临床标本529株铜绿假单*胞菌分离鉴定及药性分析

张建敏 何倩

(桓台县人民医院检验科，山东桓台256400)

临床标本529株铜绿假单*胞菌分离鉴定及药性分析

张建敏 何倩

(桓台县人民医院检验科，山东桓台256400)

铜绿假单胞菌;分离鉴定;药性分析

铜绿假单胞菌又称绿脓杆菌，主要在空气、水、土壤和动物等自然界中广泛存在。铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种，也是人类常见的条件致病菌及医院感染的主要病原菌，铜绿假单胞菌属于非发酵菌的革兰氏阴性杆菌，有关文献报道在人类感染非发酵菌中，假单胞菌属占60%～80%，其中铜绿假单胞菌占55%～65%，可见该菌已成为感染中的一种重要病原菌［1］。对该菌引起的感染用药治疗不当或拖延治疗时机，会给临床治疗带来极大困难。随着头孢类及新开发的抗生素的广泛应用，铜绿假单胞菌的耐药性不断升高，为了掌握该菌的耐药趋势和给临床提供药物治疗的依据和手段。笔者对我院2012年1月～2013年3月在我院住院患者的各类临床标本中分离的529株铜绿假单胞菌感染的阳性标本鉴定及药敏实验分析结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源529株铜绿假单胞菌均分离自我院2012年1月～2013年3月临床各科室送检标本，包括痰液及支气管吸出物、咽试子、尿液、引流液、脓液、血液等被铜绿假单胞菌感染的阳性标本。

1.2 材料严格按照WHO推荐使用血液基础培养基，中国蓝琼脂培养基，微生物生化鉴定试剂，按照常规方法培养分离后采用ATB微生物自动分析仪(法国生物梅里埃公司)。

1.3 方法

1.3.1 细菌培养与鉴定细菌培养及鉴定依照《全国临床检验操作规程》第三版进行:各种标本接种于血液基础培养基和中国蓝琼脂培养基(血液须先增菌培养)在35℃培养24 h，经过培养后可疑菌落经涂片革兰氏染色为细菌菌体直或微弯革兰氏阴性、需氧、无芽孢杆菌、单端鞭毛、可运动;氧化酶阳性、触酶阳性，不发酵乳糖、大部分菌株氧化葡萄糖，还原硝酸盐为亚硝酸盐或氮气。菌落扁平、边缘不整齐、湿润的毛玻璃状，产生绿脓素、青脓素、红脓素等色素，有生姜气味，在血琼脂平板上出现溶血，即可初步判断为铜绿假单胞菌，经ATB板条—32GN (购自法国生物梅里埃公司)鉴定到种。

1.3.2 药敏纸片和药敏实验方法11种抗生素纸片为:替卡西林/克拉维酸、莫西沙星、头孢他啶、阿米卡星、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南、左旋氧氟沙星，所用药敏纸片来自Oxoiid抗生素药物敏感检测纸片;水解酪蛋白(M—H)培养基购自浙江天和制药有限公司。抗生素敏感实验采用K—B纸片扩散法，依据美国实验室标准化研究所(CLSI)2012年版规则操作并判断结果。

1.3.3 质量控制实验所用的标准菌株为铜绿假单胞菌ATCC 27853、大肠埃希氏菌ATCC25922标准菌株均购于国家卫生部临床检验中心。每周用标准菌株检测所用的抗生素均在敏感范围内，药物纸片来自Oxoiid抗生素药物敏感检测纸片。

2 结果

统计分析529株铜绿假单胞菌阳性标本，对11种抗生素的耐药性，详情见表1。

表1 铜绿假单胞菌的耐药率(%)

3 讨论

细菌耐药性是当前感染领域中的一大难题，为了遏制细菌耐药性蔓延，世界卫生组织在2000年制定了遏制细菌耐药性的全球发展战略。掌握细菌分布及变迁和药敏情况，对控制感染性疾病，合理应用抗生素有重要的指导作用。

铜绿假单胞菌对抗菌药物有自然抵抗力，因此也是医院内感染的主要病原菌之一，特别是较虚弱患者，长期卧床，各种医疗器械受检者，呼吸机使用，气管切开，尿道插管，血管内导管更为易感。其他如烧伤、溃疡继发感染、神经外科术后、肺部感染和败血症。分离自无菌部位的铜绿假单胞菌被认为是有意义的病原菌。来自有正常菌丛部位的分离菌株，若有明显的临床症状，如毛囊炎、外耳炎则有临床意义。呼吸道分离的粘液型铜绿假单胞菌，提示肺囊性纤维化。来自血液、无菌体液的假单胞菌，大都有临床意义。我院铜绿假单胞菌感染ICU检出率最高，其次是呼吸内科及肿瘤内科，感染患者多数为老年人，患危重疾病以及机体抵抗力弱的患者，或使用各种侵入性操作和长期使用广谱抗菌药物治疗的患者。

从表1中可见，铜绿假单胞菌对替卡西林/克拉维酸、莫西沙星等药物耐药性较高。而对氨基糖苷类、四代头孢霉素、加β－内酰胺酶抑制剂的复合剂药物敏感性高，可作为经验治疗的首选药物。铜绿假单胞菌易形成生物膜，若病原菌用敏感抗生素治疗一周以上未见明显疗效，应考虑用敏感抗生素合并喹诺酮类抗生素联合使用。表1显示，部分铜绿假单胞菌可产生碳青霉烯酶，可影响碳青霉烯类抗生素和大部分β－内酰胺类抗生素的敏感性。529株铜绿假单胞菌中对阿米卡星、庆大霉素敏感性高，可能因为这几种药物的副作用比较大，致使临床应用逐渐减少有关［2］。

铜绿假单胞菌是医院感染的重要病原菌，此菌对碳青霉烯类耐药性有上升趋势，给临床治疗造成极大的困难，美罗培南不敏感的铜绿假单胞菌占29.6%。铜绿假单胞菌具有较低的外膜通透性，其外膜由微孔蛋白组成，由于大通道拷贝数较低或存在小通道，导致外膜通透性下降使药物不易进入菌体，因而对多种不同结构的抗菌药物高度耐药［3］。所以，临床治疗铜绿假单胞菌感染时，应严格按照药物敏感试验选择抗生素，有效控制铜绿假单胞菌引起的感染，决不能延误治疗时机和加重病情。因此要求临床细菌室应及时、快速、准确的报告检验结果，以便指导临床合理选用抗生素，及时有效地控制铜绿假单胞菌的感染，减少病死率。

［1］张燕.临床标本227例铜绿假单胞菌分离鉴定继耐药分析［J］.检验与临床，2006，20(1):13－14.

［2］宫奇琳，石晓红.呼吸道铜绿假单胞菌感染的药物应用性研究［J］.医学检验与临床，2006，17(3):9－10.

［3］徐英春，王贺，孙宏莉等.细菌耐药监测让我们走近临床［J］.中华检验医学杂志，2007，30:487－488.

R446.1

B

1004-7115(2015)08-0928-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.8.030

2015－5－18)

张建敏(1963—)，女，山东桓台人，副主任技师，本科，主要从事临床检验科工作。