博宁霉素对宫颈人乳头瘤病毒感染患者L1壳蛋白表达及血清免疫因子水平的影响

黄孟启，陈爱增，蔡文品

(1.苍南县第三人民医院 检验科，浙江 温州 325804；2.温州市中医院 检验科，浙江 温州 325000)



博宁霉素对宫颈人乳头瘤病毒感染患者L1壳蛋白表达及血清免疫因子水平的影响

黄孟启1，陈爱增1，蔡文品2Δ

(1.苍南县第三人民医院 检验科，浙江 温州 325804；2.温州市中医院 检验科，浙江 温州 325000)

目的 探讨博宁霉素对宫颈人乳头瘤病毒感染L1壳蛋白的表达及其免疫效果。方法 选取宫颈人乳头瘤病毒感染患者60例，根据用药不同分为实验组和对照组，每组各30例，对照组患者给予重组人干扰素α2b，10万IU/次，隔天1次，经期停用；实验组患者给予博宁霉素300 mg肌肉注射，隔天1次。治疗10次为1个疗程，连续2个疗程。治疗结束后比较患者HPVL1壳蛋白，血清TNF-α、IL-2、IFN-α水平以及HPV的阳性率。结果 治疗后，与对照组比较，实验组患者 HPVL1壳蛋白百分比明显上升(P<0.05)，实验组患者TNF-α、IFN-α水平升高(P<0.05)，IL-2水平降低(P<0.05)，实验组患者HPV的阳性率降低(P<0.05)。结论 博宁霉素能够降低宫颈人乳头瘤病毒感染患者L1壳蛋白百分比，升高血清TNF-α、IFN-α水平，降低IL-2水平，降低HPV的阳性率。

博宁霉素；人乳头瘤病毒；L1壳蛋白；免疫功能

人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)只能以人类为宿主，是一种在自然界广泛存在，与皮肤以及粘膜的增生性病变均有密切关系的无包膜双链环状DNA病毒，分子呈双链环状，属乳头多瘤空泡病毒科[1]。有报道显示[2]，近年来宫颈HPV感染的发病率逐年上升，且被感染患者的年龄趋于年轻化。研究表明[3]，HPV感染是宫颈癌发生的必要条件，因此受到了广泛关注，预防HPV感染已经升级为宫颈癌预防的二级措施。目前对于HPV感染的治疗手段主要包括冷冻、药物干预以及手术等方法，但这些方法治疗造成的并发症以及副作用较多，且应用手术治疗对人体必然有一定的侵袭性，患者不易接受[4]。博宁霉素[5]是分离争光霉素的复合物得到的新化合物，其主要成分在临床上被广泛用作抗肿瘤药，在临床上主要用于HPV感染的治疗。有研究表明[6]，其在治疗尖锐湿疣等疾病的疗效显著，但其机制尚不明确，且对于宫颈HPV感染的研究尚少，因此本研究通过探讨博宁霉素对宫颈人乳头瘤病毒感染L1壳蛋白的表达及其免疫效果，对临床博宁霉素的广泛应用提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集苍南县第三人民医院2014年6月～2015年1月收治的宫颈人乳头瘤病毒感染女性患者60例，按照随机数字表随机分为2组，即实验组和对照组，每组各30例。所有患者均符合宫颈HPV感染诊断标准。2组患者一般资料相比差异无统计学意义，具有可比性。所有患者均同意进行试验措施，并签署知情同意书。

1.2 纳入标准 所有患者符合《妇产科抗生素使用指南》解读[7]中宫颈人乳头瘤病毒的亚临床感染诊断标准：宫颈病理组织及阴道镜检查可见组织发生改变；TCT结果为HPV阳性；所有患者均为女性，年龄在18～45岁之间；所有患者均为已有性生活；患者在进行试验措施前2周均未进行过相关治疗。

1.3 排除标准 排除病理检查为重度非典型增生或宫颈癌者；排除合并有严重的霉菌性、滴虫性阴道炎的患者；排除有心脑血管疾病以及肝肾功能不全的患者；排除哺乳期及妊娠期女性；排除有精神疾病的患者；排除不接受实验措施的患者。

1.4 方法

1.4.1 治疗方法:按照临床用药指南，给予对照组患者重组人干扰素α2b，规格为10万IU/枚，1次1枚，隔天1次，经期停用；给予实验组患者给予博宁霉素300 mg肌肉注射，隔天1次。治疗均以10次为1个疗程，连续2个疗程。

1.4.2 HPVL1壳蛋白检测:分别于实验前后，患者采用截石位，使用窥阴器暴露宫颈，擦去宫颈表面及穹窿分泌物，以宫颈外口为中心，用子宫颈刷在鳞柱状上皮交界处均匀地刷3～5下，取出宫颈刷立即置于细胞保存液中。严格按照制片说明书进行制片，染色，采用美国Advanced Medical Science公司的HPV L1试剂盒，严格按照说明书操作，HPVLl壳蛋白表达阳性以显微镜下阅片有1个被红染的细胞核即可诊断，计算HPVLl壳蛋白阳性率。

1.4.3 血清TNF-α、IL-2、IFN-α水平检测:所有患者分别于治疗前后清晨空腹采集静脉血5 mL，离心分离血清，-20℃条件下保存待检，采用酶联免疫吸附分析方法(ELISA)，检测患者血清TNF-α、IFN-α以及IL-2水平(试剂盒购买于武汉博士的生物技术有限公司)，严格按照说明书进行操作。

1.4.4 液基薄层细胞检测(thinprep cytology test，TCT):统计治疗前后2组患者的HPV的阳性率。根据2001年的子宫颈/阴道细胞学诊断的TBS(The Bethesda System)系统，细胞学结果：①阴性：正常细胞以及组织细胞的良性改变；②阳性：各种程度的鳞状上皮细胞异常，包括非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells of undetermined signification，ASCUS)阳性、低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)阳性，高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)阳性 ；腺上皮的异常包括非典型腺细胞(atypical glandular cells，AGC)、非典型腺细胞(不能明确意义)(AGC-NOS)、宫颈腺原位癌(adenocarcinoma in situ，AIS)以及腺癌(adenocarcinoma，AC)。

2 结果

2.1 患者一般情况比较 2组患者的一般资料相比，差异无统计学意义，具有可比性，见表1。

表1 2组患者一般情况Tab.1 Comparison of the baseline between two ±s)

2.2 HPVL1壳蛋白水平比较 与治疗前相比，2组患者治疗后HPVL1壳蛋白阳性百分比显著升高(P<0.05)。治疗后，与对照组相比，实验组的HPVL1壳蛋白阳性百分比升高较为(P<0.05)，见表2。

表2 治疗前后2组患者HPVL1壳蛋白阳性百分比比较±s，%)Tab.2 Comparison of positive rate HPVL1 between two ±s，%)

*P<0.05，与治疗前相比，compared with before treatment；#P<0.05，与对照组相比，compared with control group

2.3 血清TNF-α、IL-2、IFN-α水平比较 与治疗前相比，2组患者治疗后血清TNF-α、IFN-α水平显著升高，IL-2水平显著降低(P<0.05)。治疗后，与对照组相比，实验组患者的TNF-α、IFN-α水平显著升高，IL-2水平显著降低(P<0.05)，见表3。

表3 治疗前后2组患者TNF-α、IL-2、IFN-α水平比较Tab.

*P<0.05，与治疗前相比，compared with before treatment；#P<0.05，与对照组相比，compared with control group

2.4 治疗前后HPV的阳性率比较 与治疗前相比，治疗后2组患者的HPV阳性率明显下降(P<0.05)。治疗后，与对照组相比，实验组患者的HPV阳性率下降较明显(χ2=4.28，P<0.05)，见表4。

表4 治疗前后2组患者HPV阳性率比较Tab.4 Comparison of HPV positive rate between two ±s，%)

3 讨论

人乳头瘤病毒与宫颈癌的发生密切相关。根据统计，50 %的宫颈癌与HPV感染相关。持续慢性的HPV感染与宫颈癌的发生密切相关[8]。研究表明，全世界每年约有6亿女性感染HPV，其中部分患者能够通过自身的免疫系统自愈，约10%的患者最终发展为宫颈癌[9]。因此，免疫系统功能的正常对HPV患者的康复尤为重要。找到能够抑制HPV感染有关的免疫因子对于抑制其感染具有重要意义[10]。有研究表明[11-12]，TNF-α、IL-2、IFN-α等的水平与HPV感染患者的预后关系密切。同时，HPVL1壳蛋白作为HPV病毒的衣壳， 在病毒感染过程中也起到了重要作用。

本研究表明，治疗后，2组患者的HPVL1壳蛋白阳性百分比明显下降，与对照组相比，实验组的HPVL1壳蛋白阳性百分比下降较为明显(P<0.05)。HPVL1壳蛋白[13]是HPV病毒主要的衣壳蛋白，在病毒感染过程中，可精确的识别宿主细胞表面的蛋白受体。有研究表明[14]，HPVL1壳蛋白表达的强弱与患者宫颈损伤程度相关。当宫颈上皮的瘤变级别较低时，宫颈上皮处于良好的分化状态，促使L1壳蛋白的表达；当宫颈组织处于严重损伤状态时，上皮分化状态较差，从而抑制Ll蛋白表达，使其表达缺失。L1壳蛋白的缺失可导致机体免疫功能的下降， 促进了疾病的发生。还有的研究表明[15]，在慢性的HPV感染过程中，病毒基因整合会伴有Ll基因的缺失，导致其表达量下降。此外，HPVL1壳蛋白对宫颈疾病的预后判断也具有重要意义。

本研究表明，治疗后，2组患者的血清TNF-α、IFN-α水平明显升高，IL-2水平明显降低，与对照组相比，实验组患者的TNF-α、IFN-α水平明显升高，IL-2水平明显降低(P<0.05)。IL-2和INF-γ都是Thl细胞分泌的细胞因子，能够介导细胞的免疫应答[16]。Th2细胞参与体液免疫应答，与Thl细胞互相制约，处于动态平衡状态，当Thl向Th2偏移时，机体的免疫功能下降，促进肿瘤以及其他疾病的发生。故IL-2与TNF-α在宫颈HPV感染的发生起到了一定作用。IFN-α由白细胞分泌，能够造成一系列干扰素调控基因表达，促进机体获得抗病毒的能力[17]。因此，TNF-α、IL-2、IFN-α水平对于本病的转归具有非常重要的意义。

本研究通过探讨博宁霉素对宫颈HPV感染患者HPVL1壳蛋白、血清TNF-α、IFN-α、IL-2水平以及患者HPV病毒阳性率的变化情况，证实了博宁霉素能够抑制宫颈HPV感染的发展，且作用安全。在下一步研究中，本课题组将对本实验得出的结论进行更加深入的研究和探讨，为本实验所得出的结论做出进一步论证。

[1] zur Hausen H,De Villiers EM.Human papilloma viruses[J].Ann.Rev.Micobiol,1994,48(1):427-447.

[2] 陈昕华，虞永麟.宫颈HPV感染，CIN及宫颈癌3年发生情况分析[J].中国妇幼保健，2011，26(13)：1945-1946.

[3] 邓国华，张洵.人乳头状瘤病毒与宫颈癌[J].诊断病理学杂志，2009，16(6)：469-472.

[4] 赵小迎.药物结合物理疗法治疗宫颈HPV感染临床观察[J].浙江中西医结合杂志，2009，19(12)：737-739.

[5] 高宁.博宁霉素抗肿瘤和抗人乳头瘤病毒作用机制的研究[D].北京协和医学院，2011.

[6] 李新宇，高纪伟，徐兰芳，等.盐酸博宁霉素对人表皮角质形成细胞，宫颈鳞癌细胞和表皮癌细胞增殖的影响[J].中国麻风皮肤病杂志，2009，25(4)：249-251.

[7] 刘朝晖.《妇产科抗生素使用指南》解读[J].中国实用妇科与产科杂志，2012(7)：483-484.

[8] 王薇，马丁.人乳头状瘤病毒持续感染与宫颈癌变相关的危险因素[J].中国肿瘤，2007，16(5)：316-319.

[9] 陈仲波.宫颈癌人乳头瘤病毒基因型分布及与临床病理关系的研究[D].浙江大学医学院，2009.

[10] 杨友道，石建凤.特异性生物治疗对HPV患者免疫功能的影响及疗效初探[J].实用医技杂志，2006，13(3)：376-376.

[11] 焦立群，戴大江，张虎.检测HBV和HCV重叠感染患者血清中TNF-α及IFN-γ水平的意义[J].标记免疫分析与临床，2009，16(4)：261-262.

[12] 黄蓉.尖锐湿疣患者血清IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ水平研究[D].四川大学，2004.

[13] 张海燕，欧雪峰，唐华贵，等.HPVL1衣壳蛋白，P16在宫颈鳞状上皮内病变组织中的表达及其意义[J].海南医学院学报，2012，18(5)：607-609.

[14] 梁媛哲.新疆妇女宫颈癌前病变中HPVL1壳蛋白表达与高危HPV型别的相关性研究[D].石河子大学，2014.

[15] 隋霜，尼牙孜玛依努尔，朱开春.人乳头状瘤病毒DNA甲基化与宫颈癌的研究进展[J].中国病毒病杂志，2014(2)：155-160.

[16] 袁林，徐又先，陈静，等.中药二黄散对伴有HPV感染的CINⅠ患者宫颈局部微环境的影响[J].中药药理与临床，2013，29(3)：187-189.

[17] Michelin MA,Montes L,Nomelini RS,et al.Helper T Lymphocyte Response in the Peripheral Blood of Patients with Intraepithelial Neoplasia Submitted to Immunotherapy with Pegylated Interferon-α[J].Int J Mol Sci,2015,16(3):5497-5509.

(编校：王俨俨)

Effect of boningmycin on expression of capsid protein L1 and serum immune factors in cervical HPV infection patients

HUANG Meng-qi1, CHEN Ai-zeng1,CAI Wen-jing2Δ

(1. Department of Inspection, Third People’s Hospital of Cangnan County, Wenzhou 325804, China; 2.Department of Laboratory, Wenzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Wenzhou 325000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of boningmycin on expression of capsid protein L1 and serum immune factors in cervical HPV infection patients. Methods60 patients with cervical HPV infection were divided into experimental group and control group, 30 cases in each group. The control group were given recombinant human interferon α2b suppository, 100 000 IU, once every other day, and the experiment group were given boningmycin 300 mg intramuscular injection,once every other day.Treatment of 10 times for a course,2 consecutive courses After treatment, the HPV capsid protein L1, serum TNF-α, IL-2, IFN-α and HPV were compared.ResultsCompared with control group after treatment, the percentage of HPV capsid protein L1 increased (P<0.05), serum TNF-α, IFN-α levels increased(P<0.05), IL-2 decreased (P<0.05), and HPV positive rate decreased(P<0.05).ConclusionBoningmycin could reduce the percentage of capsid protein L1 in patients with cervical human papilloma virus infection, elevate serum TNF-α and IFN-α levels, reduce the level of IL-2 and HPV positive rate.

boningmycin; human papillomavirus; capsid protein L1; immune function

苍南县科技计划项目(2013823)

黄孟启，男，本科，主管检验师，研究方向：临床检验，E-mail:hmqjyyx@163.com；蔡文品，通讯作者，男，本科，副主任技师，研究方向：医学检验，E-mail:wenzhoucaiwjing@126.com。

R737.3

A

1005-1678(2015)06-0059-03