GC-MS测定利夫康洗液中蛇床子素的含量

陈琴华，朱 军，黄麟杰，余 飞

·药学研究·

GC-MS测定利夫康洗液中蛇床子素的含量

陈琴华，朱 军*，黄麟杰，余 飞

目的 建立快速、灵敏的气相-质谱联用法，测定利夫康洗液中蛇床子素的含量。方法 色谱条件：DB-5MS (30 m×0.32 mm，0.25 μm)石英毛细管色谱柱；程序升温条件为140 ℃保持2 min，以10 ℃/min升至280 ℃，保持6 min；进样口和接口温度为280 ℃。样品水浴蒸干，乙酸乙酯溶解，应用气相-质谱联用法进行测定。结果 蛇床子素在1.0～50 μg/mL线性关系良好，r=0.999 1，精密度为2.01%，平均回收率为97.26%，检测限为1.0 ng/mL。结论 本方法简便、快速，灵敏度高，结果准确可靠，可以用于利夫康洗液中蛇床子素的含量测定。

利夫康洗液；蛇床子素；气相色谱-质谱

0 引言

利夫康洗液由苦参、黄柏、蛇床子、白鲜皮、黄连、地肤子、花椒、赤芍、板蓝根、何首乌、土茯苓等11味中药组成，具有清热燥湿、杀虫止痒的功效，常用于真菌性、滴虫性阴道炎以及湿疹、接触性皮炎和体股癣[1]。蛇床子为主要构成中药，具有温肾助阳、祛风、燥湿、杀虫之功效，主要用于治疗滴虫性阴道炎、银屑病等[2-4]。蛇床子素是蛇床子中主要有效成分之一，是从蛇床子中提取的主要香豆素类化合物，现代药理试验研究证明，其具有抗滴虫、抗心律失常、性激素样和抗炎等作用[5-7]。目前对蛇床子素的测定主要有分光光度法[8]、荧光法[9]、薄层扫描法[10]和HPLC法[11-12]。由于蛇床子素具有一定的挥发性，气相色谱也可用来定量测定蛇床子素[13]。随着质谱的发展，气相色谱-质谱联用(GC-MS)在中药挥发性成分定量测定的应用越来越广泛[14-15]，为了控制该洗液的质量，笔者采用GC-MS法测定利夫康洗液的主要有效成分-蛇床子素，为其质量评价提供科学依据。

1 仪器与试药

GCMS-QP2010型气相-质谱联用仪(日本岛津)，工作站GCMSsolution 2.10，DB-5 (30 m×0.32 mm，0.25 μm)毛细管气相色谱柱(安捷伦)；KQ-100DB型数控超声波清洗器(苏州江东精密仪器有限公司)；HP-01溶剂过滤器(杭州赛析科技有限公司)；日本岛津AEU-210电子天平；TG16G离心仪。

蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110822-200406，20 mg，供含量测定)；利夫康洗液(西安太极药业有限公司，批号：131108)；高纯氦气(昆山普克莱斯实用气体有限公司，纯度≥99.999%)；乙酸乙酯(分析纯，西安化学试剂厂)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 DB-5 (30 m×0.32 mm，0.25 μm)毛细管气相色谱柱为分析柱；以高纯氦气为载气，流速2.0 mL/min；进样口温度：280 ℃，程序升温：起始温度140 ℃，保持2 min，以10 ℃/min速率升温至280 ℃，保持6 min；进样量为1 μL，接口温度280 ℃，EI源温度200 ℃，电子轰击能量为70 eV，采集延时2.5 min；进样方式不分流进样，m/z为244(蛇床子素)。

2.2 溶液的配制 对照品溶液：取蛇床子素对照品约10 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，作为蛇床子素对照品储备液。精密吸取适量，用甲醇稀释得50 μg/mL的工作溶液。供试品溶液：精密吸取利夫康洗液20 mL，置水浴(95 ℃)中挥干，加10 mL乙酸乙酯，完全溶解后用0.45 μm微孔滤膜滤过，得供试品溶液。阴性对照品溶液：按照利夫康洗液的处方组成，称取独缺蛇床子的阴性样品适量，100 mL甲醇超声提取，置水浴(95 ℃)中挥干，加入适量乙醚完全溶解后，用0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得阴性对照溶液。

2.3 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液适量，分别注入气相色谱-质谱联用仪，按“2.1”项下色谱条件进样分析。供试品溶液色谱图中，在与对照品溶液相应的位置上有一相同的色谱峰，而阴性对照品溶液在此保留时间无吸收峰，表明阴性对照对测定无干扰。色谱图见图1。从图1可见，利夫康洗液的其他成分在该色谱条件下不影响蛇床子素的测定，因此，其专属性较强，可以用于利夫康洗液中蛇床子素的测定。

图1 离子监测色谱图

2.4 线性关系考察 取一定量的蛇床子素对照品溶液，配置一系列浓度的对照品溶液，其浓度分别为1.0、1、5、10、20、50 μg/mL，按“2.1”项下分析条件进样1 μL，以蛇床子素的峰面积为纵坐标(Y)、蛇床子素对照品浓度为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程，记录色谱图。回归方程：Y=4 652 X-6 002，r=0.999 0。结果表明，蛇床子素在1.0～50 μg/mL范围内呈良好的线性关系，S/N=3时，测得蛇床子素的检测限为1.0 ng/mL。

2.5 精密度、重复性和稳定性试验 取20 μg/mL蛇床子素对照品溶液，连续进样5次，计算蛇床子素对照品峰面积的RSD为1.76%，表明该方法精密度良好。

取同一批样品(批号:130408)，共5份，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，进样测定，计算利夫康洗液中蛇床子素的含量。结果平均含量为10.2 μg/mL，RSD为2.12 %，表明该方法重复性良好。

取同一批样品(批号:130408)，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8 h进样测定，记录峰面积，计算蛇床子素对照品峰面积RSD为2.01 %。说明蛇床子在利夫康洗液溶液中12 h 内稳定。

2.6 加样回收率试验 精密量取10 mL已知含量的利夫康洗液 (含蛇床子素10.2 μg/mL) 5份，分别加入蛇床子素对照品(40 μg/mL) 0.5 mL，混匀，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备样品，并按“2.1”项下色谱条件进样，按外标法，以峰面积计算回收率，其平均回收率为97.26%，RSD为2.01%。见表1。

表1 蛇床子素加样回收率

2.7 样品的测定 取利夫康洗液适量，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备3份，按“2.1”项下色谱条件进样分析。用GC-MS-SIM法测定蛇床子素的含量。在利夫康洗液中，蛇床子素的含量分别为10.1、10.2、10.4 μg/mL，平均含量为10.23 μg/mL。

3 讨论

中药质量评价和控制是制约中药现代化发展的关键[16]。中药成分复杂，而中成药又多为中药复方组成，其组分虽然较多，但每一组分的含量较低，灵敏度低的分析方法难以达到要求。因此，可应用GC-MS的高灵敏度与高分离效能进行成药的分析[17]。

本研究首次采用GC-MS选择离子监测法测定利夫康洗液中蛇床子素的含量，从色谱图可以看出，该方法专一性强，相关系数和回收率均达到了含量测定的要求，而且检测限低(1.0 ng/mL)，是可以用来测定蛇床子素的较好的方法。

在供试品处理中，选用溶剂时，曾考虑应用乙酸乙酯和乙醚，但是乙醚容易挥发，重复性较差，因此选择乙酸乙酯。在处理样品时，将样品直接在水浴上蒸干，然后采用乙酸乙酯溶解，上清液进样分析，这样可以避免使用过多的有机溶剂来萃取利夫康洗液中的蛇床子素。

[1] 李鹏,陈琴华,朱军,等.高效液相色谱法测定利夫康洗液中蛇床子素的含量[J].医药导报,2011,30(6):785-786.

[2] 张建武,陈诗渝,林静,等.蛇床子提取液对离体蟾蜍坐骨神经动作电位的影响[J].四川生理科学杂志,2014,36(2):58-59.

[3] 陈宝进,颜娜芬.中药蛇床子临床应用概述[J].亚太传统医药,2014,10(10):51-52.

[4] 马远.蛇床子的成分、药理及临床应用研究[J].中国药物经济学,2014,9(2):234-235.

[5] 苏晓乾,杨建宏.蛇床子素提取工艺优化研究[J].天津药学,2009,21(6):3-4.

[6] 闫俊,宣伟东,卞俊.蛇床子素的研究进展[J].中国药业,2012,21(11):110-112.

[7] 罗玉鸿,高植明,梁逊莹,等.蛇床子素的止痒作用[J].中国药房,2014,25(19):1750-1753.

[8] 杨秀成.分光光度法测定中药蛇床子中总香豆素的研究[J].中国医疗前沿,2010,5(9):71-72.

[9] 赵韶华,韩桂茹,许红辉,等.荧光扫描法测定八子补肾胶囊中蛇床子素含量[J].中成药,2005,27(7):783-785.

[10]郑立卿,张丹参,薛贵平,等.薄层扫描法测定蛇床子提取液中蛇床子素的含量[J].河北北方学院学报(医学版),2008,9(2):8-10.

[11]苑振亭,程丽萍,郇瑜.高效液相色谱法测定复方蛇床子搽剂中蛇床子素的含量[J].中国药物与临床,2014,14(4):480-481.

[12]王巨存,谢宪斌,冯鑫,等.RP-HPLC法同时测定壮骨止痛颗粒中淫羊藿苷、延胡索乙素和蛇床子素的含量[J].药物分析杂志,2014,34(3):418-422.

[13]张晓霞,周卯星,张高勇,等.气相色谱法测定蛇床子提取物中蛇床子素的含量[J].时珍国医国药,2006,16(8):1384-1385.

[14]陈琴华,李鹏,朱军.气-质联用法测定鱼腥草注射液中甲基正壬酮的含量[J].中国医院药学杂志,2011,31(21):1768-1770.

[15]陈琴华,熊琳,李鹏,等.气相色谱-质谱法测定白芷中异欧前胡素的含量[J].医药导报,2014,33(4):487-489.

[16]张铁军.中药质量认识与质量评价[J].中草药,2011,42 (1):1-9.

[17]陈琴华,李鹏,彭林,等.气相色谱-质谱联用法在体内药物分析中的应用[J].中国医院药学杂志,2010,30(3):239-241.

Quantitative determination of osthole in lifukang lotion by GC-MS

CHEN Qin-hua,ZHU Jun*,HUANG Lin-jie,YU Fei

(Institute of Pharmaceutical Analysis and Drug Screening,Hubei University of Medicine,Shiyan 442008,China)

Objective To develop a rapid and sensitive GC-MS method for the determination of osthole in lifukang lotion.Methods GC-MS conditions: DB-5MS capillary column (30 m×0.32 mm×0.25 μm); column temperature program: 140 ℃ held 2 min,and then programmed to 280 ℃ at 10 ℃/min for 6 min; interface and inlet temperature: 280 ℃.The sample was evaporated and dissolved by acetic ether.Quantitative determination of analysis was performed by GC-MS.Results The linear range of osthole was 1.0～50 μg/mL (r=0.999 1).The recovery rate was 97.26%,RSDwas 2.01%,and the limit of quantitation was 1.0 ng/mL.Conclusion The method is convenient and rapid,with good sensibility and accuracy,it can be used to determine the content of osthole in lifukang lotion.

Lifukang lotion; Osthole; GC-MS

2014-07-02

湖北医药学院附属东风医院药物分析与筛选研究所，湖北 十堰 442008

十堰市科技局项目(2013st033、14Y55)；湖北省卫生和计划生育委员会计划项目(2013Z-B04)；湖北省2011协同创新中心基金(4)

10.14053/j.cnki.ppcr.201504015

*通信作者