HPLC法同时测定氯地霜中氯霉素、醋酸地塞米松的含量

★ 丁志军罗美兰 廖银根 许时贵 徐瑞 （江西省皮肤病专科医院药剂科 南昌 330001）

HPLC法同时测定氯地霜中氯霉素、醋酸地塞米松的含量

★ 丁志军*罗美兰 廖银根 许时贵 徐瑞 （江西省皮肤病专科医院药剂科 南昌 330001）

目的：建立高效液相色谱法同时测定氯地霜中氯霉素和醋酸地塞米松含量的方法。方法：Agilent C18色谱柱（150mm×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇（A）-水（B），梯度洗脱；流速1.0m L/m in；柱温20℃；检测波长240 nm。结果：氯霉素、醋酸地塞米松的线性范围分别为0.784～7.840μg（r=0.999 8）、0.019 84～0.198 40μg（r=0.999 7）；平均加样回收率分别为99.00%、98.91%，RSD分别为0.29%、0.89%（n=6）。结论：该方法简便准确，重现性好，可用于氯地霜的质量控制。

氯地霜；氯霉素；醋酸地塞米松；高效液相色谱法

氯地霜是我院制剂室自制制剂（批准文号：赣药制字H20090303），由氯霉素、醋酸地塞米松、羟苯乙酯等组成的水包油型乳膏剂，具有抗菌、消炎作用，临床上常用于皮炎、湿疹、痤疮等，疗效良好。制剂原标准对2种主要成分的含量测定分别采用抗生素微生物检定法、高效液相色谱法。但抗生素微生物检定法的专属性差，凡具有抗菌活性的物质都会干扰测定结果，并且操作繁琐，影响因素多，难以掌握，致使测定结果不准确，为了更好地控制制剂的质量，保证制剂疗效，故笔者研究建立了梯度洗脱高效液相色谱法同时测定氯地霜中2种主要成分的含量。

1 材料

1.1 仪器 Agilent1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；BP-211D Sartorius电子天平（德国）；UV-2401紫外分光光度计（日本岛津公司）。

1.2 试药 氯霉素对照品（供含量测定用，中国食品药品检定研究院，批号130555-201203）；醋酸地塞米松对照品（含量99.2%，中国食品药品检定研究院，批号100122-201206）；甲醇（色谱纯，Merck公司）；水（重蒸馏水，江西省皮肤病专科医院制剂室）；其余试剂均为分析纯；氯地霜（每20 g含氯霉素0.2 g与醋酸地塞米松5mg，江西省皮肤病专科医院制剂室，批号131001,131101,131201）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18（150mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脱（见表1）；流速：1.0m L/m in；柱温：20℃；检测波长：240 nm；进样量10μL。

表1 梯度洗脱条件

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取氯霉素对照品、醋酸地塞米松对照品适量，精密称定，置量瓶中，加流动相溶解制成每1m L分别含392.00,9.92μg的对照品溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品适量（约相当于氯霉素、醋酸地塞米松分别为20,0.5mg），精密称定，加甲醇约20m L，置60℃水浴中加热，搅拌使氯霉素及醋酸地塞米松溶解，转入50m L量瓶中，同法操作2次，放冷至室温，用甲醇稀释定容至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2h以上，取出，迅速滤过，续滤液放至室温，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取按氯地霜处方工艺方法制备的缺氯霉素、缺醋酸地塞米松的阴性样品适量，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.2.4 专属性试验 按上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果供试品在与对照品色谱图相应的位置上有相同的氯霉素峰、醋酸地塞米松峰，而阴性对照无干扰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液2.0,5.0, 10.0,15.0,20.0μL分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，进行线性回归，氯霉素的回归方程为：Y＝610.789 7X＋2.780 5（r＝0.999 8），线性范围为0.784～7.840μg；醋酸地塞米松的回归方程为：Y＝2262.147 8X＋1.170 7（r＝0.999 7），线性范围为0.019 84～0.198 40μg。

2.2.6 精密度试验 取对照品溶液，注入液相色谱仪，连续进样6次，每次10μL，测得氯霉素、醋酸地塞米松平均峰面积值，RSD分别为0.50%、0.84%，表明精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 精密吸取对照品溶液，分别在0，2，4，6，8 h进样，进样量为10μL，测得氯霉素、醋酸地塞米松平均峰面积值，RSD分别为0.48%（n＝5）和1.39%（n＝5），表明氯霉素、醋酸地塞米松在8 h内稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批样品6份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，进样量为10μL，测得峰面积值，计算氯霉素、醋酸地塞米松含量，RSD分别为1.34%，1.69%，表明此法重复性良好。

2.2.9 加样回收率试验 取同一批已知含量的样品（批号131001）6份，分别精密加入一定量的氯霉素、醋酸地塞米松对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，进样量为10μL。结果见表2。

2.2.10 样品含量测定 取本品3批，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，进样量为10μL，按外标法计算氯地霜中氯霉素、醋酸地塞米松标示量的百分含量。结果见表3。

表2 加样回收率试验结果（n=6）

表3 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

3.1 检测波长的选择 分别取氯霉素、醋酸地塞米松对照品溶液，用紫外分光光度计在200～600 nm波长范围内扫描，结果二者分别在277，240 nm波长处有最大吸收，但因处方中氯霉素与醋酸地塞米松的含量比为40∶1，为了兼顾二者的检测灵敏度，经试验摸索，最终选择240 nm为检测波长。

3.2 分析方法的确定 与抗生素微生物检定法比较，梯度洗脱反相高效液相色谱法测定氯地霜中氯霉素和地塞米松的含量，能使制剂中的组分与辅料有效分离，辅料对测定结果无干扰，灵敏度高，操作简单，快速，结果准确，更加适合于氯地霜生产过程中的质量控制。

［1］国家药典委员会.中国药典·二部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:附录93、附录29.

Simultaneous Determ ination of chloramphenicol and Dexamethasone Acetate in Compount Pexamethasone Cream by HPLC

DING Zhi-jun,LUO M ei-lan,LIAO Yin-gen,XU Shi-gui,XU Rui
Departmentof Pharmacy,Dermatology Special Hospital of Jiangxi Province,Nanchang 330001,China.

Objective:To establish an HPLCmethod for the simultaneous determination of chloramphenicol and dexamethasone acetate in Compount Pexamethasone cream.Methods：The chromatographic separation was performed on a Agilent C18column with amixture of methanol-water asmobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min，the column temperature wasmaintained at 20℃and the detection wavelength was 240 nm．Results：The calibration curves in the range of 0.784~7.840μg（r=0.999 8）for chloramphenicol and 0.019 84~0.198 40μg（r=0.999 7）for dexamethasone acetate were good linear，respectively.The average recoveries were 99.00%and 98.91%；RSD were 0.29%and 0.89%（n=6）.Conclusion:An accuratemethod can be used for the quality control of Compount Pexamethasone cream．

Compount Pexamethasone cream;chloramphenicol;dexamethasone acetate;HPLC

R927.2

B

2014-03-18）编辑：曾文雪

*第一作者：丁志军，男，硕士，中药师、工程师。研究方向：中药（药物）制剂。Tel：15070917985,E-mail：dzj7880@126.com。