气相色谱法测定盐酸美金刚缓释胶囊的含量

钟春华 陈刚胜 姜 涛 李孝壁江苏豪森药业股份有限公司，江苏连云港 222069

气相色谱法测定盐酸美金刚缓释胶囊的含量

钟春华 陈刚胜 姜 涛 李孝壁
江苏豪森药业股份有限公司，江苏连云港 222069

[摘要]目的 建立气相色谱法测定盐酸美金刚缓释胶囊含量的分析方法。 方法 采用气相色谱法，DB-1石英毛细管柱（30m×0.53mm，1.0μm），进样口温度为210℃；氢火焰离子化（FID）检测器，载气为氮气，检测器温度为300℃，柱初温70℃，以5℃/min升温速率升至170℃；以盐酸金刚烷胺为内标物测定盐酸美金刚缓释胶囊的含量。 结果 盐酸美金刚在28.4～568μg/mL范围线性关系良好，相关系数大于r=0.9990 （n=6），精密度试验的RSD为小于0.49%（n=6）。 结论 所建立的方法准确、回收率较为理想，能满足盐酸美金刚缓释胶囊的含量测定。

[关键词]气相色谱法；盐酸美金刚缓释胶囊；内标物；含量

阿尔茨海默病（Alzheimer disease，简称AD）是一种中枢神经系统退行性疾病，是老年人最常见的神经变性疾病[1-6]。AD的起病隐袭，病程呈慢性进行性，临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征。由于AD患者伴有不同程度的记忆缺失、认知障碍，生活不能自理，不但严重影响患者本身的生活质量，还给家庭和社会带来沉重的负担。因此AD是当今公认的医学和社会学难题，已引起各国政府和许多研究人员的广泛重视。

目前，国内外用于治疗AD的药物主要包括胆碱酯酶抑制剂和NMDA受体拮抗剂。虽然目前已有多种胆碱酯酶抑制剂应用于市场，但是仅用于治疗轻度至中度AD患者。盐酸美金刚为一种NMDA受体拮抗剂，是第一个用于治疗中度至重度阿尔茨海默型痴呆的药物，也是目前唯一一个用于治疗阿尔茨海默型痴呆的NMDA受体拮抗剂[7-8]。

盐酸美金刚最初由Merz & Co（麦氏）开发并上市，1982年首次在德国上市，并于2002年5月获得EMEA批准上市。2003年10月16日，美国FDA批准盐酸美金刚片（商品名：NAMENDA）上市。2005年4月18日，美国FDA批准Forest公司的盐酸美金刚口服溶液（商品名：NAMENDA）上市。2010年6月21日，美国FDA又批准了Forest 和Merz两制药公司联合开发的盐酸美金刚缓释胶囊（商品名：NAMENDA XR）上市，用于治疗阿尔茨海默型痴呆。

在研究盐酸美金刚缓释胶囊含量时发现美金刚没有发色基团，而且美金刚含有非常少的官能团，为形成包含适宜发色团或荧光团的化合物的衍生物非常困难。为此，我们查阅了已经上市的产品盐酸金刚烷胺的相关检测方法，有采用非水滴定法，但制剂辅料多会干扰，专属性不好，也有采用高效液相色谱法，使用用蒸发光检测器进行检测，但该方法的重现性较差[9-12]。经过文献分析和实际试验结果，本文采用氢氧化钠将美金刚释放在正己烷的溶液中，采用毛细管柱气相色谱法[13-15]，直接进样，选用盐酸金刚烷胺为内标物来测定盐酸美金刚缓释胶囊的含量。

1 实验器材

电子分析天平，梅特勒XS105；Agilent 7890 GC气相色谱仪，安捷伦色谱工作站；色谱柱：DB-1 （30m×0.53mm×1.0μm）。

试剂：氯化钠、氢氧化钠（AR，为国药集团化学试剂股份有限公司）；正己烷、甲醇（HPLC，为MERCK公司；纯化水为本公司自制。

2 方法与结果

2.1色谱条件

采用DB-1（30m×0.53mm×1.0μm）毛细管色谱柱，安捷伦色谱工作站；进样口温度为210℃；氢火焰离子化（FID）检测器，载气为氮气，检测器温度为300℃，柱初温70℃，以5℃/min升温速率升至170℃。

2.2系统适用性

本实验选择盐酸金刚烷胺作为内标，其与美金刚的结构类似，极性差异不大，且在所确定的色谱条件下有很好的分离。二者分离良好，说明该方法的系统适用性很好。见表1、图1。

表1　系统适用性实验

图1　系统适用性

2.3线性关系试验

取盐酸美金刚对照品（批号：RS20140102）56mg，精密称定，置100mL量瓶中，以水溶解并稀释至刻度，摇匀备用；精密量取此溶液0.5mL、1.0mL、2.5mL、4.0mL、5.0mL、10.0mL置10mL量瓶中，用水定量稀释制成每1mL中分别含盐酸美金刚为28μg、56μg、140μg、224μg、280μg、560μg的溶液，精密量取上述溶液各2mL，加入2mL正己烷、5mol/L氢氧化钠溶液1mL、2g NaCl，振摇后取正己烷层分别注入气相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，线性回归方程为：A=3.4465×C-34.9314，相关系数r=0.9996，说明本品在28～560μg/mL范围内线性良好。见表2。

表2　线性关系

2.4精密度

精密称取本品内容物适量[批号：20140101 （28mg）]，置100mL量瓶中，加10mL甲醇超声5min，再加入水适量超声30min，超声完毕待冷却至室温，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品储备溶液，平行六份；精密称取盐酸金刚烷胺对照品28mg，置100mL量瓶中，加水溶解并用稀释至刻度，作为内标溶液；另取盐酸美金刚对照品适量，精密称定，用水溶解并定量稀释制成每1mL中约280μg的溶液，作为对照品储备溶液。

精密量取对照品储备溶液和供试品储备溶液各2mL，加入2mL内标溶液、5mol/L氢氧化钠溶液1mL、2mL正己烷、2g氯化钠，振摇5min，静置分层，取正己烷层分别注入气相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积。按内标法以峰面积计算样品的含量，同时计算含量的相对标准偏差RSD，考察该方法测定含量的精密度，见表3。

由表3可知含量平均值为97.3%，RSD=0.45% （n=6）；表明该测定含量的方法在本色谱条件下精密度很好。

2.5溶液稳定性

取“精密度”项下的第一份正己烷溶液进行溶液稳定性试验，分别测定放置0、2、6、8、12、24h后的含量。测定结果见表4。

表3　含量测定精密度

表4　溶液稳定性

本品溶液稳定性试验中含量的平均值为99.4%，RSD=0.11%（n=6），表明溶液在16h内稳定。

2.6回收率

分别按盐酸美金刚缓释胶囊规格的处方，精密称取盐酸美金刚对照品（批号：RS20140102，含量：99.9%，水分：0.26%）22mg、28mg、34mg和空白全辅料适量（28mg规格称取辅料约180mg），置50mL量瓶中，先加10mL甲醇超声溶解5min，再迅速加入适量水超声30min，冷却至室温，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL至20mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，以含量测定浓度为基准，分别配制成含盐酸美金刚80%，100%，120%的溶液各3份，作为供试品储备溶液。精密量取上述溶液各2mL，加入2mL内标溶液（精密称取盐酸金刚烷胺对照品适量，加水溶解并定量稀释制成每1mL中含盐酸金刚烷胺约280μg的溶液），再加入2mL正己烷、5mol/L氢氧化钠溶液1mL、2g氯化钠，振摇5min，取正己烷层，作为供试品溶液。另精密称取盐酸美金刚对照品适量，加水溶解并定量稀释制成每1mL中含盐酸美金刚约280μg的溶液，作为对照品储备液。

按以上方法配制成对照品溶液。精密量取对照品与供试品溶液1μL分别注入气相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，计算回收量和回收率。见表5。

平均回收率为99.5%，RSD为0.23%，这个规格回收率良好，说明本方法测定含量结果准确、可靠。

3 讨论

查阅了大量文献，经过分析测定盐酸美金刚的方法有非水滴定法、气相法、液相法等，但比较完后发现滴定法对测定胶囊含量的专属性差，而液相法检测只能选用蒸发光检测器进行检测，其稳定性差，且线性范围太窄，定量准确度差，综合比较采用气相法有较好的分离和响应。

由于气相的进样误差大，故此采用内标法来消除进样的误差，因此根据内标物选择的依据，选择与美金刚具有类似结构、极性相近、且不与待测组分发生化学反应的盐酸金刚烷胺作为内标物质；而且在样品制备过程中金刚烷胺以及其盐的行为方式类似美金刚及其盐，且回收比率一致，采用金刚烷胺做内标的方法，能够有效避免样品前处理及进样体积误差对含量测定结果的影响。

由于本品为盐酸盐，所以采用酸碱中和后，再加入正己烷萃取，萃取过程中发现分层不是很明显，故此加入一定量的氯化钠，可以有效增大萃取率，而且使分层更加明显，通过实验最终获得了很好的萃取效果，达到了样品处理的问题。

在方法验证过程中，通过对盐酸美金刚的线性和范围、胶囊含量测定精密度、回收率及溶液稳定性等项目的研究，说明最终所建立的气相色谱方法能有效、准确的测定可盐酸美金刚缓释胶囊的含量，且没有任何干扰，也有着非常好的重现性。

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[中图分类号]R927.2

[文献标识码]B

[文章编号]2095-0616（2015）23-85-04

收稿日期：（2015-08-25）

Determination the content of memantine hydrochloride sustained release capsules by gas chromatography

ZHONG Chunhua CHEN Gangsheng JIANG Tao LI Xiaobi
Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Co.,Ltd.，Lianyungang 222069，China

[Abstract]Objective To establish a method for Determination the content of Memantine Hydrochloride Sustained Release Capsules by Gas chromatography. Methods The content of Memantine Hydrochloride Sustained Release Capsules was determined by Gas chromatography with DB-1 capillary column(30m×0.53mm,1μm) with FID detector and nitrogen as the carries gas.The injector temperature was 210℃,the detector temperature was 300℃,the column temperature rosed by program,the initial temperature was 40℃，rosed to 170℃ with a rate of 5℃/min；The content of memantine hydrochloride by internal standard method，with the internal standard substance of Amantadine Hydrochloride. Results The Memantine Hydrochloride was a good linearity over the range of 28.4μg/mL to 568μg/ mL with a the correlation coefficient r higher than 0.9990(n=6),The RSD for repeatition was 0.49%(n=6). Conclusion The method was accurate and the recovery rate of memantine Hydrochloride is ideal，and can meet the requirement for the content of Memantine Hydrochloride Sustained Release Capsules.

[Key words]Gas chromatography;Memantine hydrochloride sustained release capsules;The internal standard substance;Content