前列腺增生症合并前列腺炎患者促炎性细胞因子的变化特点

李海宽，王瑞，周增祥



论著·临床

前列腺增生症合并前列腺炎患者促炎性细胞因子的变化特点

李海宽，王瑞，周增祥

目的 观察促炎性细胞因子在前列腺增生症合并前列腺炎患者中的变化特点。方法 选取2012年6月—2014年1月住院的前列腺疾病患者70例，前列腺增生症合并前列腺炎患者35例为观察组，单纯患有前列腺增生症患者35例为对照组。采用免疫组化方法和免疫荧光定量PCR检测法对患者的促炎性细胞因子进行检测，包括白介素8(IL-8)、成纤维生长因子2(FGF-2)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)、转化生长因子-β(TGF-β1)。然后再通过免疫组织化学法检测患者的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和分化簇3(CD3)的含量；最后对检测结果进行统计分析。结果 观察组IL-8、FGF-2和MMP-2蛋白及IL-8 mRNA、FGF-2 mRNA和MMP-2 mRNA水平均高于对照组(t=2.540 1、2.859 9、12.755 1、19.124 5、12.294 4、8.532 3，P均<0.01)； TNF-α水平高于对照组但差异无统计意义(t=1.427 5,P>0.05)，IL-6、CD3水平高于对照组(t=3.942 0、6.988 1,P<0.01)；bFGF-2蛋白表达中度以上患者对照组占37.1%低于观察组的80.0%，TGF-β1蛋白表达情况中度及以上患者对照组占20.0%低于观察组的82.8%(χ2=2.721 8、2.678 4，P<0.01)。结论 促炎性细胞因子在前列腺增生症合并前列腺炎患者中均较单纯前列腺增生症患者高表达，前列腺炎可能影响前列腺增生症的变化。

促炎性细胞因子；前列腺增生症；前列腺炎

现代社会老龄化日益严重，前列腺增生症(BPH)是中老年男性十分常见和多发的一种病症，对患者的生活质量有着严重的影响[1，2]，目前治疗手段也相对单一[3]。而且前列腺增生症合并前列腺炎的发生也日益增多，为了研究促炎性细胞因子在前列腺增生症合并前列腺炎患者的作用[4，5]，现选取本院前列腺疾病患者70例，分析前列腺增生症合并前列腺炎发生中的相关因素，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2012年6月—2014年1月本院诊治前列腺疾病患者70例，均前列腺增生症合并因前列腺炎或单纯前列腺增生症经过尿道前列腺电切手术，前列腺增生症合并前列腺炎35例为观察组，年龄35～70(59.4±8.8)岁，病程3～8(4.5±0.7)年，前列腺囊肿4例(11.43%)；单纯前列腺增生症35例为对照组，年龄40～75(63.2±9.3)岁，病程4～10(5.8±0.9)年，前列腺囊肿6例(17.14%)。临床表现：尿急、尿频，排尿时间长、尿断续、射程较短等。观察组患者还有下腹部疼痛，腹股沟、耻骨等区域酸胀。患者均无相关遗传病。患者年龄、病程、并发症等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究均在患者知情同意下进行，并经过我院伦理委员会批准实施。

1.2 样本采取处理 患者均在手术前1天早晨空腹抽取肘静脉血3 ml，置于室温下2 h后以4 000 r/min 离心5 min，最后将标本置于-20℃保存。手术中行病灶部位组织切除，标本大小约1.5 cm×0.4 cm×0.4 cm，采用甲醛固定。(1)免疫组织化学方法：首先标本经石蜡切片并脱蜡至水，在室温下经3%双氧水8～10 min处理消除内源性过氧化物的活性，再用蒸馏水冲洗，浸泡在磷酸盐缓冲液(PBS)内10 min后进行抗原修复；在室温下封闭于10%非免疫血清孵育10 min，不冲洗，加入一抗工作液后放在37℃温度下孵育1～2 h。各种炎性细胞因子在切片上加入蛋白单克隆抗体的条件分别为：白介素-8(IL-8)1∶100、成纤维生长因子-2(FGF-2)1∶50、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)1∶100、转化生长因子β1(TGF-β1)1∶200、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)1∶200、IL-6 1∶100、CD3 1∶200稀释，试用PBS稀释)。以PBS冲洗，4 min×3次。每张切片上滴加二抗工作液后继续置于37℃温度下孵育20 min。以PBS再冲洗，4 min×3次。每张切片上滴加碱性磷酸酶标记的莲霉卵白素工作液后继续置于37℃温度下孵育20 min。PBS冲洗，4 min×3次。通过显色剂显色10 min后，观察，最后用自来水进行充分的冲洗，再次染色、脱水、透明、封片。 对免疫组织化学切片的平均光密度进行测量分析统计。(2)免疫荧光定量PCR方法对患者的IL-8 mRNA、FGF-2 mRNA和MMP-2 mRNA的相对表达量进行检测。

1.3 观察指标 对每张切片采用BX51型号的数码摄像装备(日本，Olympus)进行图像采集，放大图像400倍后随机选取3个区域统计，使用计算机图像处理系统(Image-Pro Plus 6.0, 美国)对患者的IL-8、FGF-2、MMP-2、TGF-β1的平均光密度值采用半定量分析；实时荧光PCR观察指标：使用电脑分析反应结束后的荧光信号，把该分析的信号转换成CT值(循环阀值)。然后使用2-ΔΔct的计算方法计算IL-8 mRNA、FGF-2 mRNA和MMP-2 mRNA的相对表达量。

2 结 果

2.1 IL-8、FGF-2和MMP-2表达水平比较 观察组IL-8、FGF-2和MMP-2蛋白表达水平及基因表达水平均高于对照组(P<0.01)。见表1。

2.2 TNF-α、IL-6和CD3蛋白表达水平比较 观察组TNF-α水平高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)，IL-6、CD3水平均高于对照组(P<0.01)。见表2。

表2 2组TNF-α、IL-6和CD3蛋白表达水平比较

2.3 FGF-2、TGF-β1蛋白表达水平比较 对照组FGF-2蛋白表达中度以上患者占37.1%，低于观察组的80.0%；TGF-β1蛋白表达中度以上患者占20.0%，低于观察组的82.8%，差异均有统计学意义(P<0.01)。见表3。

表1 2组患者IL-8、FGF-2、MMP-2表达水平比较

表3 2组FGF-2、TGF-β1蛋白表达率比较 [例 (%)]

3 讨 论

前列腺增生症(BPH)是一种十分常见多发的男性疾病，对患者的生活有着十分严重的影响[6]，现在临床普遍认为前列腺炎对前列腺增生症有着一定的影响[7，8]。

在临床治疗中，对于前列腺增生症合并前列腺炎的患者和单纯前列腺增生症患者而言，促炎性细胞因子是其相关影响因素。相关研究表明：BPH合并CP患者IL-8、FGF-2和MMP-2的平均光密度值显著高于单纯BPH患者[9～11]。本研究数据同样表明：单纯前列腺增生症患者的IL-8检测光密度水平显著高于前列腺增生症合并前列腺炎患者；单纯前列腺增生症患者的FGF-2检测光密度水平明显高于前列腺增生症合并前列腺炎的患者；单纯前列腺增生症患者的MMP-2检测光密度水平显著高于前列腺增生症合并前列腺炎患者。由此认为IL-8、FGF-2和MMP-2等炎性因子参与了前列腺增生症及前列腺炎的发展过程。对于促炎性细胞因子中的TNF-α这种多肽类物质来说，在机体的炎性反应和免疫反应中有着十分重要的作用[12，13]。有学者研究指出：BPH合并CP患者的几率大约为50%，其TNF-α、IL-6和CD3水平会比普通的BPH患者要高[14～16]。本研究中前列腺增生症合并前列腺炎患者的TNF-α、IL-6、CD3检测水平均显著高于单纯前列腺增生症患者。相关文献指出：前列腺增生症合并前列腺炎患者的炎性反应原因导致FGFs(成纤维细胞生长因子家族)和TGF-β(转化生长因子家族)表达增加，同时促进BPH的发展[17～19]。本结果表明：前列腺增生症合并前列腺炎的患者的FGF-2、TGF-β1水平明显高于单纯前列腺增生症患者，前列腺增生症合并前列腺炎的患者FGF-2水平中度以上患者占比80.0%，TGF-β1水平中度以上患者占比82.8%；单纯前列腺增生症患FGF-2水平中度以上患者仅占37.1%，TGF-β1水平中度以上患者仅占20.0%，所以对于FGF-2、TGF-β1水平的检测可以了解到患者的前列腺的具体病变。

综上所述，促炎性细胞因子在前列腺增生症合并前列腺炎患者中均较单纯前列腺增生症患者高，前列腺炎可能影响前列腺增生症的变化，同时也有利于指导患者的临床治疗。

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Variation characteristics of proinflammatory cytokines in patients with prostatitis and benign prostatic hyperplasia

LIHaikuan,WANGRui,ZHOUZengxiang.DepartmentofUrologySurgery,FisrtHospitalofYulinCity,Yulin718000,China

Objective To observe the variation characteristics of proinflammatory cytokines in patients with prostatic hyperplasia and prostatitis.Methods From 2012 June to 2014 January, 70 cases of hospitalized patients with disease of prostate, prostatic hyperplasia and prostatitis patients of 35 cases as the observation group, patients only with hyperplasia of prostate in 35 cases as the control group. Immunohistochemistry and immuno fluorescence quantitative PCR detection method were used for detection of proinflammatory cytokines, including interleukin 8 (IL-8), fibroblast growth factor 2 (FGF-2) and matrix metalloproteinase 2 (MMP-2), transforming growth factor beta (TGF-β1). And then through the immunohistochemical method to detect the tumor necrosis factor alpha (TNF-α),interleukin 6 (IL-6) and cluster of differentiation 3 (CD3) content; finally, the detection results were statistical analyzed.Results The observation group’s IL-8, FGF-2 and MMP-2 protein and IL-8 mRNA, FGF-2 mRNA and MMP-2 mRNA were higher than those in control group (t=2.540 1,t=2.859 9,t=12.755 1,t=19.124 5,t=12.294 4,t=8.532 3,P<0.01); TNF-α level was higher than the control group but the difference was not statistically significance (t=1.427 5,P>0.05), IL-6, CD3 level were higher than that of the control group (t=3.942 0,t=6.988 1,P<0.01); bFGF-2 protein with moderate expression in the control group was 37.1%, which was lower than those in the observation group’s 80%, the TGF-β1protein moderate and above expression in the control group was 20%, which was lower than that of the observation group’s 82.8% (χ2=2.721 8,χ2=2.6784,P<0.01).Conclusion The expression of proinflammatory cytokines in patients with benign prostatic hyperplasia and prostatitis was higher than patients with benign prostatic hyperplasia, prostatitis may change benign prostatic hyperplasia.

Proinflammatory cytokines; Benign prostatic hyperplasia; Prostatitis; Related factors

718000 陕西省榆林市第一医院泌尿外科

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.05.015

2014-12-25)