痰处理液简易液基涂片技术在痰液检查诊断肺癌中应用

2015-06-22杨建峰

现代医药卫生 2015年19期

关键词：细胞学涂片黏液

杨建峰

（亳州市人民医院，安徽236800）

痰处理液简易液基涂片技术在痰液检查诊断肺癌中应用

杨建峰

（亳州市人民医院，安徽236800）

目的探讨痰处理液简易液基涂片技术在痰标本诊断肺癌中的临床应用价值，并与传统直接涂片法进行比较。方法临床送检的80例患者痰液标本，将同一标本分成两组，一组用传统直接涂片法制片（A组，80例），另一组对剩余痰标本采用痰处理液联合简易液基涂片的方法进行制片（B组，80例），然后对两组所制涂片经固定后同时进行常规苏木素-伊红染色，光镜下对2种制片方法的诊断结果和制片质量进行比较分析。结果B组80例痰标本经痰处理液处理后，制作的细胞涂片背景干净，细胞结构清晰，检测出癌和可疑癌共64例，与临床的符合率为80.0%，A组传统涂片中检测出癌和可疑癌共43例，与临床的符合率为53.8%，二者比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论痰处理液简易液基涂片法较传统直接涂片法更能有效地提高痰标本癌细胞的检出率及制片质量，具有较好的临床应用价值。

痰/细胞学；肿瘤/病理学；标本制备；染色与标记；痰处理液；液基涂片；肺

痰细胞学检查是肺癌诊断中最便捷、最经济的诊断方法，具有简便、安全、无痛苦等优点，可以大致判断肿瘤的组织学类型，而癌肿的组织学类型对于肺癌的治疗很重要。由于肺癌活检困难，再加上影像学检查在早期缺乏足够的特异性，因此某些时候痰细胞学检查在诊断中可起到决定性的作用。传统的痰细胞学一直用直接涂片法，但由于痰液中含有大量黏液，涂片厚薄不均，痰标本中的细胞成分不易分离，涂片中细胞量减少，大量黏液的存在使涂片背景不干净，制片质量不佳而影响细胞观察，致使痰涂片癌细胞的阳性检出率降低，假阴性率增高，影响肺癌的诊断，多数痰细胞学的漏诊与误诊始于低劣的制片和染色技术。因此，高质量的痰细胞学涂片及染色是获得准确诊断的重要环节。重视痰细胞学的制作质量无疑是提高痰细胞学阳性检出率的重要保证。为提高痰细胞学检查的制片质量，近年来相继开展了液基细胞学检测技术并将其应用于痰细胞学检查中，但新柏氏TCT等液基薄层制片技术所用液基，价格较贵，制片过程繁琐，且痰黏液消化效果不理想等，致使国内许多单位未能开展。为此，本研究经大量实验，并根据痰液的性质，自行研制了“痰处理液”联合简易液基涂片技术应用于肺癌的筛查和病理诊断工作中，提高了痰检阳性率及工作效率，且使痰标本的制片质量得到明显提高。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 一般资料收集本院2013年1月至2015年3月呼吸科、肿瘤科经临床或病理证实肺癌患者80例，患者晨起漱口后咳出肺深部痰，将痰液收集到可密封塑料盒中送检。将同一标本分成两组，一组用传统直接涂片法涂片（A组，80例），另一组剩余标本放入自制痰细胞处理液中经处理后制作细胞涂片（B组，80例）。

1.1.2 痰处理液的成分乙醇、磷酸盐、盐酸溴己新、苯酚、蒸馏水按一定比例混合。

1.1.3 仪器与器材振荡仪、离心机、一次性塑料试管及滴管。

1.2 制片方法

1.2.1 传统直接涂片法将塑料盒内送检的痰液，用眼科镊或竹签仔细挑取少许灰白色带血丝样病变的可疑痰标本，采用推片法制成涂片2张，待涂片微干后，用95%乙醇固定15 min，行苏木素-伊红（HE），封片。

1.2.2 痰处理液简易液基制片法取2～3 mL剩余痰液加入放有痰处理液的TCT锥形瓶中，振荡器震荡混匀后，静置20 min，破坏其黏性，充分液化，如混合液中仍有凝结，可再加一些自制痰细胞处理液，直至黏液溶解。用一次性滴管吸取锥形瓶底部的溶液加入一次性塑料试管中，放入离心机，1 000 r/min离心10 min，去掉上清液，放振荡器震荡几十秒后，用一次性滴管吸出塑料试管底部沉淀涂薄片2张，用95%乙醇固定15 min，行HE或巴氏染色，封片。

1.3 统计学处理应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 A、B组制片质量比较 A组传统直接涂片中黏液及杂质较多，红细胞、中性粒细胞及淋巴细胞较多，背景污秽，细胞结构不清晰，厚薄不均，上皮细胞成堆分布，阳性涂片中癌细胞较少且与上皮混杂重叠，需仔细寻找辨认。而B组痰处理液简易液基涂片，镜下黏液丝溶解，背景较干净，无黏液及过多的红细胞、中性粒细胞及淋巴细胞，细胞结构显示清晰，细胞数量明显增多，且分散无重叠，阳性涂片中癌细胞分散，形态清楚，容易辨认。见图1。

图1 痰标本涂片HE染色（HE，10×）

2.2 2种方法检测肺癌细胞的符合率比较 B组80例痰标本经痰液处理液处理后，制作的细胞涂片中检测出癌和可疑癌共64例，与临床的符合率为80.0%，A组传统涂片中检测出癌和可疑癌共43例，与临床的符合率为53.8%。B组痰处理液简易液基制片法的符合率高于A组传统直接涂片法，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

为提高痰细胞学的制片质量及阳性率，国内外许多学者提出很多方法，比如，物理搅拌乳化痰、多种蛋白分解酶处理痰液、液基薄层制片法处理痰液、多种痰细胞处理液的应用、痰沉渣石蜡包埋等，都有各自的缺点。比如物理搅拌法及蛋白酶处理影响细胞形态，同时须特殊仪器设备，耗材试剂；液基薄层制片法价格较贵，制片过程繁琐，痰液溶解剂有时易使细胞变性；细胞处理液制片时需要特殊的制片盒或制片夹，同时溶液配制成分复杂，须特殊药品、试剂，增加成本，费时耗力；痰沉渣石蜡包埋制片时间长，并且不能消除黏液、炎性细胞及红细胞的干扰[1-11]。本研究所制备的痰处理液与其他痰细胞处理液原理基本相同，盐酸溴己新溶解痰中黏液，固定液及缓冲液防止细胞自溶，然后离心沉淀收集细胞。与其他方法比较有以下特点：（1）本处理液成分简单、常见，价格低廉，制备方便，无特殊要求，一次制备的溶液能处理100多个痰标本，损耗低、耐用；（2）简易液基制片法与其他制片法比较能免去部分耗材、仪器设备，同时免去很多步骤，所以制片时间有所缩短，费用大大降低。与直接涂片法相比固然增添了溶解黏液、离心涂片这些步骤，但制片质量及阳性率的提高足以弥补这部分工作量的增加。基于以上2个特点本方法尤其适用于基层医院。由于基层医院受基础设施、经费、技术、人员等因素的限制，许多条件要求较高或较为昂贵的检查项目无法开展，对肺部占位性病变的诊断方法很有限。痰脱落细胞学检查诊断技术具有经济、简便、无痛苦、快速、准确等优点，不需要贵重仪器，适合在基层医院和社区卫生服务中心推广[12]。

除制片质量因素外，在实际工作中还存在一些问题，影响痰细胞学阳性率的提高，作者通过工作实践总结了以下2点：（1）留取痰液不合格，不是真正支气管分泌物或肺深部痰，有些甚至是带有食物碎屑的唾液，镜下只有鳞状上皮细胞，要获得合格痰液有赖于临床医生和护士对患者的指导和教育。树立高度的责任心，认真详细讲解痰标本的正确留取方法和注意事项。（2）痰液送检及处理不及时，在采集标本时要求痰液新鲜，30 min至1 h送检及处理，不然极易引起褪变，但实际工作中往往是早上送检的痰标本等到下午连同胸、腹腔积液等其他标本集中成批处理、制片，这样导致细胞发生自溶，结构不清，或者涂片中有癌细胞，但由于数量少或癌细胞异型性不明显，而误诊为阴性。这2种情况造成的假阴性不是真正的阴性，应避免，而且可以避免[13]。

所谓假阴性是指肯定为肺癌的病例，在送检标本合格的条件下，多次细胞学检查均未发现癌细胞。本研究结果发现，有20%的肺癌病例痰涂片的确无癌细胞，即使痰液合格，处理及时，多次重复检查，认真负责阅片，仍然是阴性。这是由于肺癌晚期，随着肿瘤长大，支气管腔逐渐变狭小，尤其是外周型肺癌，当肿瘤达到一定体积后狭小的支气管管腔很容易发生闭塞，使脱落的癌细胞无法随痰排出，造成假阴性。我国细胞学检查的病例，相当一部分是中晚期肺癌，所以细胞学阳性率总是在70%～80%，很难提高。这种阴性是细胞方法上的局限性，非人力所能解决的。为及时确定诊断，应积极考虑作细针吸取细胞学检查，以弥补脱落细胞学的局限性[13]。

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