红花注射液对人肺癌A549细胞体外抑制的实验研究

范林林胡亚南王恩军靳 祎*

1.河北省保定市儿童医院，河北 保定 071000；2.河北大学基础医学院，河北 保定 071000

红花注射液对人肺癌A549细胞体外抑制的实验研究

范林林1胡亚南1王恩军2靳 祎2*

1.河北省保定市儿童医院，河北 保定 071000；2.河北大学基础医学院，河北 保定 071000

目的：探讨红花注射液对人肺癌A549细胞体外增殖的影响。方法：采用MTT法测定了不同剂量的红花注射液对A549细胞体外增殖的抑制作用。结果：红花注射液对A549细胞增殖有较强的抑制作用；呈现良好的量效关系和时效关系。结论：红花注射液对人肺癌A549细胞的增殖有较强的抑制作用。

红花注射液；肺癌；细胞株A549；抑制作用

红花在祖国医药学中的应用已有悠久的历史，主要活性成分为红花黄色素、黄酮类、脂肪酸、多糖，临床主要用于月经不调、痛经、经闭、跌打损伤、冠心病、血管栓塞性疾病、传染性肝炎等的治疗［1－3］。本试验测定了不同剂量的红花注射液对人肺癌A549细胞的外体抑制作用，为红花抗肿瘤的深入研究及今后的临床应用提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 材料 ①红花注射液 （山西安特生物制药股份有限公司，国药准字Z14020734，批号20090614）；②人肺癌细胞株A549，由河北大学生命科学学院提供。

1.2 试剂与仪器 ①试剂：RPMI 1640培养基和胰蛋白酶（GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；二甲亚砜（美国SIGMA公司）；青霉素、链霉素（华北制药股份有限公司）。②仪器：CO2培养箱（MCO－20AIC，日本三洋公司）；生物安全柜（BHC－1300IIA2，苏州苏洁净化设备有限公司）；倒置显微镜 （IX83，日本奥林巴斯公司）；酶标仪（HT2，美国BIO－RED公司）。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养 A549细胞复苏后，贴壁生长于含10%胎牛血清、青霉素和链霉素各100U／m l的RPMI 1640完全培养液中，并置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

1.3.2 红花注射液对A549细胞增殖的影响 采用MTT法，将A549细胞按照5×104个／ml的密度接种到96孔培养板中，试验分为以下几组：红花注射液组（10μl、20μl、40μl、80μl）、阴性对照组 （加相同剂量的生理盐水终体积为200μl／孔）。分别培养24h、48h和72h后加入5μg／μl的MTT液，继续培养4h，弃上清液，加入二甲亚砜（DMSO），磁力震荡15min，用酶标仪测定各孔吸光度A值，测定波长λ＝570 nm，计算细胞增殖的抑制率：抑制率（%）＝（阴性对照组A值－红花注射液组A值）／阴性对照组A值×100%［4］。

1.3.3 细胞形态学观察 取生长状态良好的A549细胞接种于48孔细胞培养板内，培养24h，红花注射液组加入40μl／孔的红花注射液，阴性对照组加入生理盐水，培养24h后在倒置显微镜下观察细胞形态。

1.4 统计学分析 采用统计学软件SPSS 16.0进行分析，实验数据以 （）表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 红花注射液对A549细胞增殖的抑制作用 红花注射液（10μl／孔、20μl／孔、40μl／孔和80μl／孔）分别作用A549细胞24、48、72 h后，与阴性对照组比较，各剂量的红花注射液在12、48、72 h对A549细胞增殖均有抑制作用，差异有统计学意义（P＜0.05）。且随着药物剂量的提高和刺激时间的延长，红花注射液对A549细胞的抑制作用也逐渐增强，即具有剂量和时间依赖性 （表1）。

表1 不同剂量的红花注射液对A549细胞增殖的抑制作用（%，）

表1 不同剂量的红花注射液对A549细胞增殖的抑制作用（%，）

注：与阴性对照组比较，*P＜0.05。

1.87±0.25 2.14±0.38 1.46±0.33红花注射液组 10μl／孔 10.12±0.75* 18.43±1.45* 20.76±2.01*20μl／孔 15.40±3.81* 31.42±5.69* 41.00±4.32*40μl／孔 40.65±2.74* 44.08±3.35* 59.36±5.17*80μl／孔 54.39±3.15* 62.45±5.22* 73.74±6.93 24 h 48 h 72 h阴性对照组组别 剂量－*

2.2 细胞形态学变化 阴性对照组A549细胞贴壁良好，呈多角形或长梭形，边界清晰，排列无方向性。红花注射液组细胞多呈圆形，边界胞膜起皱，可见大量悬浮细胞和碎片（图1）。

3 讨论

红花注射液是从野生红花药材中经过精制而成的中药注射液，主要含有红花黄色素、红花醌苷、红花素、新红花苷等成份［5－6］。据报道，红花注射液对体外培养的Hela细胞、HepG－2细胞的增殖有较强的抑制作用，并能促进细胞凋亡，其机制可能与抑制细胞中Survivin、Bcl－2蛋白的表达有关［7－8］。本试验结果显示，红花注射液对体外培养的人肺癌A549细胞增殖有较强的抑制作用，并呈现良好的量效和时效关系，随着药物剂量和作用时间的增加，抑制作用明显增强，但是其抑制细胞增殖的机制还有待进一步研究。

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R285.5

A

1007－8517（2015）12－0011－02

2015.04.21）

范林林（1978－），男，主治医师，E-mail：843743796＠qq.com

靳祎（1977－），女，副教授，硕士，从事抗肿瘤中药及化学生物学研究。E-mail：jinyi2009＠163.com