黄芪甲苷峰形好，与其他成分有良好的分离度。样品处理方法中采用氨试液将其他皂苷转化为黄芪甲苷，也在一定程度上去除了干扰。

黄芪泡腾片为8类新药，国内尚未见同品种剂型上市，经试验优选了样品的处理方法及色谱条件的参数，为控制黄芪泡腾片中活性成分黄芪甲苷的含量提供了检测依据。

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