2013～2014年湖州市手足口病病原和临床特征分析

黄秋玲等

[摘要] 目的 了解湖州市2013～2014年手足口病病原构成及其临床相关特征。 方法 采集208例疑似手足口病感染者的253份标本（咽拭子45份和粪便208份）和相关临床资料，采用一步法三色荧光定量RT-PCR检测临床样本。 结果 一步法荧光定量RT-PCR检测表明，208例手足口病患儿中，EV的检出率为83.17%（173/208），其中EV71、CoxA16和其他EV亚型所占EV的比例分别为55.49%、13.29%和31.21%，且男、女患儿之间的检测结果并无显著差异。5岁及以下（≤5岁）手足口病患儿中，主要的病原为EV71，而5岁以上以其他EV亚型为主；临床症状以发热伴疱疹为手足口病的主要症状，而引起发热伴呕吐、疱疹或神经系统症状的主要肠道病毒为EV71。此外粪便样本的EV检出率高于咽拭子样本的EV检出率。 结论 肠道病毒EV71和其他EV亚型是湖州市儿童手足口病的优势病原体，而CoxA16病毒呈现下降趋势，因此加强EV、EV71和CoxA16的监测有助于更好地预防和控制手足口病。

[关键词] 手足口病；肠道病毒71型；柯萨奇病毒A16型

[中图分类号] R512.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）13-0044-03

[Abstract] Objective To explore the pathogens and clinical characterization of hand， foot and mouth disease （HFMD） in Huzhou city from 2013 to 2014. Methods All 253 specimens included 208 stool specimens and 45 throat swabs， and clinical data from 208 children cases with hand， foot and mouth diseases（HFMD） were collected. Preliminary detection for all of the specimens was performed by one-step triple real-time RT-PCR assay. Results Real-time RT-PCR assay indicated that the positive rate of Enterovirus（EV）from 208 cases was 83.17% （173/208）， and the percentages of EV71， CoxA16 and others EV subtypes in 173 enteroviruses were 55.49%， 13.29% and 31.21%， respectively. These results were not significant differences between male and female children. EV71 from children with HFMD was predominant strain below 5 old years （≤5）， and others EV subtypes were predominant strains over 5 years （>5）. Of fever with herpes was main clinical symptom in patients with HFMD， and EV71 was primary enterovirus induced many clinical features， such as fever with herpes or vomiting or neurological symptoms and so on. Additionally， detection rate of EV in stool specimens was significant higher than that in throat swabs. Conclusion EV71 and others EV subtypes are predominant strains， CoxA16 strains have a downtrend in patients with HFMD in Huzhou city， so that the medical workers should improve the ability of surveillance to EV，EV71 and CoxA16 in order to make better for control and prevention of the HFMD diseases.

[Key words] Hand， foot and mouth disease； Enterovirus 71； Coxsackie A16

手足口病（hand， foot and mouth disease， HFMD）是由多种肠道病毒（enterovirus， EV）引起的常见传染病，多发于婴幼儿。大多数患者临床症状较轻，可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹等症状，个别患者可引起心肌炎、无菌性脑膜脑炎等并发症[1，2]。该病一般由肠道病毒71型 （EV71）、柯萨奇病毒 （Cox）A4、A5、A16和B1、B3等肠道病毒引起，EV71和CoxA16 型最为常见[2，3]。

EV71和CoxA16感染所引起的手足口病在临床上难以区别，特别是EV71能够引起中枢神经系统疾病，而且近年来，EV71在亚太地区的流行呈上升趋势，并出现死亡病例，由于CoxA16与心肌炎、心包炎等疾病相关而逐渐受到重视[4，6]。

为了解湖州市区手足口病的情况，我们收集了2013年5月～2014年7月期间共208例疑似手足口病感染者的253份不同类型的标本和相应的临床资料，采用一步法三色荧光定量RT-PCR方法进行初步检测分析。

1 对象与方法

1.1 研究对象

根据《手足口病诊疗指南（2013年版）》诊断标准，从湖州市中心医院和湖州市第一人民医院采集208例临床初步诊断为手足口病感染者的253份标本（咽拭子45份和粪便208份），其中男116例，女92例，年龄10个月～7岁，平均（2.65±1.56）岁。同时收集患者相应的临床资料，标本采集后置-80℃冰箱冻存待检。

1.2 试剂和仪器

QIAamp Viral RNA Mini Kit（Cat：57704）病毒RNA核酸提取试剂盒购自Qiagen公司，手足口病EV71、CA16及通用型肠道病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）（HRP0011）购自江苏默乐生物科技有限公司，ABI7500 PCR仪为美国ABI公司生产。

1.3 方法

1.3.1 RNA核酸提取 根据QIAamp Viral RNA Mini Kit的操作说明书提取临床采集样本的RNA核酸，收集RNA提取液终体积为50μL，-80℃保存备用。

1.3.2 一步法荧光定量RT-PCR扩增 根据手足口病EV71、CA16及通用型肠道病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）的操作说明书进行试剂的配置和核酸检测。简要说明如下：反应体系为：RT-PCR 缓冲液为12.5 μL，Taq酶0.5 μL，RT酶0.5 μL，引物和探针6.5 μL，核酸5 μL；一步法RT-PCR扩增条件：45℃ 15 min，95℃ 2 min，40个循环（94℃ 10 s，60℃10 s）。荧光信号的收集定为FAM（肠道病毒）、ROX（CoxA16）、HEX（EV71），数据的采集设在60℃。

1.4 统计学分析

采用SPSS13.0软件进行统计学分析。不同年龄、性别、临床症状和样本类型等资料采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同性别和年龄患儿的病原分析

对208例临床诊断为手足口病感染的患儿标本进行一步法荧光定量RT-PCR检测，EV的检出率为83.17%（173/208），其中EV71所占EV的比例最高为55.49%（96/173），而其他EV亚型的比例（31.21%，54/173）也明显高于CoxA16的比例（13.29%，23/173）。

116例男性和92例女性患儿中，EV的检出率分别为81.03%（94/116）和85.87%（79/92）；其中以EV71所占比例最高，分别为58.51%（55/94）和51.90%（41/79）；而CoxA16所占比例为最低，分别为11.70%（11/94）和15.19%（12/79）；其他EV亚型的比例分别为29.79%（28/94）和32.91%（26/79）。见表1。

此外，在5岁及以下（≤5岁）和5岁以上（>5岁）的患儿中，EV的检出率分别为86.81%（158/182）和57.69%（15/26）；其中EV71所占的比例分别为55.70%（88/158）和33.33%（5/15）；其他EV亚型的比例分别为30.38%（48/158）和60.00%（9/15）；而CoxA16所占比例为最低，分别为13.92%（22/158）和6.67%（1/15）。见表1。

2.2 不同临床症状中的病原分析

208例患儿中，多数患儿出现发热症状，其中发热伴疱疹最多为112例，其次发热伴呕吐有36例，发热伴神经系统症状有26例，其他情况有34例；引起患儿出现发热伴疱疹症状的主要病原为EV71（58.42%，59/101），其次为其他EV亚型病毒（26.73%， 27/101），而CoxA16最少（14.85%，15/101）；引起患儿出现发热伴呕吐症状的主要病原为EV71（56.67%，17/30）；引起患儿出现发热伴神经系统症状的主要病原为EV71（72.22%，13/18）；引起患儿出现不典型的其他症状的主要病原为其他EV亚型病毒（62.5%，15/25）。见表2。

2.3 不同样本的病原分析

253份临床标本中，208份粪便中EV的检出率为76.92%（160/208）。其中EV71、CoxA16和其他EV亚型的所占比例分别为52.50%（84/160）、14.38%（23/160）和33.13%（53/160）；45份咽拭子中EV的检出率为51.11%（23/45），其中EV71所占比例最高为65.22%（15/23），其次是其他EV亚型为26.09%（6/23），CoxA16所占比例最低为8.70%（2/23）。见表3。

3 讨论

手足口病是由多种肠道病毒引起的小儿常见传染病。肠道病毒属于小RNA病毒科，根据血清学可分为柯萨奇、埃可病毒、脊髓灰质炎病毒和肠道病毒68-71型等，共67个血清型[2，3，7]，其中尤以EV71和CoxA16型最为常见。

本次研究中，208例疑似手足口病患儿中，一步法荧光定量RT-PCR检测结果显示，EV71阳性病例数占肠道病毒的比例与近年杭州报道的结果相一致[8]。而其他EV亚型（即非EV71和非CoxA16）的阳性百分比显著高于CoxA16的比例，这些结果表明EV71的流行仍是引起手足口病的主要病原，但其他EV亚型的流行趋势有所升高，值得密切关注，并与国内其他地区的报道基本一致[9]。

不同年龄患儿的检测结果显示，疑似手足口病患儿的感染以5岁以下儿童为主，显著高于5岁以上患儿。5岁以下患儿EV71的检出百分比显著高于CoxA16和其他EV亚型，而5岁以上患儿其他EV亚型检出百分比最高。此外手足口病患儿的感染虽然无男女性别的显著差异，但其他EV的检出百分比显著高于浙江湖州地区的相关报道[10]，与国内外其他地区的报道基本一致[11-13]。

手足口病患儿的临床诊断主要根据临床症状进行初步诊断，我们的结果表明，发热伴疱疹症状仍然是主要的临床症状，EV71是引起发热伴疱疹症状的主要病原，其次是其他EV亚型的肠道病毒，而CoxA16病毒相对较少。手足口病的传播主要通过粪-口和（或）密切接触传播，患者的咽拭子和粪便中均可检测出EV71、CoxA16和其他EV亚型的肠道病毒。Ooi MH等[14]研究表明，不同的临床标本对手足口病相关的肠道病毒的检出有着一定的差别，在潜伏期可通过患者的粪便和咽拭子标本检测到肠道病毒[14]。本研究中，我们发现在咽拭子和粪便样本中均检测出肠道病毒。粪便中EV71的检出率高于咽拭子样本，但CoxA16和其他EV亚型的检出率在咽拭子和粪便样本中并无显著差异，表明EV71型病毒的活跃程度较强；与国内相关的报道存在一定差异[9-11，15]。

以上分析表明，由于婴幼儿的免疫系统尚未完全发育成熟，体内并无相应的保护性抗体，从而导致机体的抵抗力相对较差，容易受到肠道病毒的感染。由EV71、CoxA16和其他EV亚型的肠道病毒引起的手足口病在不同地区、不同年份间的发病率存在一定的差异，不同年龄、不同的样本类型和采样时间也可能会导致检测结果存在一定的偏差，因此需要根据患儿的病情采集合适的标本类型，密切地对婴幼儿特别是5岁以下婴幼儿进行肠道病毒的病原学检测和分型。

手足口病的治疗目前尚无特效的抗病毒治疗药物，因此加强对肠道病毒特别是EV71和CoxA16及其他EV亚型的监测和鉴别诊断，使临床医生能够早发现、早诊断、早治疗，对于预防控制手足口病的流行和暴发至关重要。

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（收稿日期：2014-12-30）