临床检验基础实验教学中模拟阳性标本的制作与应用

侯艳香，王晓琴，任吉莲

(山西医科大学汾阳学院医学检验系，山西 汾阳032200)

《临床检验基础》是医学检验学中最基本的课程，基本任务是采用先进的检验方法，对离体的血液、尿液、粪便、羊水、脑脊液、浆膜腔积液和脱落细胞等标本进行理学、化学、显微镜形态学检查等，其检查结果为了满足临床筛检诊断疾病的需要[1，2]。

临床典型病理标本多具有传染性，污染大，收集困难，不易保存，不能满足学生实验的需求量。考虑对学生健康的安全，兼顾与临床标本检测效果的一致性，在多年的实验教学中，自制模拟标本替代病理性标本，收到了相同的教学效果[3]。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 尿化学常规检查

1.1.1 基础尿液的制作 称取氯化钠1g，尿素17g，磷酸二氢钾0.25g，磷酸氢二钠1g，牛肉膏2g(改观颜色)加蒸馏水至1000 ml，充分混匀。经测定pH值7.0，比重1.030，尿八联试带目测阴性，符合正常尿液的标准。

1.1.2 蛋白尿定性实验 (1)模拟蛋白尿的制作：在5 杯 100ml基础尿液中各加入 0.2ml、0.5ml、1.5 ml、4.0ml、8.0ml总蛋白含量为 70g/L 注射液(厂家：中生北控生物科技股份有限公司),充分混匀。(2)蛋白尿加热乙酸法定性实验[4]：在试管中加模拟蛋白尿至管高2/3处；用试管夹夹住管口1/3～1/4处，在酒精灯上加热尿液上1/3段，煮沸即止；轻轻直立试管，在黑色背景下观察煮沸部分有无浑浊；滴加5%乙酸溶液2～4滴，再煮沸立即观察结果；实验结果见表1。

表1 蛋白尿加热乙酸法定性实验结果

1.1.3 糖尿定性实验 (1)模拟糖尿的制作：在5杯100 ml基础尿液中各加入 0.15g、0.30g、0.80g、1.60 g、2.50g葡萄糖，充分混匀。(2)糖尿班氏法定性实验：在试管中加班氏试剂2.0ml，摇动试管在酒精灯上加热至沸腾，观察试剂有无颜色及性状变化，若试剂仍为透明蓝色，可进行定性实验；向班氏试剂中加模拟糖尿液0.2ml(约4滴)，充分混匀；继续煮沸1～2min，加热时注意颜色变化，自然冷却后观察结果；实验结果见表2。

1.1.4 酮尿定性实验[5](1)模拟酮尿的制作：在3杯100ml基础尿液中各加入 0.2ml、0.5ml、1.0ml丙酮，充分混匀。(2)酮尿改良Lange(朗格)法定性实验：在试管中加模拟酮尿2.0ml；称取30mg亚硝基铁氢化钠粉末加入，充分混匀；加入2.0mmol/L乙酸溶液0.5ml，充分混匀；将试管倾斜，沿管壁缓慢加入浓氨水1.0ml，使其覆盖于上部；静置后观察两液交界面颜色的变化，出现紫色环且数分钟不褪色者为阳性；实验结果见表3。

表2 糖尿班氏法定性实验结果

表3 酮尿改良Lange法定性实验结果

1.1.5 妊娠尿定性实验 (1)模拟妊娠尿的制作：在100 ml基础尿液中加入1支5000单位注射用绒毛膜促性腺激素，充分混匀。(2)HCG试带(胶体金法)定性实验:将测试带标有箭头的一段插入模拟妊娠尿中，深度不可超过标志线，5s后取出平放；5min内肉眼观察结果，试带上对照线和检测线均为红色为阳性。若试带上仅在对照线位置上出现一条红色线为阴性，检测出基础尿液为阴性；若试带上对照线和检测线均不显色，表示试带失效[6]。

1.1.6 尿液有形成分检查 (1)模拟成分尿的制作：吸取生理盐水2ml于试管中，加40%甲醛1滴和10μl全血充分混匀，制成红细胞悬液。将EDTA-K2抗凝全血2ml(学生自采测定血比积静脉血)转为温氏管中，以2000r/min离心10min后，用滴管吸取白细胞层于小试管中，加入1ml 2%的冰乙酸(溶解破坏红细胞)，混匀后离心，弃上液，用生理盐水洗涤试管底部的白细胞2～3次后，加入2ml生理盐水，制成白细胞悬液。按基础尿液：白细胞悬液：红细胞悬液为2:2:1的比例混匀制成模拟成分尿[7]。(2)显微镜下模拟成分尿观察：取模拟成分尿1滴于玻片上，加盖玻片后，显微镜检查。镜下观察到红细胞呈双凹圆盘形，有弱折光性；白细胞胞质清晰透明，核明显[8]。

1.2 粪便常规检查

1.2.1 模拟粪便的制作 称取杂色面粉2g,用蒸馏水调成糊状作为基质，添加琼脂粉、菜泥、肉泥各少许，用竹签搅拌均匀；用滴管吸取离心后抗凝血温氏管中的白细胞层和微量红细胞层加入基质混匀[9]。

1.2.2 粪便隐血定性实验 用竹签挑取少许模拟便于滤纸上；滴加10g/L邻联甲苯胺乙酸溶液和3%过氧化氢各1～2滴于滤纸的标本上；加入试剂后2min内显蓝色为阳性。其判断结果程度分别为：2min仍不显色，为阴性；10s显浅蓝色渐变蓝色为(+)；显浅蓝褐色，且逐渐加深为(++)；立即显蓝褐色为(+++)；立即显蓝黑褐色为(++++)[10]。

1.2.3 显微镜下模拟粪便有形成分观察 在洁净玻片上滴加1～2滴生理盐水，用竹签挑取少许模拟粪便混合制成涂片，涂片的面积应占2/3,厚度以能透视纸上字迹为佳；加盖玻片后置于显微镜下观察结果，镜下可见白细胞、红细胞、脂肪滴、食物残渣等成分。

1.3 脑脊液常规检查

1.3.1 模拟脑脊液的制作 称取氯化钠3.0g，氯化镁 0.3g,氯化钾 0.1 g，氯化钙0.2g，碳酸氢钠 1.0g，葡萄糖0.3 g，磷酸氢二钠0.2g加蒸馏水至1000 ml，充分混匀制成基础脑脊液。加入血清5ml和提取的白细胞悬液的不同量，制成不同阳性程度，充分混合至4℃冰箱保存。

1.3.2 脑脊液蛋白质定性实验 (潘迪氏实验)吸取饱和苯酚溶液2ml至试管中；用尖滴管垂直滴加模拟脑脊液标本1～2滴；黑色背景下立即用肉眼观察结果。若清晰透明，不呈现云雾状为-；呈灰白雾状为+；呈云雾状沉淀++；呈白色絮状沉淀为+++；立即形成白色凝块为++++[11]。

1.3.3 显微镜下模拟脑脊液检查 用微量吸管吸取混匀的模拟脑脊液，充入血细胞计数板中计数；以加入白细胞悬液量的多少，脑脊液细胞计数总数为(0~20)×106/L；白细胞分类为单个核细胞和中性粒细胞。

2 结果

模拟尿液、粪便、脑脊液标本化学定性实验均能显示出阳性指标的现象和颜色变化(+～++++)，显微镜下有形成分检查也均能观察到细胞和形态。

3 讨论

《临床检验基础》主要是通过阳性标本传递疾病的信息及提供诊断依据，是一门实践性、技术性、科学性很强的专业课程[12]。实验教学中主要培养学生的创新能力和临床检验技能，建立涵盖基本技能实验、基础训练实验、综合性实验和创新型实验的实验教学内容体系，并在实践教学中互相融合[13]。

采用模拟标本替代病理标本具有成本低廉、生物安全性好、取材方便、制作简单、保存时间长、重现性好、仿真度高的特点，让学生自己动手制备标本和操作实验，既加强了学生的实践能力和观察能力，又激发了学生的学习兴趣和求知欲望，有利于学生建立临床成就感，注重实用性和应用性，与临床岗位无缝接轨[14]。更重要的是能避免师生与病人体液直接接触，对预防实验室安全，保障师生健康至关重要[15]。因此该实验教学方法值得推广和应用。

[1]刘成玉,罗春丽,吴晓蔓,等.临床检验基础[M].北京：人民卫生出版社,2012:1-4;135-218.

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[6]潘丽娟.早早孕试纸在血清人绒毛膜促性腺激素测定中的应用[J].实验与检验医学,2012,30(2):189.

[7]赵翠红,段如春.模拟标本在尿液有形成分检验实践教学中的应用[J].检验医学与临床，2012,9(16):2045-2046.

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