HPLC梯度洗脱法同时测定地麻滴鼻液中2种组分的含量

时正媛，曾蔚欣，杨 丽，贝 雷，孙路路*

HPLC梯度洗脱法同时测定地麻滴鼻液中2种组分的含量

时正媛1，曾蔚欣1，杨 丽2，贝 雷2，孙路路1*

目的 建立测定地麻滴鼻液中地塞米松磷酸钠和盐酸麻黄碱的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为磷酸二氢钾缓冲液-甲醇-乙腈，梯度洗脱，流速1 mL/min，检测波长242 nm。结果 地塞米松磷酸钠在5.2～52.0 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 9)，盐酸麻黄碱在0.501～5.01 mg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 5)。地塞米松磷酸钠平均回收率为99.13%，RSD为1.46%；盐酸麻黄碱平均回收率为99.19%，RSD为1.04%。结论 该法简便、准确并且重现性好，可用于地麻滴鼻液中地塞米松磷酸钠和盐酸麻黄碱的质量控制。

地麻滴鼻液；地塞米松磷酸钠；盐酸麻黄碱；高效液相色谱法

0 引言

地麻滴鼻液的主要成分为地塞米松磷酸钠和盐酸麻黄碱，为北京同仁医院自行研制的复方制剂，用于过敏性鼻炎、鼻窦炎。地塞米松磷酸钠和盐酸麻黄碱的含量测定方法分别有酸碱滴定法、紫外分光光度法和高效液相色谱法[1-8]。本试验建立了同时测定地麻滴鼻液中2种成分含量的HPLC方法。该方法简便准确，重复性好，为有效控制地麻滴鼻液的质量、更好地保证其临床疗效提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1260液相色谱仪(美国安捷伦公司)；AG285型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限责任公司)；Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；甲醇与乙腈均为色谱纯，磷酸二氢钾、三乙胺均为分析纯，水为超纯水。地塞米松磷酸钠对照品(批号：100016-201216)、盐酸麻黄碱对照品(批号：171241-201007)均购自中国药品生物制品检定研究院；地麻滴鼻液[批号：20140328、20140426、20140504，规格：本品含盐酸麻黄碱1%、地塞米松磷酸钠0.01%(g/mL)]为本院制剂室自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：A相为磷酸盐缓冲溶液(取磷酸二氢钾6.8 g，用纯化水溶解并稀释至1 000 mL，再加三乙胺5 mL，混匀，用磷酸调节pH值至3.0)，B相为甲醇，C相为乙腈，梯度洗脱(梯度洗脱程序见表1)；柱温：室温；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；检测波长：242 nm。在该色谱条件下，在盐酸麻黄碱和地塞米松磷酸钠保留时间处，样品中的辅料与溶剂无干扰，色谱图见图1。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取地塞米松磷酸钠和盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，用水溶解并稀释，配制成每1 mL约含地塞米松磷酸钠50 μg、盐酸麻黄碱5 mg的混合溶液作为储备液；精密量取适量，加流动相溶解并稀释制成每1 mL约含地塞米松磷酸钠20 μg、盐酸麻黄碱2 mg的混合溶液，采用0.25 μm微孔滤膜滤过，取续滤液备用。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取地麻滴鼻液2 mL，置于10 mL量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀，采用0.25 μm微孔滤膜滤过，取续滤液备用。

图1 地麻滴鼻液高效液相色谱图

2.2.3 阴性对照品溶液 按地麻滴鼻液处方比例制备缺少盐酸麻黄碱和地塞米松磷酸钠的阴性样品，并按“2.2.2”项下方法制备成阴性对照品溶液。

2.3 线性关系考察 精密量取储备液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，配成系列浓度的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积A为纵坐标，进样浓度C为横坐标绘制标准曲线。地塞米松磷酸钠在5.2～52.0 μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为：A=0.396 C+10.55(r=0.999 9，n=6)；盐酸麻黄碱在0.501～5.01 mg/mL范围内线性关系良好，回归方程为：A=36.20 C-6.33(r=0.999 5，n=6)。

2.4 精密度试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，测定地塞米松磷酸钠和盐酸麻黄碱的峰面积平均值分别为707.9和805.8，RSD分别为0.82%和0.53%，表明仪器精密度良好。

2.5 供试品溶液的稳定性试验 取“2.2.2”项下的供试品溶液1份，于室温下放置，分别放置0、2、4、6、8 h后，按“2.1”项下色谱条件测定，计算含量结果，地塞米松磷酸钠和盐酸麻黄碱的RSD分别为0.96%和0.27%，表明供试品溶液在8 h内测定，其含量保持稳定。

2.6 回收率实验 取已知含量的地麻滴鼻液(批号：20140504)9份，精密量取，每份1 mL，分别置10 mL量瓶中，分别精密添加盐酸麻黄碱原料4.0、5.0、6.0 mg，地塞米松磷酸钠原料0.04、0.05、0.06 mg，各3份，混合均匀后加入流动相稀释至刻度，摇匀，按照“2.1”项下液相方法进行测定，外标法计算其含量，并计算回收率。结果见表2、表3。

2.7 重复性试验 按照“2.2.2”项下方法处理同一批号(20140426)样品6份，依法测定，按外标法计算含量，结果地塞米松磷酸钠和盐酸麻黄碱的含量分别为标示量的99.7%和98.3%，RSD分别为1.2%和0.88%(n=6)。

2.8 样品含量测定 取地麻滴鼻液，按“2.2”项下制备供试品溶液和对照品溶液，按“2.1”项下测定，计算样品含量，结果地麻滴鼻液中地塞米松磷酸钠的含量分别为标示量的98.6%、99.7%和100.7%，RSD分别为1.3%、0.67%和0.94%(n=3)；地麻滴鼻液中盐酸麻黄碱的含量分别为标示量的101.2%、99.6%和100.6%，RSD分别为0.89%、1.5%和0.86%(n=3)。根据本品的质量研究结果，参照中国药典2010版，将盐酸麻黄碱和地塞米松磷酸钠的含量限度定为标示量的90.0%～110.0%。

表2 盐酸麻黄碱回收率测定结果(n=9)

表3 地塞米松磷酸钠回收率测定结果(n=9)

3 讨论

3.1 检测波长选择 经二极管阵列检测器考察，盐酸麻黄碱和地塞米松磷酸钠的最大吸收波长分别为210 nm和242 nm，由于处方中盐酸麻黄碱的量约为地塞米松磷酸钠的100倍，为使两种成分色谱峰相当，本试验选用含量较少的地塞米松磷酸钠的最大吸收波长242 nm作为检测波长，以优化两种成分的响应值，可很好地实现两种成分的同时测定。

3.2 流动相的选择 参照《中国药典》2010年版二部中“地塞米松磷酸钠”和“盐酸麻黄碱”的含量测定条件[1]及文献[4-8]，采用磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈系统。用三乙胺调节缓冲液的pH值，不同pH值对盐酸麻黄碱的峰型有较大影响，采用pH值为3.0的缓冲液时，盐酸麻黄碱的峰型好，具有较高的理论塔板数。选用不同比例的流动相进行洗脱，结果地塞米松磷酸钠保留时间较长，与盐酸麻黄碱的色谱行为相差较大，短时间内无法完成两种成分的测定。本研究采用梯度洗脱后，两种成分色谱峰峰型较好，保留时间合适，可用于该制剂的质量控制。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京：中国医药科技出版社,2010:250-251,777-778.

[2] 李冰,肖小军.地麻滴鼻液的制备及质量控制研究[J].解放军药学学报,2007,23(3):221-223.

[3] 陈璇,王丽梅,傅秀娟.双波长分光光度法测定地麻滴鼻液中地塞米松磷酸钠、盐酸麻黄碱的含量[J].中国医院药学杂志,1997,17(8):359-361.

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[8] 陈勇.HPLC法检测苗灵鼻爽喷剂中添加的地塞米松磷酸钠[J].中国现代药物应用,2013,7(14):10-11.

Simultaneous determination of two components in dexamethasone-ephedrine nasal drops by HPLC gradient elution

SHI Zheng-yuan1，ZENG Wei-xin1，YANG Li2，BEI Lei2，SUN Lu-lu1*

(1.Department of Pharmacy，Beijing Shijitan Hospital Affiliated to Capital Medical University，Beijing 100038，China；2.Beijing Food and Drug Administration，Beijing 100038，China)

Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determination of dexamethasone sodium phosphate and ephedrine hydrochloride in dexamethasone-ephedrine nasal drops.Methods The Agilent ZORBAX SB-C18column(150 mm×4.6 mm，5 μm)was used.The mobile phase was composed of gradient potassium dihydrogen phosphate solution-methanol-acetonitrile at the flow rate of 1.0 mL/min.The UV detection wavelength was 242 nm.Results The linear ranges for dexamethasone sodium phosphate and ephedrine hydrochloride were respectively 5.2～52.0 μg/mL(r=0.999 9) and 0.501～5.01 mg/mL(r=0.999 5).The mean recoveries of them were respectively 99.13%and 99.19%with theRSDat 1.46%and 1.04%.Conclusion This method is simple,accurate and reliable,and can be used for the quality control of dexamethasone-ephedrine nasal drops.

Dexamethasone-ephedrine nasal drops;Dexamethasone sodium phosphate;Ephedrine hydrochloride;HPLC

2014-08-12

1.首都医科大学附属北京世纪坛医院药剂科，北京 100038；2.北京市食品药品监督管理局，北京 100038

首都卫生发展科研专项-重点攻关项目(首发2011-2008-01)

10.14053/j.cnki.ppcr.201503018

*通信作者