不同炮制方法马齿苋的质量分析*

扈本荃，申亚丽，张 彦，李金娟，高苏亚，张 韫

(西安医学院 药学院，陕西 西安 710021)

马齿苋(Purslane)为马齿苋科(Portulacaceae)植物马齿苋的干燥地上部分，全草入药，气微，味微酸，性寒，具有清热解毒、凉血止血的功效[1]，有独特的营养价值和治疗、保健功能[2-4]，是我国古老的药食兼用的野生植物，广泛地分布于我国及全世界的温带和热带地区。加工方法是关乎药材质量优劣的基本因素之一，也是保证药材质量的首要环节。作者选用多糖和黄酮成分作为指标成分[5-6]，参考2010版《中国药典》，对不同炮制方法所制备的马齿苋药材进行质量分析，为马齿苋药材的进一步研究与开发提供一定的数据支持。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

葡萄糖标准品：批号110833-201205，中国食品药品检定研究院；芦丁标准品：批号10080-200707，中国药品生物制品检定所。石油醚、无水乙醇：分析纯，天津市河东区红岩试剂厂；苯酚、浓硫酸、硝酸铝：分析纯，西安化学试剂厂；亚硝酸钠：分析纯，天津市巴斯夫化工有限公司；硝酸铝：分析纯，西安化学试剂厂；氢氧化钠：分析纯，开封东大化工有限公司试剂厂；实验用水为蒸馏水；马齿苋药材：批号20130921，陕西杨陵采摘。

Cary60紫外-可见分光光度计：安捷伦科技有限公司；KQ 5200DE型超声提取仪：昆山市超声仪器有限公司；GR-202型分析天平：日本AND公司；MD 100-2型上皿电子天平：上海天平仪器厂；SHZ-D循环水式真空泵：巩义市予华仪器有限公司；恒温水浴锅：河北省黄骅航天仪器厂。

1.2 马齿苋的炮制方法

新鲜马齿苋，经3种不同炮制方法所制备的马齿苋药材。将新鲜马齿苋洗净，除去根及黄叶后按以下方法进行炮制。

样品1：将净制后的药材直接晒干。

样品2：将净制后的药材置通风处晾5d，再置蒸制容器内，用武火加热蒸至上圆汽时，取出，晒干。

样品3：将净制后的药材置通风处晾5 d，再用沸水烫2 min，取出，晒干。

2 结果与讨论

2.1 药材脱脂

称取马齿苋样品粉末(过孔径为0.85 mm的筛网)10 g，置于索氏提取器中，加入石油醚125 mL加热回流约5 h，药渣于通风橱中挥干。

2.2 马齿苋多糖的提取与质量分数测定

2.2.1 葡萄糖标准溶液的制备

精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖标准品8.37 mg，置于50 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容至刻度，摇匀，配置成浓度167.4 μg/mL的葡萄糖储备液，至冰箱中冷藏备用。

精密吸取葡萄糖储备液5 mL置于10 mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，得ρ(葡萄糖)=83.7 μg/mL的标准溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

精密称取马齿苋脱脂样品约0.5 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水15 mL，静置10 h，于60 ℃超声提取仪中提取25 min，用布氏漏斗抽滤，取续滤液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释定容至刻度，作为供试品溶液。

2.2.3 葡萄糖标准曲线的建立

精密吸取ρ(葡萄糖)=83.7 μg/mL标准溶液 0.2、0.4、0.5、0.6 0.7、0.8、0.9 mL分别置于10 mL容量瓶中，用蒸馏水分别补足至1.0 mL，依次精密加入φ(苯酚)=5%的苯酚溶液0.6 mL，硫酸3.6 mL，用蒸馏水定容，摇匀，将各管放于75 ℃水浴槽中加热30 min，取出，放置30 min至室温。以1.0 mL蒸馏水同法操作为空白对照。在487 nm波长测定吸光度，以ρ(葡萄糖)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制曲线。得A=0.043 3ρ+0.0759，r=0.999 1，表明ρ(葡萄糖)在3.22～12.88 μg/mL内，与吸光度呈良好的线性关系。

2.2.4 精密度实验

精密吸取供试品溶液0.1 mL至10 mL容量瓶中，依照2.2.3方法，自“加入蒸馏水补足至1.0 mL”起，依法测定吸光度，重复测定6次，RSD=0.2%，表明具有良好的精密度。

2.2.5 显色稳定性

精密吸取0.1 mL供试液6份，依照2.2.3项下方法，分别在显色0、10、20、30、40、60 min后，测定吸光度，RSD=1.1%(n=6)。结果表明：供试品溶液在60 min内稳定。

2.2.6 重复性实验

精密称取马齿苋药材脱脂粉末6份，每份约0.5 g，依据2.2.2方法，制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液0.1 mL至10 mL容量瓶中，依照2.2.3方法，自“加入蒸馏水补足至1.0 mL”起，依法测定吸光度，带入回归方程，计算药材中多糖的含量，RSD=1.0%，结果表明：重复性良好。

2.2.7 加样回收率实验

精密称定马齿苋药材脱脂粉末6份，每份约0.5 g，分别置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入葡萄糖标准品约8.5 mg，依据2.2.2方法操作，制备供试液，精密吸取供试液0.1 mL至10 mL容量瓶中，照2.2.3方法，自“加入蒸馏水补足至1.0 mL”起，依法测定吸光度，计算回收率、RSD值。结果见表1。

表1 马齿苋多糖加样回收率实验(n=6)

结果表明，马齿苋多糖加样回收率良好。

2.2.8 样品质量分数测定

精密称取不同炮制方法获取得到马齿苋药材脱脂粉末各3份，每份约0.5 g，依据2.2.2方法操作，制备供试液。精密吸取供试液0.1 mL至10 mL容量瓶中，照2.2.3方法，自“加入蒸馏水补足至1.0 mL”起，依法测定吸光度，带入回归方程中，计算药材中多糖的质量分数，结果见表2。

表2 不同炮制方法对 w(马齿苋多糖)的影响(n=3)

2.3 马齿苋总黄酮的提取与质量分数测定

2.3.1 芦丁标准溶液的制备

精密称取芦丁标准品20.54 mg，置于100 mL容量瓶中，加φ(乙醇)=75%乙醇溶液溶解并定容至刻度，摇匀，配置成ρ(葡萄糖)=0.205 4 mg/mL的葡萄糖储备液，至冰箱中冷藏备用。

2.3.2 供试品溶液制备

精密称取马齿苋脱脂药材约1.0 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入φ(乙醇)=75%乙醇25 mL，静置10 h，于40 ℃超声提取仪中提取80 min，用布氏漏斗抽滤，取续滤液作为样品供试液。

2.3.3 芦丁标准曲线的绘制

精密吸取ρ(芦丁)=0.205 4 mg/mL标准溶液0.5、1.0、1.5、2.0 2.5、3.0、4.0 mL置于10 mL容量瓶中，分别加φ(乙醇)=75%乙醇溶液补足至5.0 mL，依次精密加入w(亚硝酸钠)=5%溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，分别加入ρ(硝酸铝)=10%溶液0.3 mL，摇匀，再放置6 min，分别加入1.0 mol/mL的氢氧化钠溶液4.0 mL，用水定容至刻度，摇匀，放置15 min，以5.0 mLφ(乙醇)=75%乙醇同法操作为空白对照，在506 nm处测定吸光度。以芦丁标准溶液浓度为横坐标(μg/mL)，吸光度为纵坐标，绘制曲线，得回归方程。A=0.0108ρ+0.0534，r=0.999 8，表明ρ(芦丁)在10.27～71.89 μg/mL时，ρ(芦丁)与吸光度呈良好的线性关系。

2.3.4 精密度实验

精密吸取供试液0.1 mL至10 mL容量瓶中，照2.3.3方法，自“加入φ(乙醇)=75%乙醇溶液补足至5.0 mL”起，依法测定吸光度，重复测定6次，RSD=0.2%。

2.3.5 重复性实验

精密称取同一马齿苋药材脱脂粉末6份，每份约1.0 g，依据2.3.2方法操作，制备供试液，精密吸取供试液0.1 mL至10 mL容量瓶中，照2.3.3方法，自“加入φ(乙醇)=75%乙醇溶液补足至5.0 mL”起，依法测定吸光度，计算药材中ρ(总黄酮)，RSD=3.1%,表明该测定方法重复性良好。

2.3.6 显色稳定性

精密吸取0.1 mL供试液，依2.3.3方法显色后，分别在显色0、10、20、30、40、60 min后，测定吸光度，RSD=0.7%(n=6)。结果表明：供试品溶液在60 min内稳定。

2.3.7 加样回收率实验

精密称定马齿苋药材制备供试液，精密吸取供试液6份，每份1.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，各管加入ρ(芦丁)为0.205 4 mg/mL的芦丁标准溶液0.5 mL，照2.3.3方法，自“加入φ(乙醇)=75%乙醇溶液补足至5.0 mL”起，依法测定吸光度，计算回收率、RSD值。结果见表3。

表3 总黄酮加样回收率实验(n=6)

结果表明，马齿苋中总黄酮加样回收率良好。

2.3.8 样品质量分数测定

精密称取马齿苋药材脱脂粉末3份，每份约1.0 g，依据2.2.2方法操作，制备供试液。精密吸取供试液1.0 mL至10 mL容量瓶中，照2.3.3 方法，自“加入φ(乙醇)=75% 乙醇补足至5.0 mL”起，依法测定吸光度，带入回归方程，计算药材中w(总黄酮)，结果见表4。

表4 不同炮制方法对w(总黄酮)的影响(n=3)

3 结 论

(1) 经不同炮制方法制备后的马齿苋药材中多糖、总黄酮含量存在差异，w(多糖)变化幅度为4.89%～8.06%，w(总黄酮)变化幅度为0.46%～3.38%，其经不同炮制方法制备后的马齿苋药材中多糖和总黄酮质量分数由高到低的依次蒸制、烫制、鲜品直晒。由此可知，不同的炮制方法对马齿苋药材的有效成分存在影响。

(2) 经不同炮制方法制备后的马齿苋药材多糖和总黄酮质量分数由高到低的依次蒸制、烫制、鲜品直晒，表明马齿苋药材经过蒸和烫处理后，较好地保留了药材中的多糖和黄酮类成份，而蒸法和烫法相比又以蒸法效果最好，其原因可能是烫法在操作时，药材需要直接与水接触，会使部分多糖和黄酮类成分溶于水中，造成成分的流失，使药材中多糖和总黄酮质量分数下降。2010版《中国药典》第一部中，将蒸和烫后晒干均作为马齿苋药材的加工炮制方法。根据实验结果，建议在制定药典标准时，将蒸后晒干作为马齿苋药材的加工炮制方法。

[ 参 考 文 献 ]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010:46-47.

[2] 付起凤,张艳秋.马齿苋临床应用的研究进展[J].中医药信息,2009,26(03):17-18.

[3] 解思友,逄美芳,孙艳，等.马齿苋的化学成分与药理作用最新研究进展[J].现代药物与临床,2011,26(03):212-215.

[4] 崔健,陈新,姜艳玲，等.马齿苋的药用研究概况[J].长春中医学院学报，2004,20(04):58-60.

[5] 朱洪彬.中药马齿苋有效成分提制分析及其质量控制新方法研究[D].长沙：湖南大学,2010：4-5.

[6] 周春丽,苏虎,王德解，等.马齿苋有效成分的提取及定量分析[J].时珍国医国药,2008,19(08):1933-1934.