HPLC法测定前列回春丸中虎杖苷的含量

胡丽霞 程 璐 张 耕 张 红

武汉市中西医结合医院，湖北 武汉 430022

HPLC法测定前列回春丸中虎杖苷的含量

胡丽霞 程 璐 张 耕 张 红*

武汉市中西医结合医院，湖北 武汉 430022

目的：建立前列回春丸中虎杖苷含量测定的方法。方法：Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；检测波长：306nm；流动相：乙腈－水（19∶81）；柱温：30℃；流速：1ml／min条件下，采用高效液相色谱法测定虎杖苷的含量。结果：虎杖苷进样量在0.0394～0.4334μg／ml的范围内与峰面积呈良好的线性关系（r＝0.9998，n＝6），平均回收率为98.85%（RSD＝1.08%，n＝6）。结论：该方法简便易行、重现性好，可作为前列回春丸质量控制方法。

前列回春丸；虎杖苷；高效液相色谱法

前列回春丸 （浓缩丸）是在前列回春胶囊［1］的基础上进行剂型改革而进一步开发的新制剂，配方主要由虎杖、淫羊藿、炮山甲等十九味中药组成，具有益肾回春、活血通淋、清热解毒的功效。虎杖苷又名白藜芦醇苷，为虎杖的主要有效成分，具有抗癌、抗菌消炎、抗氧化等生物活性。原胶囊剂标准中没有含量测定项目，本实验采用HPLC法测定前列回春丸中虎杖苷的含量，为该制剂的质量标准制定提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪（岛津LC－10AT，检测器SPD－10A，浙大N2000软件）；数控超声波清洗器（KQ－300DE型，昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 材料 前列回春丸（规格：每8丸相当于原生药3g，本院制剂中心制备）；虎杖苷对照品（批号：111575－200301，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为重蒸水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；检测波长：306nm；流动相：乙腈－水（19∶81）；柱温：30℃；流速：1ml／min；灵敏度为0.08 AUFS；理论板数按虎杖苷峰计算不低于3000。避光操作。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取经五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的虎杖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成17.39μg／ml的溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液 取本品20丸，研细，取细粉约1.5g，精密称定，置50ml具塞棕色锥形瓶中，精密加入稀乙醇25m l，密塞，精密称定，超声处理（300W，40kHz）30min，放至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按照处方量称取除虎杖外的所有组分制备虎杖阴性对照样品，余同“2.2.2”操作，即得。

2.3 专属性考察 分别取“2.2”项下的对照品、供试品、阴性对照溶液各20μl，在“2.1”项之色谱条件下进样，记录色谱图。从图1可见，虎杖苷色谱峰峰形对称，供试品色谱图中虎杖苷峰能与其它成分很好地分离，阴性对照溶液在虎杖苷峰处基本无干扰。

2.4 线性关系考察 精密称取经五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h虎杖苷对照品7.88mg置20m l棕色量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10m l置100ml棕色量瓶中加稀乙醇至刻度并摇匀，精密吸取1、3、5、7、9、11ml分别置20ml棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度并摇匀，精密吸取6种质量浓度的对照品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以注入的虎杖苷对照品量为横坐标 （μg，X）、峰面积为纵坐标 （Y），作图得到标准曲线，回归方程为Y＝517999X－568.85，r＝0.9998（n＝6）。结果，虎杖苷对照品进样量在0.0394～0.4334μg／ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液及供试品溶液分别连续进样6次，每次20μl，峰面积RSD分别为0.98%、1.79%。表明仪器的精密度较好。

2.6 稳定性试验 精密吸取供试品（批号：121101）溶液20μl，分别在0、2、4、8、12、14h测定虎杖苷的峰面积。RSD值为1.91%，表明供试品溶液在14h内基本稳定。

2.7 重复性试验 取前列回春丸（批号：121101）6份，按“2.2”制备溶液，精密吸取溶液20μl注入色谱仪，测定，含量平均值128.00μg／g，RSD值1.30%。

2.8 加样回收率试验 称取前列回春丸（批号：121101）6份，每份20丸，研细，取细粉约0.75g，精密称定，精密加入同一浓度的虎杖苷对照品溶液1ml，余按“2.2”制备成供试品溶液，测定并计算供试品中虎杖苷的回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）

2.9 供试品含量测定 取3批供试品（批号：121101、121102、121103），分别按“2.2”制备供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液20μl，注入色谱仪，测定，结果虎杖苷含量分别为128.00、128.92、127.17μg／g。

3 讨论

据文献报道［2－5］，供试液制备中所用的溶剂有甲醇与稀乙醇，虽然用甲醇时其他峰相对小及少些，但从环保考虑，在分离度能达到要求的前提下选取稀乙醇为佳。检测波长及流动相的选择参考文献 ［2，4］选定检测波长：306nm，流动相：乙腈－水。本制剂为复方制剂，化学成分较多，通过调整，采用乙腈－水（19∶81）为流动相时，虎杖苷与其他成分能达到有效分离，分离度较好，色谱系统稳定。方法学研究表明，用HPLC法测定前列回春浓缩丸中虎杖苷的含量，操作方便，专属性强，可作为前列回春浓缩丸的质量控制方法。

［1］中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准中药成方制剂第17册 ［S］.北京：人民卫生出版社，1998：175.

［2］中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典 （一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：194－195.

［3］柯长青，蒋永海.高效液相色谱法测定金胆片中虎杖苷含量 ［J］.中国药业，2006，15（13）：33－34.

［4］彭绍冲，李耿，蔡大可，等.高效液相色谱法测定痹痛消膏中虎杖苷的含量［J］.药物分析杂志，2007，27（11）：1725－1727.

［5］杨海燕，张成.高效液相法测定朱砂七中虎杖苷含量 ［J］.中国药业，2011，20（10）：29－30.

Determ ination of Polydatin in Qianlie Huichun Pills by HPLC

HU Lixia CHENG Lu ZHANG Geng ZHANG Hong
Wuhan Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine，Wuhan，430022，China

Objective To establish amethod of determination polydatin content in Qianlie Huichun Pills.M ethod Uses the high performance liquid chromatography to determine content of polydatin.Result The sample size of polydatin in the range of 0.039 4－0.4334μg／m l showed the good linear relation with the peak area.The average recovery was98.85%（RSD＝1.08%，n＝6）.Conclusiou Themethod is simple，accurate and reproducible.Can be used as the indicators to control the quality of Qianlie Huichun Pills.

Qianlie Huichun Pills；Polydatin；HPLC

R284.1

A

1007－8517（2015）12－0003－02

2015.04.19）

胡丽霞，女，硕士研究生，主要从事中药新制剂研究。E-mail：huli－23＠163.com。

张红，女，主任中药师，主要从事中西药新制剂的研究与开发工作。E-mail：wyzh688＠126.com