红景天苷对大鼠急性心肌缺血的保护作用*

贾 真

(南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473000)

红景天苷对大鼠急性心肌缺血的保护作用*

贾 真

(南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473000)

目的：研究红景天苷对大鼠急性心肌缺血保护作用，初步探讨其机制。方法：将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、红景天苷组,每组16只。红景天苷组每天自大鼠尾静脉注射红景天苷10 μg/(g·d)，假手术组和对照组术大鼠尾静脉注射等量生理盐水，连续腹腔注射7 d。末次注射30 min后制备心肌缺血再灌注模型(缺血30 min,再灌注1 h)。大鼠腹主动脉取血，制备血清，检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量；TUNEL法检测各组大鼠缺血心肌细胞凋亡指数；免疫组化法检测凋亡蛋白Bcl-2 、Bax表达和Bcl-2/Bax比值。结果： 与模型对照组对比，红景天苷组血清中CK-MB活性及MDA含量降低， SOD活性升高，差别有统计学意义 (P<0.05)；心肌细胞凋亡指数、Bax的表达降低，凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-2/Bax上升，差别有统计学意义(P<0.05)。结论： 红景天苷能通过减少心肌细胞凋亡及抗脂质过氧化等机制，保护大鼠急性缺血心肌。

红景天苷/药效学；急性心肌缺血/药效作用；心肌细胞凋亡/药物作用；脂质过氧化/分析；大鼠；动物模型

红景天苷是藏药红景天的提取物，具有良好的抗缺氧、抗肿瘤、抗衰老作用[1]。红景天苷在心血管方面作用诸多，关于其对在体大鼠心肌缺血再灌注氧化损伤的影响，国内外文献少见报道。本研究通过建立大鼠心肌缺血再灌注模型，以氧化应激、心肌酶、心肌细胞凋亡为观察指标，研究红景天苷对心肌缺血再灌注损伤干预机制，为临床缺血性心脏病干预开辟新的途径。

1 材料与方法

1.1 动 物

48只SD大鼠，6～7周龄，雌雄各半，体质量225～260 g，购自河南省实验动物中心，动物合格证号SCXC(豫)2014-0063。

1.2 药品、试剂与仪器

注射液红景天苷，纯度>90%，购自成都恒基医药科技公司，批号20140361。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA) 和 肌酸激酶同工酶(CK-MB)试剂盒，购自南京碧波生物科技有限公司，批号依次20140316，20140403，20140506； TUNEL细胞凋亡检测试剂盒、Bcl-2、Bax(凋亡蛋白)试剂盒，购自北京宝赛生物技术有限公司，批号20140401，20140501。 BL-420E+生物机能实验系统,成都泰盟科技有限公司产品；BF52-OLYMPUS荧光显微镜，日本OLYMPUS公司产品；7020全自动生化分析仪， 日立公司产品。

1.3 动物分组与模型的建立

将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、红景天苷组，每组16只。术前红景天苷组每天自大鼠尾静脉注射红景天苷10 μg/(g·d)，假手术组和模型对照组注射等量生理盐水,连续腹腔注射7 d。末次注射30 min后制备心肌缺血再灌注模型[2]。先称量体质量，以30 g/L戊巴比妥钠(40 μg/g)行腹腔注射麻醉后仰卧位固定；常规气管插管及开胸，完全暴露心脏；假手术组冠状动脉左前降支只穿线不结扎，其余2组以5-0号丝线结扎冠状动脉左前降支，心肌颜色先变白而后变紫绀为结扎成功；结扎30 min后松开扎线，再灌注1 h；采集腹主动脉血3 mL；处死大鼠，迅速取出心脏。

1.4 检测指标

1.4.1 CK-MB、SOD活性及MDA含量

以 3 000 r/min 离心血液10 min，取血清，用7020全自动生化分析仪检测CK-MB、SOD活性及MDA含量

1.4.2 心肌细胞凋亡指数、心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax和Bcl-2/Bax

取大鼠缺血心肌，常规固定、包埋和制片。

采用 TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数：操作步骤按照TUNEL试剂盒说明书进行。DAB显色，荧光显微镜显示未凋亡心肌细胞发蓝色荧光，凋亡细胞核发绿色荧光。在200倍视野下，选择缺血最显著区5个无重叠视野，计数凋亡细胞，计算心肌细胞凋亡指数(AI)。AI=凋亡阳性细胞/总细胞数×100%。

采用免疫组化法检测心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax和Bcl-2/Bax，按试剂盒说明书操作。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 各组CK-MB、SOD活性及MDA含量对比

与假手术组对比，模型对照组大鼠血清CK-MB、MDA含量升高，SOD活性降低，差别有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组对比，红景天苷组血清CK-MB活性及MDA含量降低， SOD活性升高，差别有统计学意义(P<0.05)。见表1。

组 别SOD/(U·mL-1)MDA/(μmol·L-1)CK-MB/(U·mL-1)假手术组145.35±7.962.27±0.780.75±0.28模型对照组86.21±3.76*7.61±1.36*6.29±1.18*红景天苷组119.19±6.51#3.13±1.05#2.7±1.25#

注：与假手术组对比，*P<0.05；与模型对照组对比，#P<0.05。

2.2 各组大鼠AI、Bcl-2、Bax和Bcl-2/Bax对比

假手术组可见少量散在绿色荧光细胞核，模型对照组绿色荧光细胞数显著增多，红景天苷组绿色荧光细胞核较模型对照组减少。提示：红景天苷干预后大鼠心肌凋亡细胞明显减少。与假手术组对比，模型对照组大鼠AI升高，差别有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组对比，红景天苷组AI下降，差别有统计学意义(P<0.05)。与假手术组对比，模型对照组Bcl-2表达下降，Bax表达上升，Bcl-2/Bax比值下降，差别有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组对比，红景天苷组Bcl-2表达上升， Bax表达下降，Bcl-2/Bax比值上升，差别有统计学意义(P<0.05)。见表2。

组 别AI/%Bcl-2/%Bax/%Bcl-2/Bax假手术组2.45±0.951.57±0.020.46±0.023.42±0.02模型对照组20.15±1.17*0.65±0.04*0.94±0.05*0.68±0.05*红景天苷组15.66±2.05#0.88±0.03#0.77±0.03#1.22±0.04#

注：与假手术组对比，*P<0.05；与模型对照组对比，#P<0.05。

3 讨 论

缺血再灌注导致损伤的机制较为复杂。国内外学者[3-5]认为：这种病理过程与炎症反应、钙超载等有关。除此之外，氧化应激损伤在缺血再灌注过程中作用至关重要。心肌缺血后再灌注时可产生大量氧自由基，而内源性氧自由基清除酶显著减少，就会出现脂质过氧化反应，导致细胞出现损伤，随之使MDA剧烈释放，使血清中含量增加；因此，MDA可以体现超氧化反应的程度，也是对细胞受损程度的一种间接性体现。心肌细胞膜整体性遭到损坏的时候，内源性CK-MB即放出进入血液内，CK-MB活性可以做判别心肌细胞遭受损坏水平的敏感参数。本实验结果显示：与模型对照组对比，红景天苷组血清SOD活性升高，血清MDA、CK-MB活性降低，差别有统计学意义(P<0.05)。提示红景天苷可清除氧自由基，抑制脂质过氧化反应。缺血再灌注后心肌组织也受到损伤，其损伤形式是细胞凋亡。本实验结果显示：与模型对照组对比，红景天苷组心肌细胞凋亡指数降低，凋亡蛋白Bcl-2表达升高， Bax表达降低，Bcl-2/Bax比值上升，差别有统计学意义(P<0.05)。提示红景天苷能抑制急性心肌缺血导致的大鼠心肌细胞凋亡。本实验研究结果也与谭红玲等[6]的研究一致。

[1]滕静如，熊佳鹏，肖成，等.红景天的现代药理学进展[J].中国中医基础杂志，2006,12(4)：319.

[2]徐叔云,卞如濂,陈修,等.药理实验学方法学[M]. 3版.北京：人民卫生出版社，2002:567.

[3]Yang J,Chen L,Yang J,et al.MicroRNA-22 targeting CBP protectsagainst myocardial ischemia-reperfusion injury through anti-apoptosis in rats[J].Mol Biol Rep,2014,41(1):555-561.

[4]Skovsted GF,Kruse LS,Larsen R, et al. Heart ischaemia-reperfusion induces local up-regulation of vasoconstrictor endothel in ETB receptors in rat coronary arteries downstream of occlusion[J].Br J Pharmacol,2014,171(11):2726-2738

[5]高元峰，陈兴，陈里新，等.红景天苷对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤的保护作用及机制研究[J].中南药学,2010,8(2):115-118.

[6]谭洪玲，肖成荣, 马增春，等.红景天苷对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用[J]. 解放军药学学报，2010，26(3):194-197.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)08-0057-03 ·实验研究·

R542.2

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.08.28

南阳市科技攻关项目(2012GG066)

2015-04-21；

2015-06-30