“04710”杀灭钉螺的实验研究

陆 宾张 进张正球陈 前吴 锋.江苏省仪征市疾病预防控制中心，江苏仪征 400；.江苏省仪征市真州卫生院，江苏仪征 400；3.江苏省血吸虫病防治研究所，江苏无锡 4064

“04710”杀灭钉螺的实验研究

陆 宾1张 进1张正球1陈 前2吴 锋3▲
1.江苏省仪征市疾病预防控制中心，江苏仪征 211400；2.江苏省仪征市真州卫生院，江苏仪征 211400；3.江苏省血吸虫病防治研究所，江苏无锡 214064

[摘要]目的 探讨和观察“04710”在不同环境、不同浓度（剂量）下的杀螺效果。 方法 分别采用玻璃烧杯浸泡法、保湿泥盘喷洒法和保湿泥盘直接撒施法，并于施药后24h、48h、72h和3d、7d、15d观察检查钉螺的死亡情况，同时设清水空白对照组。 结果 在室内（25.0±2.0）℃常温下，其浸泡钉螺24h、48h和72h的LC50分别为27.97mg/L、19.43mg/L和10.97mg/；喷洒3d、7d和15d的LD50为66.20g/m2、48.41g/m2和35.16g/m2；直接撒施3d、7d 和15d的LD50则为23.63g/m2、17.20g/m2和13.39g/m2。其95%的可信区间则分别为20.96～36.79mg/L、15.01～24.96mg/L和8.72～13.60mg/L；51.74～87.68g/m2、38.01～63.01g/m2和27.47～45.70g/m2；18.40～30.41g/m2、13.28～22.12g/m2和10.40～17.02g/m2。 结论 直接撒施法和浸泡法的杀螺率明显高于喷洒法，但现场杀螺效果和对非靶生物的毒性有待进一步研究探索。

[关键词]“04710”；植物杀螺剂；浸泡法；喷洒法；直接撒施法；杀螺效果

▲通讯作者

钉螺是日本血吸虫的惟一中间宿主，控制和消灭钉螺是防治血吸虫病的重要关键措施之一[1-2]。目前国内常用的灭螺剂主要为化学类药物，但由于污染环境、对非靶生物有毒性，因而使用受到限制[3-4]。氯硝柳胺是WHO唯一推荐使用的化学杀螺药，但在实际应用中该药易沉淀且有钉螺上爬（逃避）现象，同时存在价格贵、对非靶水生物（鱼类）毒性大等缺陷[5]。所以，研制和开发天然植物类灭螺药受到重视[6]。“04710”是我们从许多筛选样品中观察到的具有杀螺作用的植物类样品。因此，为进一步观察验证该样品有无直接杀灭钉螺的作用和效果，我们于2014年10～11月在室内进行了不同方法和不同时间的灭螺实验观察研究，结果报告如下。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1杀螺剂 “04710”为黄褐色块状（含17%茄呢醇），是生产生物制品中的下脚料，由江苏某生物制品有限公司提供。

1.1.2钉螺 钉螺（Oncomelania hupensis），采自江苏省仪征市江滩，经室内作适应性饲养3d后挑选活力强，7～8个螺旋的成螺。

1.1.3实验条件 实验室温度控制在（25.0±2.0）℃，相对湿度为（55.0±10.0）%。

1.2方法

1.2.1药液配制 在等盘天平秤上称取“04710”原药5kg，放入拈盘中稍加磨碎（细）后投入搪瓷桶中注水5000mL浸泡一周，经20孔/25.4mm金属铜筛过滤后作为实验药液（浸泡液）。

1.2.2实验分组 将实验药液（浸泡液）用倍比稀释法配制为200.0、100.0、50.0、25.0、12.5、6.3、3.3mg/L （g/m2）7个实验观察组，另设清水空白对照组。

1.2.3实验方法 （1）浸泡法：取100mL玻璃烧杯，每杯放入活螺各30只，上盖塑料纱网以防止钉螺爬出，然后将制成的试验药液分别灌入烧杯内，观察其24h、48h和72h的钉螺死亡情况。（2）喷洒法：采用“室内喷洒杀螺保湿试验盘（28cm×33cm）”[7]，内铺经40孔/25.4mm金属铜筛筛过的泥土600g刮平并加水使泥土保持一定的潮湿度（盘中泥土含水量控制在35%左右），实验前每盘投入钉螺30只，让其自由爬动15min，然后用小型浇花壶将各组试验药液均匀地喷洒于盘中泥土表面并盖上纱盖，以防止钉螺逃出，于喷后3d、7d和15d分别检出盘中钉螺，观察其钉螺死亡情况。（3）直接撒施法：实验环境同喷洒法，但施药方法不同于喷洒法，它是直接将磨碎（细）的药粉按实验各组所需药量直接均匀地撒入盘内，于3d、7d和15d后取出钉螺观察死亡情况。

1.3钉螺死活鉴定

将实验后取出的各组钉螺分别在清水笼头上洗净体表药液，置于平皿中并加入少许清水，让其自由爬动2h，爬动的以活螺计并检出，而对于不开厣活动的钉螺将其移至草纸上复苏24h后再用敲击法鉴定钉螺死活[8]。

1.4钉螺死亡率的计算

各组鉴定为死亡的钉螺为X，每组观察钉螺总数为Y，将X/Y乘以100。同时采用Probit模块（概率单位回归），计算钉螺施药后不同时间的半数致死浓度（LC50）、半数致死剂量（LD50）及其95%可信区间[9-10]。

1.5统计学分析

采用SPSS20.0统计软件进行统计学分析，分别计算各组钉螺死亡率，计数资料以百分比表示，采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1浸泡杀螺效果

试验各组的浸泡杀螺率见表1。其中浓度在25.0mg/L以上各组浸泡24h与48h的钉螺死亡率分别为43.3%～96.7%，56.7%～100.0%，差异无统计学意义（x2=1.067、0.693和0.577，P＞0.05），与浸泡72h的钉螺死亡率83.3%～100.0%相比较，除200mg/L组差异无统计学意义（P＞0.05），其他三组差异均有统计学意义（x2=10.335、7.954、和5.454，（P＜0.05），清水空白对照组钉螺死亡率为0。

表1　“04710”室内浸泡杀螺效果

2.2喷洒杀螺效果

钉螺接触喷洒药液20min后可见其活动明显减弱，其中用50.0g/m2以上各组喷洒3d、7d 和15d的钉螺死亡率分别为43.3%～83.3%、50.0%～93.3%和53.3%～100.0%，经检验差异无统计学意义（x2=0.268、0.067和0.060，P＞0.05），清水空白对照组钉螺死亡率为0～3.3%，见表2。

表2　“04710”室内喷洒杀螺效果

2.3直接撒施杀螺效果

当钉螺接触药物即见其活动减弱或停止爬动。在25.0g/m2以上各组撒施3d、7d和15d的杀螺率分别为43.3%～100.0%、46.7%～100.0%和60.0%～100.0%，三组间差异无统计学意义（x2=1.669、3.750和3.158，P＞0.05），清水空白对照组钉螺死亡率为0.0%，见表3。

表3　“04710”室内直接撒施杀螺效果

上述结果显示，浓度12.5mg/L以上浸泡钉螺和剂量12.5g/m2以上各组喷洒杀螺比较，浸泡效果好于喷洒杀螺效果，差异有统计学意义（x2=7.177、15.429、12.273和6.667，P＜0.05）；而在相同剂量（12.5g/m2）以上各组的喷洒和撒施法中，其杀螺效果直接撒施法明显高于喷洒法，差异有统计学意义（x2=4.800、4.286、9.932和6.667，P＜0.05）。

3 讨论

血吸虫病是一种严重危害我国人民健康和影响社会经济发展的疾病，消灭钉螺是防治血吸虫病的一项重要措施，其中药物灭螺是当前的主要灭螺措施。国内常用的杀螺药物，如五氯酚钠等，因对人、畜毒性大，有“三致”作用，且污染环境，已被国家禁止使用。氯硝柳胺是WHO 唯一推荐使用的化学杀螺药，但在实际应用中该药易沉淀且有钉螺上爬（逃避）现象，同时存在价格贵、对非靶水生物（鱼类）毒性大等缺陷[11]。因此，寻求一种资源丰富、能就地取材，并且对环境无污染和使用方便的天然植物杀螺剂，已是我国当务之急。

植物灭螺系指对于某些含有杀螺有效成分的植物资源，运用一定的分离手段提取其根、茎、叶、花、果和籽中的有效成分来杀灭钉螺。所以，植物灭螺药物具有价廉、低毒和易降解等优点而日益受到重视。目前，国内报道有一定杀螺作用的植物约有50多种[12]。富贵草浸出液浸泡钉螺24、72h的LC50分别为 42.28、7.20mg/L[13]；赤桉树叶乙醇提取物浸泡钉螺48h和72h后的LC50分别为19.4mg/L和15.5mg/L[14]；10g/L枫杨和土大黄及1g/L夹竹桃浸泡5d的杀螺率为80%～85%[15]；本次试验结果显示，各组杀螺率均随着药物剂量的增大和施药时间延长而增加，其中用“04710”浸泡钉螺48h、72h的LC50分别为19.43mg/L和10.97mg/L，其95%可信区间为15.01～24.96mg/L和8.72～13.60mg/L，与富贵草和赤桉树叶乙醇提取物浸泡杀螺相似且优于其灭螺效果。而喷洒3d、7d和15d的LD50为 66.20g/m2、48.41g/m2和35.16g/m2，95%可信区间分别为51.74～87.68g/m2、38.01～63.01g/m2和27.47～45.70g/m2；直接撒施杀螺3d、7d和15d 的LD50为23.61g/m2、17.20g/m2和13.39g/m2，95%可信区间为18.39～30.41g/m2、13.28～22.12g/m2和10.40～17.02g/m2，明显优于目前现埸应用的杀螺药—4%氯硝柳胺乙醇胺盐粉剂50.0g/m2的杀螺效果。

“04710”是一种具有药用功能的草本植物，在我国资源丰富。它是工厂在提取生物有效成份后所产生的废料（下脚料），通常认为没有任何商业价值而被当地农民用来当作有机肥料，以改善农田土壤结构。目前国外已用来直接杀灭鱼塘等水产养殖场所的水生螺类，因为水产养殖者发现在杀螺方面比市场上出售的灭螺剂更有效。本次实验观察表明，“04710”无论在浸泡、喷洒和直接撒施试验中均显示了一定的灭螺效果，尤其直接撒施法的杀螺率要明显高于浸泡和喷洒法的杀螺效果。可见，现场试验时宜采用直接撒施法。

实验中还观察到在直接撒施药物2d后可见实验盘内泥土表层呈现霉变现象，自然形成一层白色霉变物和霉斑，是否有促进或加速钉螺死亡的因素，还有待进一步实验探索和观察；实验过程中未见在不同杀螺方法和环境中有明显的钉螺上爬或逃跑现象。

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[中图分类号]R184.38

[文献标识码]A

[文章编号]2095-0616（2015）23-39-04

收稿日期：（2015-09-02）

Study on “04710” for molluscicidal experiment

LU Bin1ZHANG Jin1ZHANG Zhengqiu1CHEN Qian1WU Feng3
1.Jiangsu Yizheng Center for Disease Control and Prevention,Yizheng 211400,China;2.Jiangsu Yizheng Zhenzhou Hospital,Yizheng 211400,China;3.Jiangsu Institute of Schistosomiasis Control,Wuxi 214064,China

[Abstract]Objective To investigate and explore the molluscicidal efficacy of “04710”at the different concentration and application condition. Methods The dead rate of snail was checked after treatment with drug at 24,48,72 hours and 3,7,15 days with the methods of immersion in glass beaker,spraying and dusting in wet plate,Respectively.Blank control group was set with fresh water. Results At (25.0±2.0)℃ room temperature,the LC50of snail immersion in “04710” were 27.97mg/L,19.43mg/L and 10.97mg/L after 24 h,48 h and 72h,the LD50of spray were 66.20g/m2,48.41g/m2and 35.16g/m2after 3d,7d and 15d,whereas the LD50of direct dusting were 23.63g/m2,17.20g/m2and 13.39g/m2after 3d,7d and 15d.The 95% creditable range of the three methods in killing snail test were 20.96-36.79mg/L,15.01-24.96mg/L and 8.72-13.60mg/L,51.74-87.68g/m2,38.01-63.01g/m2and 27.47-45.70g/m2,18.40-30.41g/m2,13.28-22.12g/m2and 10.40-17.02g/m2. Conclusion The molluscicidal rate with direct dusting and inmersion showed a significant higher than spraying.However,the effect of snail killing in the field and the toxicity on non-target organisms need to be studied.

[Key words]“04710”;Plant molluscicidal agent;Immersion method;Spraying method;Dusting method;Molluscicidal effect