超广谱β-内酰胺酶菌株研究及耐药性分析

李建芳

超广谱β-内酰胺酶菌株研究及耐药性分析

李建芳

目的 探讨β-内酰胺酶(ESBLs)分离率增高原因, 对ESBLs进行药敏分析及耐药率对临床抗感染治疗的影响。方法 超广谱β-内酰胺酶检测：药敏纸片头孢他啶/克拉维酸和头孢噻肟/克拉维酸分别与头孢他啶和头孢噻肟抑菌环直径相差≥5 mm,判断为阳性, 即为产超广谱β-内酰胺酶菌株。药敏试验:用DL-96细菌测定系统随机体外诊断试剂板测定药敏。结果 384株细菌中, 产β-内酰胺酶100株（26%）。分别产自肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌产β-内酰胺酶、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌和枸橼酸杆菌。亚胺培南和美罗培南敏感率100%, 头孢西丁敏感率100%, 全部产β-内酰胺酶细菌对碳青霉烯类、头霉烯类全部敏感, 对β-内酰胺类/酶抑制剂敏感率也较高。结论 开展ESBLs菌株的检测对指导临床抗感染治疗合理用药十分重要。

超广谱β-内酰胺酶；抗生素；耐药质粒；耐药菌；耐药率

随着广谱抗菌药物的应用, 尤其是第三代头孢菌素的广泛使用, 细菌耐药现象日趋严重, 产超广谱β-内酰胺酶菌株也愈来愈多, 给临床治疗带来强大压力。为分析其原因,了解本院ESBLs分布情况及耐药情况, 本院将近1年分离的384株阳性菌株进行ESBLs检测, 为配合临床治疗, 对药敏情况进行探讨, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 384株阳性菌来源于2013年1～12月本院门诊和病房患者, 以ICU病房患者居多。分离标本为痰液、尿液、分泌物, 对送检标本进行常规培养35℃孵育18～24 h和鉴定, 采用纸片扩散法检测ESBLs。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922, 肺炎克雷伯菌株ATCC700603。操作遵循《全国临床检验操作规程》。

1.2 药敏纸片及鉴定板 药敏纸片和M-H琼脂为北京天坛药物生物技术有限公司生产。头孢噻肟(CTX)30 μg, 头孢他啶(CAZ)30 μg, 头孢他啶/克拉维酸(30 μg/10 μg), 头孢噻肟/克拉维酸(30 μg/10 μg)。药敏鉴定板为珠海迪尔生物工程有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 超广谱β-内酰胺酶检测 将产ESBLs菌株按K-B法制备菌液和接种平皿, 采用头孢他啶/克拉维酸与头孢他啶, 头孢噻肟/克拉维酸与头孢噻肟药敏纸片, 经35℃孵育18～24 h观察结果, 头孢噻肟/克拉维酸和头孢他啶/克拉维酸分别与头孢噻肟和头孢他啶药敏纸片抑菌环直径相差≥5 mm, 判断为ESBLs阳性, 既为产超广谱β-内酰胺酶细菌, 同时用DL-96细菌测定系统随机体外诊断试剂板验证ESBLs。

1.3.2 药敏试验 运用珠海迪尔生物工程有限公司提供的DL-96细菌测定系统, 按照其操作方法用细菌测定系统随机体外诊断试剂板测定细菌药敏。

2 结果

2.1 384株细菌产ESBLs检测结果 384株细菌中, 产β-内酰胺酶100株, 占26%。其中176株肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶55株, 占31%；128株大肠埃希菌产β-内酰胺酶36株, 占28%；31株阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶3株, 占10%；40株铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶5株, 占13% ；9株枸橼酸杆菌产β-内酰胺酶1株, 占11%。

2.2 100株ESBLs细菌对18种抗生素的耐药情况, 见表1。

表1 100株ESBLs细菌对18种抗生素的耐药情况(n, %)

3 讨论

从结果中可以看出, ESBLs菌株检出率较高, 384株细菌中共检出产ESBLs菌株100株, 总检出率为26%, 这是由于广谱抗生素的广泛使用, 细菌耐药现象日益严峻, 这给临床治疗带来很大压力, 应引起临床医生重视, 说明合理使用抗生素至关重要。肺炎克雷伯菌检出率为31%, 所占比例最高, 大肠埃希菌次之为28% , 阴沟肠杆菌和铜绿假单胞菌及枸橼酸杆菌检出率分别为10%、13%、11%。整个检验中以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌分离率占主导地位, 由于耐药质粒的播散, 很少产生ESBLs的阴沟肠杆菌和枸橼酸杆菌也出现了超广谱β-内酰胺酶菌株, 说明ESBLs已不局限在肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌, 不断的向肠杆菌科其他菌种及肠杆菌科以外的异种菌间蔓延, 致使产超广谱β-内酰胺酶菌珠越来越多, 这种情况不容乐观。以上统计客观的反映了本院ESBLs的分布情况, 为本院抗感染治疗提供帮助。

ESBLs由质粒介导, 从TEM-1、TEM-2和SHV-1的1个或数个氨基酸突变而来, ESBLs的产生是由于大量使用抗生素尤其是第三代头孢菌素药物的使用, 在抗生素选择压力下, 一些菌株会产生ESBLs, 水解或灭活β-内酰胺类抗生素,造成对抗生素的耐药, 耐药基因为质粒介导尤其肺炎克雷伯菌多数含有SHV-12和 SHV-29两种酶, 这些产酶菌株可在同种或异种菌间接合、转化和传导而转移, 使敏感菌变成耐药菌, 引起交叉感染和耐药菌扩散。产生超广谱β-内酰胺酶, 无论体外药敏如何, 用青霉素、头孢菌素类和单酰胺类药物如氨曲南治疗均无效, 往往体外药敏试验不能很好的反映这种现象。从表1显示, ESBLs虽对头孢菌素有很高的耐药率, 仍有一定的敏感性, 这会误导临床用药。

ESBLs不仅对头孢菌类存在严重耐药, 对喹诺酮类、氨基糖苷类和磺胺类等也有不同程度的耐药, 产酶菌珠比非产酶菌珠耐药率高, 表1显示庆大霉素耐药率46%、阿米卡星耐药率39%、环丙沙星耐药率34%、左氧氟沙星耐药率29%、SMZ耐药率80%, 这是因携带ESBLs的质粒上可同时携带对氨基糖苷类和喹诺酮类等多种药物的耐药基因, 导致对这些常用药物较严重的交叉感染。从表1可见, 亚胺培南和美罗培南敏感率100%, 头孢西丁敏感率100%, 全部产β-内酰胺酶细菌对碳青霉烯类、头霉烯类全部敏感, 对β-内酰胺类/酶抑制剂敏感率也较高, 因此治疗由ESBLs引起的感染最有效的药物是碳青霉烯类、头霉烯类, 其次是β-内酰胺酶酶抑制剂复合药。

随着质粒介导的超广谱β-内酰胺酶发生率的不断增加,多重耐药不断出现,给临床治疗带来很大困难, 要避免耐药性的产生及蔓延,从根本上控制ESBLs的分离率, 除要合理使用抗生素外, 如情况允许可隔离患者, 防止耐药细菌扩散和传播。

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.11.128

2014-12-02］

464000 河南省信阳市第一人民医院检验科