不同地区产牛膝齐墩果酸、蜕皮甾酮含量的比较研究

潘琦 穆春旭 张建军

辽宁医药职业学院，沈阳110101

不同地区产牛膝齐墩果酸、蜕皮甾酮含量的比较研究

潘琦 穆春旭 张建军

辽宁医药职业学院，沈阳110101

目的测定不同产地牛膝的皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮含量，比较不同产地牛膝的皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮含量的差异。方法采用高效液相色谱法（HPLC）检测，十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，齐墩果酸测定甲醇为流动相，紫外检测波长为280 nm；蜕皮甾酮测定乙腈为流动相，紫外检测波长为250 nm；进样量均为10μl。结果河南沁阳产牛膝皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮的含量最高，质量最好，河南安阳、安徽太和、云南曲靖、沈阳地区产牛膝皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮的含量较高，均符合国家药典标准。结论河南沁阳产牛膝的质量最好；沈阳等地区产牛膝质量较好，符合《中国药典》规定，适合药用。

牛膝；齐墩果酸；蜕皮甾酮；含量比较

中药材牛膝来源为苋科牛膝属多年生草本植物牛膝（Achyranthesbidentata Bl.）的干燥根。牛膝含皂苷（皂苷水解得齐墩果酸）、多糖、羟基促蜕皮甾酮和牛膝甾酮、生物碱、多种微量元素[1]等多种药用成分，其中所含生物碱，具有良好的降压作用，所含的脱皮甾酮能改善肝功能，具有降低血浆胆固醇、增强细胞活性的作用，富含的牛膝多糖有明显的增强免疫功能的作用[2]，具有补肝肾、强筋骨、逐瘀通经、引血下行、利尿通淋等作用[3]，主要用于治疗腰膝酸痛、筋骨无力、肝阳眩晕、痛经闭经、牙痛口疮、吐血等症，日用量为4.5～9 g。药用牛膝需冬季茎叶枯萎时采挖，去除茎叶，除净泥沙及须根。按根的粗细、长短不同分等，分别捆成小把，晒至半干后，用硫磺熏两次，将顶端切齐，再晒至全干[4]。牛膝主产于河南武陟、沁阳、焦作等地，奉为道地药材，是著名的四大怀药之一，又称怀牛膝。河北、山东、山西、安徽、江西、湖南、四川、云南、贵州等省亦产，均为栽培品。全国牛膝以河南产量最多，占全国总产量的50%以上，河南产的怀牛膝质量最好[5]。最近一段时间沈阳周边部分县区有人尝试种植药用植物牛膝，植物长势很好，采收药材外观性状也较好，但主要成分含量尚不清楚。本文主要针对沈阳地区产牛膝与市售不同产区牛膝，分别采用高效液相色谱（HPLC）紫外测定法[6]及《中国药典》2010年版牛膝项下含量测定法对不同产地牛膝的皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮含量进行测定，同时比较不同产区牛膝的皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮的含量差异及临床药用价值。

1 材料与方法

1.1 药材

牛膝药材采自辽宁省沈阳市法库县冯贝堡乡和本校（沈阳市苏家屯区）栽培品，均为1年生。另外，在药店购得牛膝饮片，产地分别为河南安阳、河南沁阳、安徽太和、云南曲靖等地。牛膝药材及牛膝饮片经本院胡德奇教授鉴定均为正品。

1.2 试药

齐墩果酸（上海源叶生物科技公司，批号：YN110 1SA12），蜕皮甾酮（中国药品生物制品检定所，批号：111638-201208），水为纯化水，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.3 仪器与设备

美国Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），四元泵（美国安捷伦公司），在线脱气机系统（美国安捷伦公司），G1314A型紫外检测器（VWD）（美国安捷伦公司），G217OBALC化学工作站（美国安捷伦公司）。十万分之一电子天平（日本岛津公司AEL-40SM）。

1.4 检测方法

1.4.1 色谱条件色谱柱：美国Agilent XDB-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm），填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，齐墩果酸测定以甲醇-水为流动相，流速：0.8 ml/min，柱温28℃，紫外检测波长为280 nm，进样量10μl；蜕皮甾酮测定以乙腈-水-甲酸（16∶84∶0.1）为流动相，流速：1.0 ml/min,柱温30℃，紫外检测波长为250 nm；进样量10μl。理论板数应不低于4000[7]（按齐墩果酸、蜕皮甾酮峰面积计算）。

1.4.2 对照品溶液的制备

1.4.2.1 齐墩果酸对照品溶液的制备精确称取适量的齐墩果酸对照品，用甲醇配制成浓度约100μg/ml的标准液，备用[8]。

1.4.2.2 蜕皮甾酮对照品溶液的制备精确称取适量的蜕皮甾酮对照品，用甲醇配制成浓度约100μg/ml的标准液，备用[9]。

1.4.3 样品溶液的制备

取6批牛膝样品，分别粉碎过3号筛，各取约1.0 g，60℃烘干，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇40ml，密塞，采用超声方法处理40min，放置至冷，过滤，滤液置于容量瓶（100 ml）中，用50%乙醇分别洗涤容器和残渣，合并滤液和洗液于100ml容量瓶中，加50%乙醇定容，摇匀[10]。经过0.45μm微孔滤膜过滤，精密吸取滤液1 ml于10ml容量瓶中，加50%乙醇定容，摇匀，作为齐墩果酸样品溶液。

取6批样品各约1.0 g，60℃烘干，粉碎，过3号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水饱和正丁醇30ml，密塞，浸泡过夜，超声处理30min[11]，滤过，用甲醇10ml分次洗涤容器和残渣，合并滤液和洗液，蒸干，加少量甲醇溶解残渣，移至10ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即为蜕皮甾酮测试样品。

1.4.4 样品检测

分别精密吸取10μl上述对照品溶液和牛膝样品溶液，进样，用高效液相色谱仪按“2.1项”的色谱条件进行含量的测定[12]。

2 结果

2.1 不同产地牛膝的皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮含量测定结果

将上述“2.3项”制备的样品溶液采用“2.1项”的色谱条件，对不同产地牛膝的皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮含量进行测定，得到如下齐墩果酸、蜕皮甾酮标准对照品及牛膝样品的色谱图（图1～图4）。

图1 齐墩果酸对照品色谱图

图2 牛膝样品色谱图

图3 蜕皮甾酮对照品色谱图

图4 牛膝样品色谱图

2.2 牛膝样品齐墩果酸、蜕皮甾酮的含量

根据测定的不同产地牛膝皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮的峰面积，计算出供试样品中齐墩果酸、蜕皮甾酮的含量，计算结果见表1。

表1 牛膝样品齐墩果酸、蜕皮甾酮的含量（%）

3 讨论

牛膝作为药用植物临床应用广泛，药用价值高，开发利用前景广阔，有较高的经济效益。通过对不同产地牛膝中齐墩果酸、蜕皮甾酮含量的检测，发现不同产地牛膝中齐墩果酸、蜕皮甾酮的含量有所差别[13]。

检测结果显示，河南沁阳产的牛膝中有效成分皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮的含量最高，质量最好；与河南怀庆府（武涉、博爱、沁阳等地）所产为道地药材的评价一致；有很好的临床药用价值[14]。

河南安阳产的牛膝齐墩果酸、蜕皮甾酮的含量略低于河南沁阳；安徽太和产的牛膝齐墩果酸含量略低于河南沁阳，蜕皮甾酮含量略高；沈阳地区产的牛膝齐墩果酸、蜕皮甾酮含量均较高；云南曲靖产的牛膝齐墩果酸、蜕皮甾酮含量均较低，质量略差，以上样品均符合《中国药典》（2010年版）规定的标准[15]。

近年沈阳周边部分县区有人尝试种植药用植物牛膝，所栽培的牛膝与市售产自河南安阳、河南沁阳等地的牛膝相比外观性状差异不大，均符合药用要求；其有效成分皂苷（齐墩果酸）、蜕皮甾酮的含量与河南安阳、安徽太和所产含量相当，符合国家药典标准（2010年版）。同时沈阳地区产牛膝产量较高，药材性状良好，有效成分含量较高，药材质量较好，适合临床药用，有较好的开发利用前景。

[1]赵婉婷，孟大利，李铣，等.牛膝的化学成分[J].沈阳药科大学学报，2007,15（4）：207.

[2]孟大利，李铣.中药牛膝化学成分和药理活性的研究进展[J].中国药物化学杂志，2001，11（2）：120-124.

[3]黄志芳，黄志红，胡吉林，等.土牛膝中齐墩果酸、牛膝多糖的提取与鉴定[J].中国实用医药，2010，5（17）：6-7.

[4]胡德奇，刘志梅，张建军，等.辽宁省朝阳地区产黄芩与市售黄芩黄芩苷含量比较研究[J].中国保健营养，2012，22（4）：574-575.

[5]张翠英，梁生旺，张广强.不同产地牛膝中蜕皮甾酮的含量测定[J].中国药学杂志，2001，36（10）：699-700.

[6]王源园，张尊建，王兴旺，等.牛膝的HPLC/UV/MS指纹图谱研究[J].中药材，2003，26（11）：787-789.

[7]何玉川，郭琳，徐艳红.高效液相色谱法测定脉络宁颗粒中绿原酸含量[J].中国当代医药，2012，19（9）：55-56.

[8]陈惠玲，张丽丽.高效液相色谱法测定怀牛膝中齐墩果酸的含量[J].云南中医中药杂志，1996，17（3）：58.

[9]林大专，王广树，杨晓虹，等.牛膝中新蜕皮甾酮类成分的研究[J].中国药学杂志，2006，41（17）：1295.

[10]陈阿丽，杨永霞，梁生旺，等.高效液相色谱法测定妇康宁片中阿魏酸的含量[J].中国当代医药，2013，20（28）：71-72.

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[12]李英莲，贾贵龙，车轩.HPLC测定净石灵片中淫羊藿苷的含量[J].中国实用医药，2010，5（36）：49-50.

[13]张彦功，杨玉琴，李建，等.不同产地牛膝药材中齐墩果酸的含量测定[J].贵阳中医学院学报，2010，32（1）：20-21.

[14]李先端、胡世林.不同产地牛膝中齐墩果酸含量测定[J].中国中药杂志，1995，20（8）：459-460.

[15]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：282-283．

Com parative study of content of oleanolic acid and ecdysterone from radix Achyranthis bidentatae in different region

PAN Qi MU Chun-xu ZHANG Jian-jun
Liaoning Medicine Vocational College,Shenyang 110101,China

Objective To determine the content of saponin(oleanolic acid)and ecdysterone of Achyranthes bidentata from different habitat order to compare the difference of content of saponin(oleanolic acid)and ecdysterone of Achyranthes bidentata from different habitat.M ethods High performance liquid chromatography(HPLC)was used and Octadecylsilane chemically bonded silica was selected as chromatographic column.Methanol was selected as mobile phase in determination of oleanolic acid and acetonitrile asmobile phase determination of ecdysterone.The ultraviolet detection wavelength in oleanolic acid and ecdysterone was 280 nm and 250 nm respectively.The sample size was both 10μl.Results The content of saponin(oleanolic acid)and ecdysterone of Achyranthes bidentata was the highestwith the best quality produced in Qinyang of Henan province,and the content of saponin(oleanolic acid)and ecdysterone of Achyranthes bidentata was higher produced in Anyang city of Henan province,Taihe county of Anhui province,Qujing city of Yunnan province,and Shenyang city which allmet the standard of State Pharmacopoeia.Conclusion The quality of Achyranthis bidentatae produced in Qinyang city of Henan province is best and in other regions like Shenyang city is betterwhich allmeet the criteria of China Pharmacopoeia and are suitable formedication.

Achyranthis bidentatae;Oleanolic acid;Ecdysterone;Content comparison

R927.2

A

1674-4721（2015）04（c）-0010-03

2015-01-28本文编辑：许俊琴）

潘琦（1965-），男，辽宁沈阳人，实验师，研究方向：医学分析检验及药品分析检测