HPLC法测定清热润燥口服液中苦杏仁苷的含量

李月亭陈凌云魏丹霞余晓玲▲.云南中医学院，云南昆明650500；.昆明市中医医院，云南昆明6500

HPLC法测定清热润燥口服液中苦杏仁苷的含量

李月亭1△陈凌云1魏丹霞2余晓玲2▲
1.云南中医学院，云南昆明650500；2.昆明市中医医院，云南昆明650011

[摘要]目的 采用HPLC法测定清热润燥口服液中苦杏仁苷含量。 方法 色谱柱DiKma C18-EP （4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（7:93）；检测波长207nm，流速1.0mL/min，柱温25℃。 结果 苦杏仁苷进样量在0.215～4.300μg范围内有良好的线性关系，r=0.9999。回收率为98.91%，RSD=1.73%（n=9）。结论 此法重现性好，准确，简便，适用于清热润燥口服液含量测定及质量控制。

[关键词]HPLC；清热润燥口服液；苦杏仁苷；含量测定

△云南中医学院2013级硕士研究生

▲通讯作者

清热润燥口服液是由桑叶、芦根、陈皮、苦杏仁、麦冬、沙参、茯苓等13味中药组成的复方制剂。该处方经过了30余年的临床应用，具有较好的清热养阴、润燥止咳的作用，临床疗效较好[1-3]。本文通过对方中苦杏仁中苦杏仁苷含量的测定以达到有效控制清热润燥口服液质量控制。

1 仪器与材料

AgiLent 1100高效液相色谱仪（自动进样器、DAD检测器、恒温柱温箱），色谱柱DiKma C18-EP （4.6mm×250mm，5μm），KS-300超声仪（上海冠特超声仪器有限公司），电热恒温水浴锅（北京永光明医疗仪器厂），BP-211D型电子分析天平（德国Sartorius）。

清热润燥口服液（批号150616）由昆明市中医医院制剂室提供；苦杏仁苷对照品（编号为：110820-201506）购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯（Fisher Scientific）；水为高纯水；其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件[4]

色谱柱：DiKma C18-EP（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%醋酸（7:93）；检测波长为207nm。流速1.0mL/min，柱温25℃；进样量：10μL；理论板数按苦杏仁苷峰计算，应不低于4000。在以上色谱条件下，苦杏仁苷的保留时间约为36.02min（见图1～3）。

2.2对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥24h的苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.215mg的溶液，即得。

图1　苦杏仁苷标准品（t/min）

图2　清热润燥口服液供试品（t/min）

图3　阴性对照品（t/min）

2.3供试品溶液的制备[5-11]

精密吸取清热润燥口服溶液10mL，置蒸发皿中，于水浴上加热挥干，加80%甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，加80%甲醇至约20mL，超声处理（频率100kHz，输出功率400W）15min，放冷后用80%甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，弃去初滤液，续滤液用0.45μm滤膜过滤置进样瓶，即得。

2.4阴性对照品溶液的制备

照供试品溶液的制备方法，按处方比例制备不含苦杏仁的阴性对照品溶液。

2.5线性关系考察

取苦杏仁苷对照品溶液（0.215mg/mL）1、 2、5、10、15、20μL注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定峰面积，结果见表。以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（μg）为横坐标（X），绘制标准曲线，并计算回归方程。结果苦杏仁苷对照品的回归方程为Y=966.94X-0.1646（r=0.9999），苦杏仁苷在0.215～4.300μg范围内，峰面积与进样量有良好的线性关系。

2.6精密度试验

精密取苦杏仁苷对照品溶液，重复测定6次，每次10μL，RSD=0.13%（n=6）。

2.7重复性试验

取同一批清热润燥口服溶液6份，每份10mL，按供试品溶液制备方法制备供试液，进行含量测定，计算结果，苦杏仁苷含量的RSD=2.76%（n=6）。

2.8回收率试验

取同一批已知含量的清热润燥口服溶液（苦杏仁苷0.230mg/mL）9份，每份10mL，置锥形瓶中，精密加入苦杏仁苷对照品溶液（苦杏仁苷0.215mg/mL）5、10、15mL，每份均精密补加甲醇至50mL，按2.3项下方法制备供试液，取10μL注入液相色谱仪测定含量，计算回收率。见表1。

表1　加样回收率试验结果（n=9）

2.9含量测定

依本法测定不同批次供试品3批。见表2。

表2　供试品中苦杏仁苷的含量测定结果

3 讨论

试验中也曾测过桑叶中芦丁含量，可能由于中药煎煮过程中芦丁损失较大，经测含量低于万分之一。而苦杏仁是清热润燥口服液方中主要药味之一，其主要功效是降气止咳平喘，润肠通便之功效[12-16]。苦杏仁苷为苦杏仁含量指标成分[1，17]。通过此法对清热润燥口服液中苦杏仁苷含量的测定，可有效地控制本制剂的含量。

试验中对比采用乙腈-0.1%醋酸（7∶93）为流动相发现苦杏仁苷峰有干扰，分离度未能达到要求，而按《中国药典》2010年版（一部）苦杏仁中苦杏仁苷的测定方法测定甲醇-0.1%醋酸（8∶92），出峰时间为5min左右，且杂峰较多；将流动相调整为甲醇-0.1%醋酸（6∶94）时，出峰时间在60min之后，经反复摸索选择甲醇-0.1%醋酸（7∶93）为流动相，拖尾因子及分离度均符合要求，且出峰时间适宜。

在供试品溶液制备中，分别选择了100%、80%、60%甲醇进行供试品制备，经含量测定后，80%甲醇测得的苦杏仁苷峰面积最大，故最终优选80%甲醇作为供试品溶液的制备。

[参考文献]

[1] 余晓玲，张韶湘，周昱蕾，等.清热润燥口服液澄清制备工艺研究[J].云南中医中药杂志，2011,32（8）：76-77.

[2] 魏丹霞，陈丽玲，赵玉雪，等.清热润燥口服液止咳、平喘作用及急性毒性试验研究[N].昆明医科大学学报，2013（5）：61-64.

[3] 魏丹霞，施兴黔，陆家龙.陆家龙导师辨证治疗昆明地区感冒后咳嗽的特色[J].云南中医中药杂志，2010，31（4）：1-3.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部） [S].北京：中国医药科技出版社，2010：176-177.

[5] 李焕丹，陈哲琼，宋粉云.HPLC法测定小儿清热止咳口服液中苦杏仁苷的含量[J].齐鲁药事，2011，9（3）：503.

[6] 邹小娟，谢和兵，钱芳，等. HPLC法测定苦杏仁中苦杏仁苷含量的方法研究[J].中国药事，2009，23（1）：33-36.

[7] 袁丹，胡爽，毕开顺，等.HPLC法测定复方制剂中苦杏仁苷含量的研究[J].药物分析杂志，2002，22（5）：356-361.

[8] 武孔云，梁光义，贺祝英，等.HPLC法测定麻杏石甘汤传统汤剂及颗粒汤剂中苦杏仁苷含量[J].中药材，2007，9（30）：1128-1130.

[9] 金乾兴，黄燕芬.HPLC法测定桂枝茯苓胶囊乙醇处理液中苦杏仁苷的含量[J].中华中医药学刊，2012，2 （30）：382.

[10] 王丽萍，许红玮.HPLC法测定加味桂枝茯苓汤中苦杏仁苷的含量[J].中医学报，2014，6（1）：852-854.

[11] 李翔，刘皈阳，马建丽，等.HPLC法测定克咳胶囊中苦杏仁苷的含量[J].中国药师，2013，16（7）：1010.

[12] 李翔，刘皈阳，马建丽，等.HPLC法测定麻杏口服液中苦杏仁苷的含量[J].解放军药学学报，2013，29（1）：57-59.

[13] 邱天宝，刘素梅，方忠意，等.HPLC法测定麻杏石甘散中苦杏仁苷的含量[J].中兽医医药杂志，2014，5（40）：3-5.

[14] 苟小军，黄强.HPLC法测定哮喘颗粒中苦杏仁苷的含量[J].实用药物与临床，2014，17（12）：1594-1595.

[15] 唐冰雯，陈蓉蓉，张彦焘，等.RP-HPLC法测定小儿清肺止咳片中苦杏仁苷的含量[J].药学研究，2013，11 （11）：629-630.

[16] 勾晓丹.HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量[J].中国当代医药，2014，21（4）：7-9.

[17] 吴迪，王建中，赵云霞，等.苦杏仁苷几种测定方法的比较[J].食品工业科技，2006，2（58）：184-189.

[中图分类号]R286.0

[文献标识码]B

[文章编号]2095-0616（2015）23-69-03

[基金项目]云南省财政厅、云南省卫生厅资助项目（云卫发[2009]1134号）。

收稿日期：（2015-09-28）

Determination of amygdalin contents in heat-clearing drynessmoistening oral liquid by HPLC

LI Yueting1CHEN Lingyun1WEI Danxia2YU Xiaoling2
1.Yunnan University of Traditional Chinese medicine, Kunming 650500, China; 2.Kunming Hospital of Traditional Chinese medicine, Kunming 650011, China

[Abstract]Objective To determinate of amygdalin contents in heat-clearing dryness-moistening oral liquid by HPLC. Methods Column was DiKma C18-EP(4.6mm×250mm,5μm), mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution (7:93), detection wavelength was207nm, flow was 1.0mL/min and the column temperature was 25℃. Results Injection volume of amygdalin had good linear relationship at the range of 0.215 to 4.300μg, r=0.0009. The recycle rate was 98.91%, RSD=1.73% (n=9). Conclusion The method has good reproducibility and it is simple and accurate, suitable for determination contents and quality control of in heat-clearing dryness-moistening oral liquid.

[Key words]HPLC; Heat-clearing dryness-moistening oral liquid; Amygdalin; Contents determination