HPLC法测定复方台乌片中乌药醚内酯含量

宋志钊等

【摘 要】 目的：建立复方台乌片中乌药醚内酯的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以Appollo-C18色谱柱为分离柱，以乙腈-水（48∶52）为流动相，检测波长为235nm，柱温为室温。结果：乌药醚内酯在0.102～1.224μg范围内，峰面积与其进样量呈良好线性关系（r=0.9993），平均回收率为99.6%，RSD为1.71%（n=6）。结论：该方法简便、准确、重复性好，可作为控制本品质量标准的指标。

【关键词】 复方台乌片；乌药醚内酯；HPLC

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）07-0016-02

复方台乌片是我院根据广西地方民族经验方，经筛选后进行研制的中药制剂，由九里香、乌药、两面针等中药组成，具有行气止痛、制酸敛溃之功效，用于慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡。为了控制其质量，研究复方台乌片中乌药指标成分乌药醚内酯的含量测定方法，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津LC-20ATVP高效液相色谱仪；SPD-20AVP紫外检测仪；威玛龙色谱工作站；Appollo-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；KQ-100VDB双频数控超声清洗仪。

1.2 材料 乌药醚内酯对照品（批号：111562-200603，中国药品生物制品检定所）；复方台乌片（批号为：090609、090715、090806）由本院制剂室提供；色谱纯乙腈（批号：LOT084169，费舍尔公司）；分析纯甲醇（批号：20090723，广东光华科技股份有限公司）；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Appollo-C18（4.6×250mm，5μm）；流动相为乙腈-水（48∶52）；流速为1.0ml/min；检测波长为235nm；进样量为10μl；柱温为室温。理论塔板数按乌药醚内酯计算应不低于3000。色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取乌药醚内酯对照品10.2mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成408μg/ml的乌药醚内酯对照品溶液，备用。精密吸取上述对照品溶液0.5ml，置10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得20.4μg/ml的乌药醚内酯对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品20片，研细，混匀，取细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚50ml，提取4h，滤过，用适量乙醚冲洗容器及滤渣，合并提取液，回收溶剂，残渣用甲醇分次溶解，转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 标准曲线及线性范围考察 分别精密吸取上述408μg/ml乌药醚内酯对照品溶液0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、3.0ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10ul，测定，计算，得回归方程为：Y=1162341X-21662（r=0.9993）。结果表明：乌药醚内酯在0.102～1.224μg之间的线性关系良好。

2.5 精密度试验 分别吸取同一供试品溶液（批号：090609），连续进样6次，依次测定，测得供试品RSD为0.92%。说明精密度较好。

2.6 重复性试验 取同一批号（批号090609）样品，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样，测定，结果测得样品中乌药醚内酯含量平均值为0.414mg/片，RSD=0.33%（n=6），说明试验的重复性较好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液每隔4h进样一次，连续5次（即0、4、8、12、16h）测定，结果供试品溶液中乌药醚内酯含量的RSD为1.32%，表明供试品溶液在16h内保持稳定。

2.8 加样回收试验 取已测知含量（0.414mg/片，批号：090609）的供试品0.25g，精密称定，精密加入408μg/ml乌药醚内酯对照品溶液0.9ml，挥干溶剂，按供试液制备项下的方法制备。结果乌药醚内酯平均回收率为99.6%，RSD为1.71%（n=6），结果见表1。

2.9 样品测定 按供试液的制备及检测方法，测定3批复方台乌片中乌药醚内酯含量分别为0.412、0.285、0.330mg/片，结果见图1。

3 讨论

以乙腈-水为流动相，考察多个比例，最后确定乙腈-水（48∶52）的比例较为适合。采用紫外分光光度计扫描乌药醚内酯对照品溶液，结果乌药醚内酯在235nm处有最大吸收，故最终确定检测波长为235nm。

实验过程中曾经考察对样品采用超声提取、索式提取、加热回流三种不同的提取方法。结果发现超声提取、加热回流提取提取的乌药醚内酯提出率比较低，索式提取提出较完全。所以拟订索式提取作为提取方法。对比甲醇、乙醇、乙醚加甲醇三种不同提取溶剂，结果用乙醚先除杂，挥干乙醚提取液后再用甲醇溶解提取所得乌药醚内酯含量最高，且杂质较少，故采用乙醚加甲醇作为提取溶剂。同时还考察了不同的提取时间对提出率的影响，结果发现2h提出率较低，4、6h几乎一样，故采用了4h的提取时间。

参考文献

（收稿日期：2015.01.07）