RP-HPLC测定鼻康胶囊中欧前胡素的含量

王小龙，李华丽

(平顶山市食品药品检验所，河南 平顶山 467000)

RP-HPLC测定鼻康胶囊中欧前胡素的含量

王小龙，李华丽

(平顶山市食品药品检验所，河南 平顶山 467000)

目的：建立鼻康胶囊中欧前胡素的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法测定含量。色谱柱为Ultimate XB C18柱，流动相为甲醇-水(66∶34)，流速1.0 mL/min，检测波长300 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。结果：欧前胡素在3.64～36.40 mg/L范围内与峰面积成良好的线性，线性回归方程Y=1 399.32X-1 611.46 (r=0.999 9)；平均加样回收率为99.2%，RSD=0.82%(n=6)。结论：本法灵敏、准确、专属性高、重复性好，可作为鼻康胶囊中欧前胡素的含量测定方法。

鼻康胶囊/药效学；欧前胡素； 含量测定；反相高效液相色谱法

鼻康胶囊是经河南省食品药品监督管理局批准的纯中药复方医院制剂(批件号2004Z00940)，由白芷、防风、辛夷、桔梗、苍耳子、板蓝根、芦根、甘草等药物组成，具有清热解毒、疏风通窍的功效，用于急慢性鼻炎、副鼻窦炎。鼻康胶囊的原质量标准中没有含量测定项。白芷为方中君药，具有疏风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功效，欧前胡素是白芷中主要活性成分[1]。为更好地控制药品质量，我们参考文献方法[2-3]采用反相高效液相法对鼻康胶囊中欧前胡素的含量进行了测定。

1 药品、试剂与仪器

鼻康胶囊，每粒0.3g, 自制，批号20130710, 20130713，20130716。欧前胡素对照品，购于中国药品生物制品检定所，批号100826-201211；水为乐百氏纯净水；甲醇为色谱纯；其余试剂为分析纯。 LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AVP检测器，CS-Light色谱工作站，日本岛津公司产品；AG285电子分析天平，梅特格托利多仪器 (上海有限公司)产品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Ultimate XB C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(66∶34)，流速1.0 mL/min，检测波长300 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。理论踏板数按欧前胡素计算应不低于4 000；欧前胡素与样品中的其他成分峰的分离度大于2.0。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取欧前胡素对照品9.1 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(含欧前胡素182 mg/L)；再精密量取贮备液3 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液(含欧前胡素21.84 mg/L)。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物，研细，取约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率300 W，频率50 kHz)45 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备

除白芷以外，其余各药按处方比例依工艺制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备缺白芷阴性对照品溶液。

2.3 专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，依法进行测试，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的保留时间，可检出相对应的色谱峰，缺白芷阴性对照品溶液在与欧前胡素对照品相同的保留时间处无相应的色谱峰检出，方中除白芷外的其他药物对测定无干扰，见图1。

A.对照品；B.供试品；C.缺白芷阴性对照品图1 欧前胡素含量测定的HPLC色谱图

2.4 线性关系考察

精密吸取上述对照品贮备液1，2，3，4，5 mL，分别置50，50，50，25，25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量分数分别为3.64，7.28，10.92，29.12，36.40 mg/L的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液各10 μL,注入色谱仪，按2.1项下检测条件检测，记录色谱图峰面积。以吸收峰面积积分值(Y)为纵坐标，欧前胡素进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程Y=1 399.32X-1 611.46,r=0.999 9(n=5)。结果表明：欧前胡素在3.64～36.40 μg范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取对照品溶液，重复进样6次，每次10 μL，测定其峰面积。结果：欧前胡素峰面积的RSD值为0.31%(n=6)。结果表明：精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一样品供试品溶液，进样10μL，分别在0，3，6，9，12 h进样，记录峰面积。结果：欧前胡素峰面积的RSD值为1.3%。结果表明：供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同一批样品(20130710)，按2.2.2项下方法制备6份供试品溶液，测得欧前胡素的峰面积，计算含量。结果：欧前胡素含量的RSD值为1.23%。结果表明：此法重复性较好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知欧前胡素含量的样品(批号20130713)约3 g,共取6份，分别加入欧前胡素对照品质量浓度为21.84 mg/L的甲醇溶液5.0 mL，以下按供试品制备方法制备供试品溶液。并按上述色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表1。

表1 欧前胡素加样回收率试验

2.9 样品测定

取3个批次的样品，按2.2.2项下方法制备，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定欧前胡素含量。3批样品(批号20130710, 2013713，2013716)中欧前胡素的含量分别为0.056 7，0.055 9，0.056 1 mg/粒。

3 讨 论

3.1 检测波长的选择

取欧前胡素对照品溶液进行紫外扫描(200～400 nm)，对检测波长进行了考察，结果在220，260，300 nm处均有强吸收，经实验，供试品色谱中欧前胡素峰在300 nm附近无干扰峰，故选择检测波长为300 nm。

3.2 流动相的选择

在实验过程中曾经选用多个流动相，如不同比例的甲醇-水，乙腈-水，甲醇-水-乙酸胺等，结果以本文所选流动相甲醇-水(66∶34)的峰形及分离效果最好，可使样品中欧前胡素与相邻的色谱峰分离，分离度大于2.0。

3.3 提取溶剂及时间的选择

在实验中曾采用甲醇、乙醇和三氯甲烷超声(功率300 W，频率50 kHz)15，30，45，60 min提取；300 mL/L乙醇加热回流30,60,90 min提取，制备供试品溶液，分别测定其含量。结果表明:经甲醇提取的样品含量高于300 mL/L 乙醇，故选择甲醇为提取溶剂。有关时间选择：实验中发现，当超声45 min时，欧前胡素的含量基本不再增加，说明欧前胡素此时已经基本提取完全，因此将样品提取时间确定为45 min。

本实验采用RP-HPLC法测定鼻康胶囊中欧前胡素的含量，具有灵敏度高、专属性高、重复性好、分离度好的优点，可作为鼻康胶囊含量的质量评价依据。

[1]阴建，郭力弓.中药现代研究与临床应用：一卷[M].北京：学苑出版社，1995:257.

[2]中国药典委员会. 中华人民共和国药典:一部[M]. 北京：中国医药科技出版社, 2010: 97，1127.

[3]顾武军，陈宗良，吴海霞.HPLC法测定肿痛安胶囊中欧前胡素的含量[J].中国药师，2012，15(10)：1511-1513.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)08-0064-03 ·药学研究·

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B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.08.31

2015-04-14；

2015-05-15