GC-ECD及GC-MS法测定祖卡木颗粒及其部分原料药中20种有机氯农药残留量

杨光勇， 葛 婧, 王伟萍

(新疆维吾尔自治区食品药品检验所， 乌鲁木齐 830004)

GC-ECD及GC-MS法测定祖卡木颗粒及其部分原料药中20种有机氯农药残留量

杨光勇， 葛 婧, 王伟萍

(新疆维吾尔自治区食品药品检验所， 乌鲁木齐 830004)

目的 建立测定维药祖卡木颗粒及其部分原料药中20种有机氯农药残留的气相色谱法和气质联用法。方法 分别采用乙腈、CARBON/PSA固相萃取柱对祖卡木颗粒及其部分原料药进行提取和净化，MS和ECD分别进行检测，根据色谱保留时间和质荷比信息对样品进行定性分析，GC-ECD法进行定量分析。以DB-5MS色谱柱对待测组分进行分离，柱温采用程序升温方式，柱流量1 mL/min，进样口温度230℃，ECD温度300℃；离子源为EI源，解离电压70 eV，离子源温度240℃，传输线温度250℃，四级杆温度150℃，采用SCAN模式，扫描质荷比范围m/z 45～400。结果 20种有机氯农药分离良好(分离度≥1.512)，各组分平均回收率为72.4%～108.9%(n=6)，有机氯类农药在0.002～0.500μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r2≥0.997 1)。结论 该方法简便、准确且可靠，可以为祖卡木颗粒质量标准的完善提供参考依据。

祖卡木颗粒； 固相萃取；GC-ECD；GS-MS； 农药残留

有机氯农药的化学性质稳定，在环境中降解缓慢，并可通过生物链富集在动物和植物体内，危害较大。我国已于20世纪80年代禁止使用有机氯农药，但至今仍能在水域、土壤、生物体内检出。祖卡木颗粒是由山柰、睡莲花、破布木果、薄荷、大枣、洋甘菊、甘草、蜀葵子、大黄、罂粟壳10味中药制成的颗粒剂，适用于感冒咳嗽、咽喉肿痛等症状[1]。其采用的多种植物器官性药材在种植过程中可能会吸收农药并有残留，但目前未见相关研究报道。残留农药的提取和净化方式主要有超临界流体萃取[2-3]、固相萃取[4-5]、微波辅助提取[6-7]、免疫亲和色谱等技术[8-9]，GC-ECD法对于痕量级的有机氯农药残留检测具有灵敏度高和精密度好的优势[10-12]。本研究分别采用乙腈、CARBON/PSA固相萃取柱对样品进行提取和净化，采用GC-MS法对样品各组分进行定性分析，再以GC-ECD法进行定量分析，首次对祖卡木颗粒及其部分原料药中的20种有机氯农药残留进行了分离分析，旨在为祖卡木颗粒质量标准的完善提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器GC-2010Plus气相色谱仪(日本岛津公司)，QP-2010Plus气相色谱-质谱联用仪(日本岛津公司)，超声波振荡器(上海科导超声仪器有限公司)，旋转蒸发仪(日本东京理化器械公司)，METTLER AE200S电子天平(德国梅特勒-托利多公司)，固相萃取装置(美国安捷伦公司)，固相萃取CARBON/PSA小柱(Waters公司)。

1.2 试药祖卡木颗粒、山柰、睡莲花、大枣、洋甘菊、甘草均由某生产厂家提供。农药残留标准品：艾氏剂、狄氏剂、顺氯丹、反氯丹、P,P′-DDE、P,P′-DDD、O,P′-DDT、P,P′-DDT、异狄氏剂、七氯、环氧七氯、六氯代苯、α-BHC、β-BHC、δ-BHC、林丹、五氯硝苯(购自农业部环境保护科研监测所，浓度均为100 μg/mL)，五氯苯胺(100 μg/mL)、甲基五氯苯硫醚(100 μg/mL)和氧氯丹(100 μg/mL)购自德国。乙腈(Fisher公司)为色谱纯，正己烷(Honeywell Burdick & Jackson公司)、甲苯(Merck-Millipore公司)均为农药残留级。

2 方法与结果

2.1 仪器条件

2.1.1 气相色谱条件 以DB-5MS(30 m×0.25 mm,0.25 μm)弹性石英毛细管色谱柱对待测组分进行分离；采用程序升温方式，柱温程序为：100℃维持1 min，10℃/min升至220℃维持5 min，8℃/min升至250℃维持3 min，30℃/min升至290℃维持11 min；柱流量1 mL/min；进样口温度230℃，进样量1 μL，分流比10；ECD温度300℃。

2.1.2 质谱条件 电离方式：离子源为EI源，解离电压为70 eV，离子源温度为240℃，传输线温度250℃ ，四级杆温度150℃，SCAN模式，扫描m/z范围为45～400。

2.2 供试品溶液制备精密称取经研磨(祖卡木颗粒)或粉碎(药材)并过3号筛(50目)的供试品5 g，置于25 mL容量瓶中，加入20 mL乙腈，超声提取20 min，过滤，收集滤液；再加20 mL乙腈，重复上述操作，合并2次收集的滤液，置旋转蒸发仪上，30℃蒸发至约5 mL。取上述浓缩液置于CARBON/PSA 净化管中，收集流出液，并用45 mL乙腈∶甲苯(3∶1)洗脱，收集并合并流出液，30℃旋转蒸发至近干，用正己烷溶解至5 mL，即为供试品溶液。

2.3 标准品溶液的测定及系统适用性

2.3.1 GC-ECD测定结果 取各农药残留混合对照溶液1 μL注入气相色谱仪，结果显示各峰分离度均≥1.512，理论塔板数≥479 366，色谱图见图1。

图1 标准品的GC-ECD色谱图

(1：α-BHC；2：六氯代苯；3：β-BHC；4：林丹；5：五氯硝苯；6：δ-BHC；7：五氯苯胺；8：七氯；9：甲基五氯苯硫醚；10：艾氏剂；11：氧氯丹；12：环氧七氯；13：反氯丹；14：顺氯丹；15：P,P′-DDE；16：狄氏剂；17：异狄试剂；18：P,P′-DDD；19：O,P′-DDT；20：P,P′-DDT)

2.3.2 GC-MS测定结果 取各农药残留混合对照溶液1 μL注入气质联用仪，在既定的色谱质谱条件下进行扫描，根据保留时间对各组分进行分析，分别选取2～3个质荷比离子进行定性分析，见图2、表1。

图2 标准品的TIC图

2.4 线性范围分别吸取上述有机氯农药标准溶液1 mL置于100 mL容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，作为标准溶液储备液；分别吸取标准溶液储备溶液0.1、0.2、0.5、5、10、25 mL置于50 mL容量瓶中，正己烷稀释至刻度，作为标准曲线梯度溶液，浓度分别为0.002、0.004、0.01、0.1、0.2、0.5 μg/mL。分别取各梯度浓度的对照品溶液1 μL注入气相色谱仪，记录实验结果。以浓度(C)为横坐标，相应的峰面积(A)为纵坐标，计算回归方程。结果表明：有机氯类农药在0.002～0.500μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r2≥0.997 1)。各组分回归方程及R2值见表1。

2.5 回收率试验称取样品细粉6份，每份1g，精密称定，置25mL量瓶中，分别精密加入0.5μg/mL的标准品溶液1mL，按上述供试品溶液制备方法和测定条件测定含量，各组分的平均回收率见表1。

表1 各组分保留时间、线性回归方程及回收率

2.6 样品测定结果精密量取制备好的祖卡木颗粒及药材溶液1μL注入气质联用仪，分别根据色谱保留时间和质荷比信息对样品中各色谱峰进行定性分析。排除假阳性干扰后，再精密量取阳性检出的样品溶液1μL注入气相色谱仪，根据峰面积以标准曲线法计算各残留农药的含量，结果见表2。

表2 供试品中农残含量测定结果/(μg/kg)

3 结论

本研究分别考查了DB-5MS型、DB-624型、RTX-3型等不同型号色谱柱在不同色谱柱温下对待测组分的分离能力，最终确定上述色谱条件。同时考查了不同超声提取时间、不同洗脱液组成比例以及不同洗脱体积对待测组分含量的影响。建立了气相色谱法及气质联用法同时检测祖卡木颗粒及所含部分药材中20种有机氯农药残留的方法，该方法简便，可操作性强，在实现准确定量的同时，有效排除了假阳性的干扰，各组分分离良好，极大地简化了操作过程，节约成本，有望为相关质量标准的完善提供技术支持。

[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册[S].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1998:175.

[2] 戴建昌,张兴,段苓.超临界萃取技术在农药残留分析中的应用研究进展[J].农药学学报, 2002,4(3):6-11.

[3] 薄尔琳,于基成,曹远银.超临界流体萃取技术在农药残留分析中的应用[J].安徽农科学, 2006,34(15):3743-3746.

[4] 观文娜,刘文民,赵景红,等.固相萃取技术及其在农残和有机污染物方面的应用[J].现代科学仪器,2007,17(1):11-13.

[5] 姚青.分散固相萃取-气相色谱法同时测定黄瓜中的多种农药残留[J].质量技术监督研究,2011,15(3):29-31.

[6] 吴金浩,李爱,刘桂英.微波辅助萃取-气相色谱法检测裙带菜中的多氯联苯和有机氯农药残留[J].环境化学,2013,32(1):156-161.

[7] 张本山,于淑娟,曾新安,等.微波萃取气相色谱法测定淀粉中14种有机氯农药残留[J].分析测试学报,2011,30(3):344-348.

[8] 韦林洪,刘曙照,邵秀金,等.绿磺隆克百威三唑磷多抗体免疫亲和色谱技术研究[J].农业环境科学学报,2009,28(10):2211-2216.

[9] 刘曙照,韦林洪,徐维娜.克百威的免疫亲和色谱分析研究[J].色谱,2005,23(2):134-137.

[10] 郭青,邓鸣,宁青,等.采用GC-ECD和GC-MS分别测定并比较甘草锌颗粒及复心片中二十种有机氯农药残留量[J].中成药,2008,11(30):1624-1628.

[11] 粟华生,邱莉,周坚,等.SPE-GC-ECD法测定人参药材中21种有机氯农药残留量[J].药物分析杂志,2010,30(8):1484-1492.

[12] 张权,陈文生,洪亮,等.MSPD-GPC净化GC-ECD法测定辣椒酱中8种有机氯农药残留分析[J].食品科学,2014,35(8):295-298.

(本文编辑 施洋)

Determination of twenty organochlorine pesticide residues in Zukamu Granules and part of its crude drug by GC-ECD and GC-MS

YANG Guangyong，GE Jing，WANG Weiping

(InstitutionforFoodandDrugControlXinjiangUyghurAutonomousRegion，Urumqi830004，China)

Objective To establish a method for determination of 20 organochlorine pesticide residues in Zukamu Granules and part of its crude drug. Methods Acetonitrile and CARBON/PSA SPE were used to extract and purify Zukamu Granules and part of its crude drug, ECD and MS were introduced as the detections respectively, the column DB-5MS was used for the separations of target pesticides, column flow was at 1 mL/min， the inlet was set at 230℃ and ECD at 300℃， ion source was EI，electron energy was at 70eV, and the source temperature was set at 240℃, transfer line and quadrupole were set at 250℃ and 150℃, scan mode was used, the range is m/z 45～400. Results 20 organochlorine pesticide were separated well by this method (Resolution ≥1.512), the recovery rate was at the range of 72.4%～108.9%, there were good linear relationships between the peak area and concentration at the range of 0.002～0.500 μg/mL (R2≥0.997 1)． Conclusion The method is simple, accurate reliable, and can provide reference basis for improving quality standard of Zukamu Granules．

Zukamu Granules； SPE； GC-ECD； GC-MS； pesticide residues

国家药品(维药)标准提高研究课题项目(793)

杨光勇(1983-)，男，本科，药师，研究方向：药品与食品理化检验。

R

A

1009-5551(2015)12-1500-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.12.011

2015-3-12]