OLK患者与OSCC癌患者的原癌基因蛋白差异及相关性研究

李崴嵬，魏琦玲，杨金晖，佟静，崔秋萍

(河北省唐山工人医院 口腔科，河北 唐山 063000)



OLK患者与OSCC癌患者的原癌基因蛋白差异及相关性研究

李崴嵬，魏琦玲，杨金晖，佟静，崔秋萍

(河北省唐山工人医院 口腔科，河北 唐山 063000)

目的 探讨原癌基因蛋白在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)及口腔白斑中(oral leukoplakia，OLK)的意义。方法 选取唐山工人医院口腔科已确诊为口腔白斑的患者40例作为OLK组，确诊为口腔鳞状细胞癌患者40例作为OSCC组，同时期体检正常志愿者40例作为对照组，取病变组织、正常口腔粘膜作为样本，研磨后取上清液，采用酶联免疫法检测3组研究对象样本中MDM2蛋白，p53蛋白，Ki-67蛋白的含量情况，并分析3者的相关性。结果 3组间MDM2、p53表达水平比较均为OSCC组>OLK组>对照组；3组间Ki-67表达水平比较，OSCC组>OLK组>对照组(P<0.05)；MDM2，p53，Ki-67在口腔白斑及口腔鳞状细胞癌中表达呈正相关(P<0.05)，在正常粘膜中表达无相关。结论 口腔白斑发展成为口腔鳞状细胞癌与MDM2，p53，Ki-67的高表达有关，MDM2、p53、Ki-67 3者之间呈正相关。

口腔白斑；口腔鳞状细胞癌；MDM2；p53；Ki-67

口腔白斑(oral leukoplakia，OLK)是指由于代谢紊乱引起口腔黏膜上皮过度角化形成的白色斑块[1]，属于癌前病变，有3%～5%可发展成为鳞状细胞癌。口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是口腔科常见的恶性肿瘤，目前，占我国口腔恶性肿瘤的90%以上，占全身肿瘤的3%～5%,而且其恶性程度高，患者预后差，5年生存率仅为30%～40%[2]，因此，早期诊断、治疗，防止病情变化成为目前研究的热点。研究发现[3]，口腔鳞状细胞癌的发生与原癌基因和抑癌基因的表达失衡有关，两者为相互制约关系，在外界或遗传因素作用下，原癌基因过度表达或抑癌基因表达不足，均可导致细胞周期异常，细胞过度增殖发生癌变。资料显示[4-5]，MDM2和p53为相关联的抑癌基因，在头部鳞状细胞癌、结肠癌等恶性肿瘤进展过程中均有异常表达，Ki-67的表达与细胞增殖活性有关，在喉癌、乳腺癌等恶性肿瘤中起到主要作用[6]。目前，关于口腔鳞状细胞癌中MDM2，p53，Ki-67表达的相关研究较少，本研究通过检测观察MDM2，p53，Ki-67在口腔鳞状细胞癌及口腔白斑中的表达水平及变化，探讨其相关性及意义，为口腔鳞状细胞癌的早期诊断提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集唐山工人医院口腔科2013年1月～2015年4月的确诊为口腔白斑的患者40例作为OLK组，其中男性26例，女性14例，年龄20～75岁，平均年龄(50.23±7.88)岁；确诊为鳞状细胞癌的患者40例作为OSCC组，其中男性23例，女性17例，年龄22～70岁，平均年龄(51.43±7.69)岁； 纳入标准：手术后经病理学检查确诊为口腔白斑、口腔鳞状细胞癌；排除标准：①术前有化疗、放疗病史；②合并其他恶性肿瘤；③恶液质；④存在严重的内科疾病；⑤病历资料不完整。另外选取同时期体检正常的志愿者40例作为对照组，其中男性25例，女性15例，年龄22～74岁，平均年龄(52.12±7.75)岁。3组研究对象在性别组成、年龄等一般资料方面比较，差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 样本制作:OLK组及OSCC组均于术中取病变组织作为样本，对照组取正常的口腔黏膜组织作为样本。所有组织均取适量置入5 mL EP管中，加入裂解液、MDM2，p53，Ki-67蛋白酶抑制剂，采用液氮研磨，冰上孵育40 min后，离心机速度13000 r/min，离心40 min，取上清液。

1.2.2 指标检测:选用人MDM2 p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒(上海沪震生物科技有限公司)、人 p53Elisa试剂盒、人Ki-67 ELISA试剂盒(上海常斤生物科技有限公司)，利用酶联免疫检测仪(JK-MR-5031)，通过酶联免疫吸附法测定各组研究对象组织上清液中MDM2蛋白、p53蛋白、Ki-67蛋白含量。

2 结果

2.1 3组间MDM2、p53表达水平比较 研究显示，3组间MDM2、p53表达水平比较差异有统计学意义(F=1018.93，F=984.87，P<0.05)，OSCC组>OLK组>对照组，见表1。

*P<0.05，与OLK组相比，compared with OLK group

2.2 3组间Ki-67表达水平比较 本研究显示，3组间Ki-67表达水平比较，差异有统计学差异(F=1173.58，P<0.05)，OSCC组>OLK组>对照组，见表2。

表2 3组间Ki-67表达水平比较Tab.2 Comparison of Ki-67 among three ±s)

*P<0.05，与OLK组相比，compared with OLK group

2.3 MDM2、p53与Ki-67在OLK组中表达的相关性 本研究中，MDM2和p53、p53和Ki-67、MDM2和Ki-67在OLK组中的表达均呈正相关关系(P<0.05)。见表3。

表3 MDM2、p53与Ki-67在OLK组中表达的相关性Tab.3 Relevance of MDM2，p53 and Ki-67 in OLK group

2.4 MDM2、p53与Ki-67在OSCC组中表达的相关性 本研究中，MDM2和p53、p53和Ki-67、MDM2和Ki-67在OSCC组中的表达，均呈正相关(P<0.05)。见表4。

表4 MDM2、p53与Ki-67在口腔鳞状细胞癌中表达的相关性Tab.4 Relevance of MDM2，p53 and Ki-67 in OSCC group

2.5 MDM2、p53与Ki-67在对照组表达的相关性 本研究中，MDM2和p53、p53和Ki-67、MDM2和Ki-67在正常粘膜中的表达无相关性。见表5。

表5 MDM2、p53与Ki-67在对照组表达的相关性Tab.5 Relevance of MDM2，p53 and Ki-67 in control group

3 讨论

口腔鳞状细胞癌的发生率占面部恶性肿瘤的第1位，常常由口腔白斑发展而来，尤其好伐与男性吸烟者，给患者带来较大的痛苦[7]。口腔鳞状细胞癌具有早期转移、侵袭力强、预后差的特点，一旦发生，则没有良好的控制手段，目前，学者多将研究的重点放在及早诊断，减缓其发展过程方面[8]。近年来，随着分子生物学的发展，人们发现从癌前病变进展为癌症与基因调控有关，原癌基因被激活，抑癌基因变异是癌症发生的主要原因[9]。资料显示[10]，p53是一种位于17号染色体的抑癌基因，具有抑制细胞生长及促凋亡作用，调节细胞周期，其出现突变与癌症的发生关系密切；MDM2[11]与p53基因具有关联性，能够调节p53基因表达，同时具有致癌作用与抑癌作用；Ki-67[12]则是半衰期较短的核抗原，出现在细胞周期中，可以反应细胞增殖活性，近年来作为癌症增殖活性的指标进行检测。在本实验中，通过检测观察MDM2，p53，Ki-67在口腔鳞状细胞癌及口腔白斑中的表达水平及变化，探讨其与口腔鳞状细胞癌的相关性及意义，明确其对口腔鳞状细胞癌发生发展的影响，为口腔鳞状细胞癌的早期诊断提供依据。

研究结果发现，3组间MDM2、p53表达水平比较均为OSCC组>OLK组>对照组，差异有统计学意义，提示MDM2、p53的强表达在OSCC发展中起到重要作用。曾有研究报道[13]，p53基因位于17号染色体，其外显子N端由aa残基组成，能够调控DNA转录及蛋白质合成过程，而MDM2可以通过aa残基与p53进行结合，抑制p53的抑癌作用，促进癌细胞繁殖生长，加速口腔白斑发展为口腔鳞状细胞癌的进程。

本研究显示，3组间Ki-67表达水平比较，OSCC组>OLK组>对照组(P<0.05)，提示OSCC具有更高的增殖活性。Ki-67是细胞增殖抗原，与细胞周期关系密切，调控着细胞的增殖活性，与病变恶性程度相关，有报道称[14]，Ki-67与口腔白斑的浸润和上皮角化增生关系密切，与本研究结果一致。

相关性研究表明，在口腔白斑与口腔鳞状细胞癌中，MDM2，p53，Ki-67 表达呈正相关关系，在正常粘膜中表达无明显相关。资料显示[15-16]，DNA受损后，能够使p53表达增强，进一步激活MDM2，2者结合形成MDM2-p53化合物，阻断细胞周期；p53表达降低时，MDM2表达随之减少，p53的抑癌作用可得到恢复。MDM2与p53作用的最终阶段都是细胞，Ki-67主宰着细胞周期的变化，研究显示[17]，MDM2和突变的p53能够诱导Ki-67转化，使得Ki-67水平上调，而p53能够在Ki-67的帮助下抑制信号传导通路，促进细胞凋亡，与本研究观点相同。

本研究通过对口腔白斑与口腔鳞状细胞癌患者MDM2，p53，Ki-67的表达情况及相关性进行分析，发现口腔白斑发展成为口腔鳞状细胞癌与MDM2，p53，Ki-67的高表达有关，MDM2、p53、Ki-67 3者之间呈正相关关系，为口腔鳞状细胞癌的早期诊断提供了方向。在下一步研究中，将对不同分期的口腔鳞状细胞癌MDM2，p53，Ki-67表达情况进行研究，进一步探讨3者与口腔鳞状细胞癌发展的关系。

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(编校：谭玲)

Correlation and differences in proto oncogene protein of patients with OLK and OSCC

LI Wei-wei, WEI Qi-ling, YANG Jin-hui, TONG Jing, CUI Qiu-ping

(Department of Stomatology, Tangshan Worker Hospital, Tangshan 063000, China)

ObjectiveTo analyse the significance of proto oncogene protein in oral squamous cell carcinoma and oral leukoplakia.Methods40 patients who were diagnosed with oral leukoplakia (OLK)，40 patients who were diagnosed with oral squamous cell carcinoma(OSCC)，and at the same time, 40 healthy volunteers as control group were collected.the lesions and normal oral mucosa were taken as samples, left supernatant after grinding, MDM2 protein, p53 protein and Ki-67 protein were detected by ELISA in three groups,and analyse the correlation between three groups.ResultsAmong three groups,MDM2, p53 expression:OSCC group>OLK group>control group (P<0.05).Ki-67 expression level among three groups, OSCC group>OLK group>control group (P<0.05).MDM2, p53, Ki-67 expression had a positive correlation in OSCC group and OLK group (P<0.05), but there was no obvious correlation in control group.ConclusionWhen oral leukoplakia developes into oral squamous cell carcinoma, MDM2, p53, Ki-67 shows high expression, and there is a positive correlation between MDM2, p53, Ki-67.

oral leukoplakia; oral squamous cell carcinoma; MDM2; p53; Ki-67

2012年唐山市科技局计划项目(121302119a)

李崴嵬，男，硕士,主治医师,研究方向：口腔修复，E-mail: kqlwwei@sina.com。

R739.8

A

1005-1678(2015)06-0065-03