鸡骨香提取物抗炎镇痛作用的实验研究

赵 杰 陈慧瑶 肖惠玲 叶依露 赖垚霖 黄总军 杨金玉

广东药学院健康学院，广东 广州 510310

鸡骨香提取物抗炎镇痛作用的实验研究

赵 杰 陈慧瑶 肖惠玲 叶依露 赖垚霖 黄总军 杨金玉

广东药学院健康学院，广东 广州 510310

目的：研究鸡骨香提取物的抗炎镇痛作用。方法：采用二甲苯实验、毛细血管通透性实验、角叉菜胶致大鼠足肿胀实验观察抗炎作用；采用醋酸扭体实验、热板实验观察镇痛作用。结果：鸡骨香醇提物、水提物能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性增加、角叉菜胶致大鼠足肿胀，醇提物作用显著优于水提物；醇提物能明显延长醋酸致小鼠扭体反应潜伏期，醇提物、水提物能减少醋酸致小鼠扭体次数、对小鼠热板实验痛阈值无显著影响。结论：鸡骨香醇提物和水提物均有抗炎、抗外周性疼痛作用，醇提物的抗炎镇痛作用优于水提物。

鸡骨香；抗炎；镇痛

鸡骨香为大戟科巴豆属植物鸡骨香Croton crassifolius Geisel.的干燥根，性温、味苦，具有理气止痛、祛风除湿的功效。在岭南民间常用鸡骨香根水煎或泡酒治疗风湿性关节炎、跌打损伤和黄疸等疾病［1－2］。迄今为止，鸡骨香化学成分的研究较多，对活性部位的药效学研究较少，本文对鸡骨香不同提取物的抗炎镇痛作用进行初步探讨，为确定鸡骨香活性部位／活性成分提供药效学依据。

1 材料与方法

1.1 药材及试剂 鸡骨香购自广东省药材公司，经广东药学院姜晓林副教授鉴定为鸡骨香Croton crassifolius Geisel的干燥根；角叉菜胶（批号：132K1003：美国Sigma公司）；盐酸喷他佐辛（批号：20110607，北京双鹤药业股份有限公司）；吲哚美辛（批号20110215：广东华南药业集团公司）；伊文思蓝（批号：100118，美国Sigma公司，）。

1.2 动物 SPF级ICR小鼠，体重18～22g；SPF级SD大鼠，体重180～220g，均由南方医科大学动物实验中心提供，动物合格证号2011－0054。

1.3 仪器 752N紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；201型酶标仪（美国Sigma公司）；Almemo2390－5足肿胀度测定仪（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；YLS－6A型智能热板仪（山东省医学科学院）。

1.4 方法

1.4.1 鸡骨香提取物制备 醇提物的制备：称取鸡骨香药材1.5kg，粉碎后用10倍量的95%乙醇浸泡30min，回流提取3次，提取时间依次为2h、1h、45min，合并提取液，过滤，减压浓缩回收溶剂，喷雾干燥，得醇提物干燥粉，用前用1%羧甲基纤维素钠（CMC）溶液研磨、配制成所需浓度的混悬液。

水提物制备：醇提后剩余药渣加10倍量水，加热提取2次，分别为2h、1h，合并提取液，过滤，减压浓缩，喷雾干燥，得水提物干燥粉，临用前用1%CMC溶液研磨、配制成所需浓度的混悬液。

1.4.2 二甲苯实验［2］取小鼠60只，随机分为六组：模型对照组、吲哚美辛组、鸡骨香醇提物高、低剂量组、水提物高、低剂量组，每组10只，雌雄各半。按表1剂量灌胃给药，模型对照组给予等容积1%CMC溶液，1次／d，连续给药5d。末次给药后30min，取二甲苯30μl均匀涂于小鼠右耳前后两面，30min后将小鼠颈椎脱臼处死，剪下左右耳廓，用直径7mm打孔器于左右耳同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片质量之差为肿胀度，计算肿胀度抑制率。1.4.3 毛细血管通透性实验［2］取小鼠60只，随机分为六组，每组10只，雌雄各半，动物分组及给药方法同“1.4.2”。末次给药30min后给予小鼠尾静脉注射0.6%伊文思蓝溶液10ml／kg，随即腹腔注射0.6%冰醋酸10ml／kg，30min后脱臼处死，打开腹腔，用5m l生理盐水洗涤腹腔，吸出洗涤液，合并，3000r／min离心15min，取上清液于595nm波长处测定吸收度A值，计算抑制率。

1.4.4 角叉菜胶致大鼠足肿胀实验［3］取大鼠48只，随机分为六组，每组8只，雌雄各半，分组及给药方法同“1.4.2”，末次给药后30min，于右后足皮下注射1%角叉菜胶生理盐水溶液0.1ml，分别在致炎前和致炎后1、4、6h用足肿胀仪测量足爪容积，以致炎前后足爪容积的差值表示肿胀度。

1.4.5 醋酸扭体实验［4］取小鼠60只，随机分为六组，每组10只，雌雄各半，动物分组给药方法同“1.4.2”，末次给药后30min，小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液10ml／kg，记录小鼠出现扭体反应的潜伏期以及20min内小鼠扭体反应次数。

1.4.6 热板实验［4］将雌性小鼠置于预热（55±0.5）℃热板仪，以小鼠舔后足潜伏期为痛阈指标，实验前筛选出60只痛阈值在5～30s小鼠为合格小鼠，随机分为六组，每组10只，雌雄各半，动物分组给药方法同“1.4.2”，按表5剂量灌胃给药，空白对照组给予等容积1%CMC溶液，首次给药前测痛阈值2次，间隔5min，取其平均值作为基础痛阈值，为防止足部烫伤，设定60s为截止时间，超过60s记做痛阈值为60s，然后按表5给药，记录末次给药后30、60min动物热板痛阈值。

1.4.7 统计分析 数据采用SPSS 19.0统计学软件进行统计分析，数据以 （）表示，均数比较用One－way ANOVA分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 与模型对照组比较，醇提物、水提物高剂量能明显抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，醇提物高剂量作用与吲哚美辛相当；醇提物高剂量组与水提物高剂量组比较，耳肿胀度无统计学差异，醇提物低剂量组的耳肿胀抑制率高于水提物低剂量组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响 与模型对照组比较，醇提物能抑制小鼠毛细血管通透性的增加；水提物高剂量有明显抑制作用（P＜0.05），但低剂量差异无统计学意义。与水提物组比较，醇提物组抑制作用更强 （P＜0.05），见表2。

表1 鸡骨香提取物对小鼠耳肿胀的影响s，n＝10）

表1 鸡骨香提取物对小鼠耳肿胀的影响s，n＝10）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与水提物组比较，△P＜0.05。

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表2 鸡骨香提取物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响 （，n＝10）

表2 鸡骨香提取物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响 （，n＝10）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与水提物组比较，△P＜0.05。

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表3 鸡骨香提取物对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响（，n＝8）

表3 鸡骨香提取物对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响（，n＝8）

与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与水提物组比较，△P＜0.05。

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表4 鸡骨香提取物对醋酸致小鼠扭体实验的影响 （，n＝10）

表4 鸡骨香提取物对醋酸致小鼠扭体实验的影响 （，n＝10）

与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响 角叉菜胶致炎后，模型对照组、水提物组足肿胀度持续增加，醇提物组于4h时足肿胀度达到高峰，随后开始下降。与模型对照组比较，致炎后1h，各组肿胀度无统计学差异；4h时醇提物高剂量、水提物高剂量有明显抑制作用；6h时，醇提物以及水提物高剂量能抑制足肿胀，醇提物作用比水提物强（P＜0.05），见表3。

2.4 对醋酸致小鼠扭体实验的影响 与模型对照组比较，醇提物高剂量能明显延长醋酸致小鼠扭体潜伏时间；醇提物、水提物高剂量能减少小鼠扭体次数，醇提物、水提物作用比较无统计学差异，见表4。

2.5 对热板实验的影响 各组基础痛阈值比较无统计学差异；与空白对照组比较，喷他佐辛在30，60min时痛阈值均明显延长（P＜0.01），其余各实验组均无统计学差异，见表5。

表5 鸡骨香提取物对热板实验小鼠痛阈值的影响 （，n＝10）

表5 鸡骨香提取物对热板实验小鼠痛阈值的影响 （，n＝10）

注：与空白对照组比较，**P＜0.01。

／sec空白对照组别 剂量／mg·kg－1 基础痛阈值／sec 30min痛阈值／sec 60min痛阈值21.61±1.32 22.56±2.55 22.39±2.93喷他佐辛 10 21.52±0.89 30.06±5.15** 36.73±4.85**醇提物 180 21.20±1.46 24.61±5.57 23.71±1.49 90 21.26±1.20 23.71±3.90 23.70±3.83水提物 240 21.29±1.61 21.47±2.60 22.99±4.85－120 22.38±1.79 23.56±4.93 24.29±2.63

3 讨论

炎症是人类疾病最常见的病理过程，从民间的天然药用资源中寻找抗炎药物是发现与创制新药的重要途径之一。二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性增加以及角叉菜胶致大鼠足肿胀实验为三个经典的急性炎症模型；热板实验用以评价中枢性镇痛药的效果，而醋酸扭体实验则常用以评价药物外周性镇痛作用。本试验结果表明鸡骨香醇提物、水提物确有抗炎、抗外周性疼痛作用，但醇提物抗炎镇痛作用显著优于水提物，为鸡骨香活性部位的筛选奠定了基础，亦为其临床应用提供了实验依据。

［1］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志 （第一版）［M］.北京：科学出版社，2010：130.

［2］Xue M，Jiang ZZ，Liu JP，etal.Comparative study on the anti－inflammatory and immune suppressive effect of Wilforlide A［J］.Fitoterapia，2010，81（8）：1109－1112.

［3］Whittle BA.The use of changes in capillary permeability inmice to distinguish between narcotic and nonnarcotic analgesics［J］.Br J Pharmacol Chemother，1964，22（1）：246－253.

［4］Zhao Jie，Fang Fang，Yu Linzhong，et al.Anti－nociceptive and anti－inflammatory effects of Croton crassifolius ethanol extract［J］.J Ethno pharmacol，2012，142（2）：367－373.

Anti－inflammatory and anti－nociceptive effects of Croton crassifolius extract

ZHAO Jie CHEN Huiyao XIAO Huiling YE Yilu LAIYaolin HUANG Zhongjun YANG Jinyu
College of Health Science，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510310，China

Objective To observe the anti－inflammatory and anti－nociceptive effects of Croton crassifolius extract.M ethods Anti－inflammatory effectswere assessed by threemodels：xylene－induced ear swelling inmice，acetic acid－induced capillary permeability accentuation in mice and carrageenan－induced edema of the hind paw in rats.Anti－nociception was evaluated inmice using a hot－plate testand an acetic acid－induced writhing test.Results Compared with themodel group，C.crassifolius showed the inhibitory effecton xylene－induced ear swelling inmice，suppressed acetic acid－induced capillary permeability accentuation inmice and carrageenan－induced paw edema.C.crassifolius showed no significantanti－nociceptive activity in the hot－plate test，however，it significantly reduced acetic acid－induced writhing，the ethanol extract also prolonged writhing latency.Conclusion C.crassifolius demonstrates significant anti－inflammatory and peripheral anti－nociceptive effects，the effects of ethanol extractwere better than thatofwater extract.

Croton crassifolius；Anti－inflammatory；Anti－nociceptive

R285.5

A

1007－8517（2015）12－0008－03

2015.04.19）

广东药学院科技处－附属第一医院联合自然科学培育基金项目（No：GYFYLH201327）；广东省中医药局项目（No：20141161）；广东药学院2014年学生课外科技项目（No：13）。

赵杰，女，博士，研究方向：抗炎药效研究，E-mail：zhaojie6389＠163.com.