HPLC法测定维吾尔药大花罗布麻叶中异槲皮苷的含量

穆建，佟瑞敏，苏来曼·哈力克(新疆医科大学药学院，乌鲁木齐8300;新疆维吾尔自治区食品药品检验所，乌鲁木齐830004)

HPLC法测定维吾尔药大花罗布麻叶中异槲皮苷的含量

穆建1，2，佟瑞敏2，苏来曼·哈力克2
(1新疆医科大学药学院，乌鲁木齐830011;2新疆维吾尔自治区食品药品检验所，乌鲁木齐830004)

目的建立高效液相色谱法测定大花罗布麻叶中异槲皮苷含量的方法。方法采用高效液相色谱法对样品中异槲皮苷进行定量分析，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-乙腈-0.3%磷酸(11∶10∶79)为流动相，柱温为35℃，检测波长为354 nm。结果异槲皮苷进样量在浓度为0.020 2～0.202 0 mg/mL(r=0.999 9)范围内与其峰面积呈良好线性关系。平均回收率为104.45%(n=6)，RSD为0.45%。10批不同产地样品中异槲皮苷的含量为0.320%～0.392%，平均含量为0.37%。结论HPLC色谱法对大花罗布麻叶中异槲皮苷进行测定，方法简便，精确，重现性好，为有效制订质量标准提供科学依据。

维吾尔药;大花罗布麻叶;异槲皮苷;高效液相色谱法

大花罗布麻叶为维吾尔医习用药材，维语名“Ak Qige Yopurmiki”，即“阿克其格尤普马克”，也称“Lopnur Kanderi Yopurmiki”，系夹竹桃科植物白麻属大花罗布麻叶［Poacynum hendersonii(Hook. f)Woodson］的干燥叶片，主产于新疆库尔勒、阿克苏等地，收载于《新疆维吾尔自治区药材标准2010年版(第一册)》［1］。有关研究表明，黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突变、抗肿瘤和免疫调节等功能。通过药理研究表明，大花罗布麻叶所含的丰富的黄酮类成分具有延缓衰老、降压、降脂、抗感冒、镇静安神等功效［2-5］。

有关研究报道大花罗布麻叶化学成分中含有异槲皮苷、槲皮素、金丝桃苷、槲皮素3-O-槐糖苷、芦丁、三叶豆苷、山奈素、紫云英苷、北美圣草素7-O-葡萄糖苷、异鼠李素3-O-葡萄糖苷等［6-9］。大花罗布麻叶中芦丁、金丝桃苷、槲皮素以及罗布麻甲素的含量，目前，已有相关研究采用高效液相色谱法(HPLC法)测定［10-14］。本研究采用HPLC法对不同产地的10批次大花罗布麻叶中黄酮类成分异槲皮苷含量进行测定，方法简便、精确，重现性好，为建立质量标准提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器高效液相色谱仪(日本岛津，LC-20AT)，二极管阵列检测器(日本岛津，SPD-20A)，超纯水仪(台湾艾柯，KLZ-UP)，超声仪(上海科导，SK7210LHC)，分析天平(德国赛多利斯，CPA225D)。

1.2 试剂异槲皮苷对照品(含量:≥98.0%;批号:MUST-10021901)购自成都曼斯特生物制品有限公司。甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，乙醇等试剂均为分析纯。

1.3 样品不同产地大花罗布麻叶样品10批次，分别为20130706(新疆库尔勒)、20140308(新疆尉犁)、20130616(新疆库尔勒)、20131216(新疆尉犁)、20131020(新疆尉犁)、20140320(新疆库尔勒)、20130704(新疆阿勒泰)、20140416(新疆尉犁)、20140512(新疆库尔勒)、20130820(新疆库尔勒)，经新疆维吾尔自治区食品药品检验所苏来曼·哈力克主任药师鉴定均为夹竹桃科植物大花罗布麻［Poacynum hendersonii(Hook.f)Woodson］的干燥叶。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备精密称取异槲皮苷对照品适量，加70%乙醇制成每1 mL含0.121 2 mg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备取本品粉末(过3号筛)约1 g，精密称定，置150 mL具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，密塞，摇匀，称定重量，加热回流1 h后，放冷再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(10∶11∶79)为流动相，柱温为35℃，检测波长为354 nm;理论塔板数以异槲皮苷计应不低于5 000，样品色谱图中异槲皮苷的分离度＞1.5，见图1。

图1 大花罗布麻叶HPLC色谱图

2.4 线性关系考察精密称定异槲皮苷对照品适量，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成异槲皮苷的对照品贮备溶液。精密吸取不同体积的对照品贮备溶液，稀释成不同浓度的系列溶液:0.020 2、0.040 4、0.080 8、0.121 2、0.161 6、0.202 0 mg/mL的对照品溶液，各进样10μL，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品的浓度(Y)对峰面积(X)进行线性回归，得回归方程:Y=39 580X－31 915，r=0.999 9，结果表明异槲皮苷在0.020 2～0.202 0 mg/mL范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验精密称定异槲皮苷对照品适量，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含异槲皮苷0.121 2 mg/mL的对照品溶液，在24 h内重复进样6次，测定异槲皮苷峰面积。结果峰面积的RSD为0.19%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验取同一样品(批号:20140512)，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液。分别在0、5、10、15、20、25 h进样10μL，测定异槲皮苷的峰面积，结果峰面积的RSD为0.59%，表明供试品溶液在25 h内稳定。

2.7 重现性试验取同一样品(批号:20140512)，按照“2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，测定异槲皮苷峰面积，结果峰面积的RSD为0.98%，并计算异槲皮苷的含量，其含量为0.356%、0.356%、0.364%、0.359%、0.359%、0.358%，平均值为0.36%，RSD=0.82%(n=6)，表明方法重现性良好。

2.8 加样回收率试验取异槲皮苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇溶解，制成1.812 mg/mL的溶液。精密称定同一样品(批号:20140512)粉末(过3号筛)0.5 g，称取6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入1 mL对照品溶液，再精密加入70%乙醇24 m L，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。照“2.3”项下色谱法测定，计算加样回收率，结果异槲皮苷平均回收率为104.35%，RSD为0.49%(n=6)，具良好的回收率，见表1。

表1 异槲皮苷加样回收率结果(n=6)

2.9 样品含量测定取不同产地的10批样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液。按“2.3”项下色谱条件测定样品异槲皮苷的峰面积，计算样品中异槲皮苷的含量。结果表明10批大花罗布麻叶异槲皮苷含量较为接近，10批样品异槲皮苷含量为0.320%～0.392%，平均含量为0.37%，见表2。

表2 10批大花罗布麻叶药材异槲皮苷含量测定结果

3 结论

本实验尝试利用多种流动相系统［甲醇-0.2%磷酸(14∶86)、乙腈-0.2%磷酸(15∶85)、甲醇-乙腈-0.3%磷酸(11∶12∶77)］、恒比例和梯度洗脱及不同色谱柱等条件对样品中异槲皮苷进行分离检测，综合考虑分离度、最大吸收波长、理论塔板数、拖尾因子以及单针进样的时间等因素，最终选择了以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(11∶10∶79)恒比例为流动相、柱温为35℃。检测波长为354 nm作为色谱条件，并将大花罗布麻叶中含量较高、对照品容易分离纯化的异槲皮苷作为含量控制指标，对大花罗布麻叶药材的质量进行量化。

供试品溶液制备使用了不同提取溶剂、不同提取条件(超声提取、加热回流提取)、确定采用乙醇及加热回流提取方法后，分别采用不同提取时间(10、30、60 min)、不同提取料液比(10、25、50 mL)以及不同浓度的乙醇(50%、70%、90%)进行了样品提取方法考察，结果以加入25mL70%乙醇为溶剂，加热回流提取60 min效果最佳。

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Determ ination of isoquercitrin in leaves of Pocvnum hendersonii(Hook.f.) W oodson of Uyghur crude drug by HPLC

MU Jian1，2，TONG Ruim in2，Suleyman Halik2
(1College of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi830011，China;2Xinjiang Uyghur Autonomus Region Institution for Food and Drug Control，Urumqi 830004，China)

Ob jective To establish a method for the determination of isoquercitrin in leaves of Pocvnum hendersonii(Hook.f.)Woodson by HPLC.Methods HPLCmethod was adopted for a quantitative analysis of isoquercitrin.Itwas carried out on C18column，with themobile phase ofmethnal-acetonitrile-0.3%phosphoric acid water(11∶10∶79)，the flow rate of 1.00m l/min，the column temperature of 35℃and thewavelength for detection of354 nm.Results Therewere good linear relationships between the peak area and concentration at the range of 0.020 2～0.202 mg/mL for isoquercitrin(r=0.999 9).The average recovery rate of isoquercitrin was 104.45% (n=6)，with RSD of 0.45%.The average content of ten different samples was 0.37%.Conclusion HPLC method to determine the isoquercitrin in leaves of Pocvnum hendersonii(Hook.f.)Woodson was proved to be simple，accurate and reproducible，which can provide scientific basis for quality control of leaves of Pocvnum hendersonii(Hook.f.)Woodson.

Uyghur crude drug;leaves of［Pocvnum hendersonii(Hook.f.)Woodson］;isoquercitrin;HPLC

R914

A

1009-5551(2015)06-0718-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.06.014

2014-11-02］

(本文编辑施洋)

国家药典委员会《中国药典2015年版》科研基金(2013-M43)

穆建(1982-)，男，在读博士，实验师，研究方向:新疆特色药物的研究与开发。

苏来曼·哈力克，男(维吾尔族)，本科，主任药师，硕士生导师，研究方向:维吾尔药质量标准研究与评价，E-mail:suleyman@sina.cn。