丹参多酚酸盐联合聚维酮碘预防大鼠术后肠粘连

刘国涛陈 巧金丽明张 勤

丹参多酚酸盐联合聚维酮碘预防大鼠术后肠粘连

刘国涛1陈 巧1金丽明1张 勤2

目的 观察丹参多酚酸盐联合聚维酮碘对大鼠术后肠粘连的影响，探讨其可能作用机制。方法 选用SD雄性大鼠50只，随机分为对照组、模型组、丹参多酚酸盐组、聚维酮碘组（PVP-I组）及丹参多酚酸盐联合PVP-I组（联合组），每组10只。除对照组外，其余各组均制作肠粘连模型。对照组和模型组每天腹腔注射5%葡萄糖溶液；丹参多酚酸盐组、PVP-I组和联合组每天分别腹腔注射丹参多酚酸盐、PVP-I和二者联合，连续注射8天。大鼠于术后第7天开腹，肉眼观察各组大鼠术后粘连分级情况；酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠血清和粘连组织白细胞介素-1β（IL-1β）、转化生长因子-β1（TGF-β1）水平。结果 丹参多酚酸盐组及联合组肠粘连程度明显低于模型组（P＜0.05）；丹参多酚酸盐组、PVP-I组及联合组血清和粘连组织IL-1β表达水平均显著降低于模型组[（64.82±10.55）pg/mL、（70.93±16.06）pg/mL、（62.37±3.32）pg/mL vs（75.75±6.67）pg/mL，（178.90± 17.28）pg/mL、（190.76±34.16）pg/mL、（168.40±25.14）pg/mL vs（220.78±18.31）pg/mL，P＜0.05或P＜0.01）。丹参多酚酸盐组、PVP-I组及联合组血清和粘连组织TGF-β1表达水平均显著降低于模型组[（36.77±5.25）pg/mL、（42.67±3.40）pg/mL、（21.90±1.15）pg/mL vs（54.93±4.75）pg/mL，（639.62± 118.31）pg/mL、（645.32±56.95）pg/mL、（609.87±64.88）pg/mL vs（759.87±178.42）pg/mL，P＜0.05或P＜0.01）。结论 丹参多酚酸盐、PVP-I及二者联合均能降低大鼠术后肠粘连程度，这可能与其降低血清和粘连组织中IL-1β和TGF-β1表达水平有关。

大鼠；肠粘连；丹参多酚酸盐；聚维酮碘；白细胞介素-1β；转化生长因子-β1

肠粘连是腹部手术后最常见的并发症之一，文献报道可高达60%～70%[1]，术后肠粘连已成为导致肠梗阻的首要原因[2]。目前，仍然没有令人满意药物或方法预防术后肠粘连。丹参多酚酸盐是活血化瘀中药丹参主要有效活性成分之一；聚维酮碘（PVP-I）是一种消毒防腐的碘状水溶液，是1-乙烯基-2吡咯烷酮均聚物与碘的复合物，两者在防治肠粘连方面已有报道[3-4]。本实验通过观察丹参多酚酸盐联合PVP-I对大鼠术后肠粘连的预防作用及对血清和粘连组织中白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）含量的影响，探讨其可能作用机制。

1 实验材料

1.1 动 物 健康清洁级SD雄性大鼠50只，体质量（220±50）g。由浙江中医药大学实验动物中心提供。合格证号：SCXK（沪）2008-0016，购自上海山西普尔-必凯实验动物有限公司。适应性饲养1周。

1.2 试 剂 注射用丹参多酚酸盐由上海绿谷制药股份有限公司提供（批号Z20050249）。PVP-I溶液由杭州民生药业集团有限公司生产（批号51003022）。IL-1β、TGF-β1酶联免疫试剂盒、抗原修复液、二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒：均购于南京奥多福尼生物科技有限公司（批号20111124）。

2 实验方法

2.1 分 组 50只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、丹参多酚酸盐组、PVP-I组及联合组，每组10只。

2.2 动物模型制备 除正常对照组外，其余均制作成肠粘连模型。术前12h禁食不禁水，称重，以3%戊巴比妥钠按30mg/kg腹腔注射麻醉。腹部剃毛，用

5%PVP-I和75%乙醇分别消毒，在无菌操作下取下腹部正中切口约2cm，开腹后提出盲肠，置于无菌洞巾上约5min，充分使浆膜干燥。以解剖刀轻刮整个盲肠浆膜面10遍，形成约1.0cm×1.0cm大小损伤面。再滴2滴无水乙醇于创面上，夹住盲肠系膜动脉约2min，盲肠回纳入腹腔原位，翻转右侧腹壁，在距切口旁约1cm处用解剖刀轻刮右侧腹壁，形成约1.0cm×1.0cm大小的损伤面。将两损伤面以5～0号医用缝线固定，分两层关闭腹腔。对照组开腹后提出盲析。计量资料用（±s）表示，多个样本均数比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）：若方差齐性，则采用LSD法；若方差不齐,则采用Tamhane，sT2法。计数资料的多个样本均数比较采用非参数法（Nonparametric Tests-2 Independent Samples），以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 大鼠肠粘连情况 与对照组比较，模型组动物均发生肠粘连（P＜0.01），且粘连程度较高。与模型组比较，丹参多酚酸盐组、联合组的肠粘连程度明显减轻（P＜0.05）；但PVP-I组与模型组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

3.2 血清IL-1β 模型组明显高于对照组（P＜0.05）；与模型组比较，丹参多酚酸盐组及联合组血清IL-1β含量均降低（P＜0.05或P＜0.01），见表2。

3.3 血清TGF-β1 模型组明显高于对照组（P＜0.01）；与模型组比较，丹参多酚酸盐组、PVP-I组及联合组血清IL-1β含量均降低（P＜0.05或P＜0.01），见表2。肠，翻转右侧腹壁，将盲肠与腹壁以5～0号医用缝线固定回纳入腹腔，分两层关腹。术后各组动物单笼饲养。

2.3 给 药 对照组和模型组腹腔内注射5%葡萄糖注射液4mL/kg；PVP-I组腹腔注射0.625%PVP-I溶液4mL/kg，丹参组腹腔注射丹参多酚酸盐溶液10.9mg/kg，联合组分别注射PVP-I及丹参多酚酸盐溶液。从手术当日起连续8天，每天1次。

2.4 观察指标及检测方法 于术后第7天以3%戊巴比妥钠按30mg/kg腹腔注射麻醉,做倒“U”形切口打开腹腔。参照Nair分级标准进行粘连等级评分[5]：0级，无粘连；Ⅰ级，仅一条粘连带；Ⅱ级，两条粘连带；Ⅲ级，多于两条粘连带而内脏未直接粘连到腹壁；Ⅳ级，不管有多少粘连带，内脏直接粘连到腹壁。同时于下腔静脉取血，以4000r/min离心20min，分离血清，置于超低温冰箱中保存，采用酶联免疫吸附法测定血清IL-1β和TGF-β1含量；于粘连最严重处取粘连组织，采用酶联免疫吸附测定粘连组织IL-1β及TGF-β1表达。

2.5 统计学方法 应用SPSS15.0软件进行统计分

表1 各组大鼠肠粘连肉眼分级（只）

表2 各组大鼠血清IL-1β和TGF-β1表达水平（pg/mL，±s）

表2 各组大鼠血清IL-1β和TGF-β1表达水平（pg/mL，±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

组别对照组模型组丹参多酚酸盐组PVP-I组联合组只数10 10 10 10 10 IL-1β 62.45±7.94 75.75±6.67* 64.82±10.55△70.93±16.06 62.37±3.32△△TGF-β1 16.51±2.68 54.93±4.75** 36.77±5.25△42.67±3.40 21.90±1.15△△

3.4 粘连组织IL-1β 模型组明显高于对照组（P＜0.01）；与模型组比较，丹参多酚酸盐组、PVP-I组及联合组血清IL-1β含量均降低（P＜0.05或P＜0.01），见表3。

3.5 粘连组织TGF-β1 模型组明显高于对照组（P＜0.01）；与模型组比较，丹参多酚酸盐组、PVP-I组及联合组血清TGF-β1含量均降低（P＜0.05或P＜0.01）；见表3。

表3 各组大鼠粘连组织IL-1β和TGF-β1表达水平（pg/mL，±s）

表3 各组大鼠粘连组织IL-1β和TGF-β1表达水平（pg/mL，±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

对照组模型组丹参多酚酸盐组PVP-I组联合组10 10 10 10 10 155.59±24.15 220.78±18.31** 178.90±17.28△190.76±34.16△168.40±25.14△△593.42±131.51 759.87±178.42** 639.62±118.31△645.32±56.95△609.87±64.88△△

4 讨 论

正常腹膜有一定的纤维蛋白溶解功能，这种功能是由巨噬细胞分泌的纤维蛋白溶解酶原激活物（t-PA）启动，最终将腹膜间皮细胞释放的纤维蛋白溶解酶原转变成纤维蛋白溶解酶。腹膜因机械损伤、组织缺血、异物刺激等引起炎症时，t-PA活性降低，并进一步产生纤维蛋白溶解酶原激活物抑制物（PAI），影响纤维蛋白溶解酶原向纤维蛋白溶解酶转变的过程，导致大量的纤维蛋白沉积，最终形成永久性粘连。在粘连形成的各个阶段均有多种生长因子和细胞因子参与调控，其中IL-1和TGF-β影响较大。Kaidi等[6]报道在术前应用IL-1抗体可明显减轻试验大鼠的腹膜粘连程度,认为在术后早期,血清中较高水平的IL-1与术后腹膜粘连形成呈显著正相关，IL-1是术后腹膜粘连形成的重要短期介质。TGF-β在损伤、炎症及纤维化的过程中起着桥梁作用，是启动和终止组织修复的一种主要肽类生长因子,其中TGF-β1起着关键性的作用[7]。TGF-β1是通过与靶细胞受体结合进而传导细胞间信号，并参与细胞外基质的合成和沉积，促进基质中胶原蛋白、纤维蛋白和蛋白多糖的合成，抑制其降解，增加血管形成，趋化成纤维细胞、单核细胞及巨噬细胞，启动一系列连锁反应，破坏纤维蛋白降解与生成之间的平衡，导致纤维蛋白沉积，进一步导致腹膜粘连的形成。本研究结果也表明，模型组大鼠术后血清和粘连组织IL-1β和TGF-β1水平较对照组明显升高（P＜0.05，P＜0.01），提示IL-1β和TGF-β1与粘连形成有密切联系。

丹参是唇形科鼠尾草属植物，具有“活血祛瘀、安神除烦、凉血消痈”之功效，研究[8-9]表明，丹参具有改善腹膜组织缺血程度、减少炎症反应、减少损伤腹膜处胶原过度合成等药理作用，能有效防治粘连。丹参多酚酸盐是丹参主要有效成分。本实验研究中丹参多酚酸盐组和联合组腹腔内注入的丹参多酚酸盐被腹膜吸收，因其具有活血作用，可降低毛细血管的通透性，提高缺血部位组织细胞对氧的耐受性，使微循环得到改善，炎性物质吸收加快，进一步调节受损腹膜处炎症因子的表达水平，降低炎症反应的程度，从而减少纤维蛋白的渗出，发挥防治粘连的作用。

PVP-I溶液的有效碘含量为3～5g/L，挥发残渣＜0.5%。由于载体PVP的作用，改变了碘的溶解性、稳定性和刺激性，能有效控制术后炎症的发生发展，是一种高效的杀菌消毒剂。临床用于体腔冲洗或留置，预防和治疗术后感染、粘连[10]。本实验中PVP-I大鼠的粘连等级有所降低，IL-1β和TGF-β1水平低于模型组，这可能与PVP-I稀释液能有效控制腹腔内感染源，降低术后炎症反应有关。PVP可能还可以作为丹参的载体，使丹参的药效更持久，从而减少术后肠粘连的可能。

本实验结果显示，丹参多酚酸盐、PVP-I及两者联合，均能减轻术后粘连程度，并降低IL-1β和TGF-β1含量，两者联合效果更明显。由此推断，丹参多酚酸盐联合PVP-I防治大鼠术后肠粘连的作用机制可能与降低血清和粘连组织IL-1β和TGF-β1含量，降低炎症反应，减少纤维蛋白沉积有关。

［1］王吉甫.胃肠外科学［M］.北京：人民卫生出版社，2000：512.

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（收稿：2014-08-06 修回：2014-11-20）

Salvianolate Combined w ith Povidone-iodine in Prevention of Intestinal Adhesion in Rats

LIU Guotao1,CHEN Qiao1,JIN Liming1,ZHANG Qin2. 1Department of General Surgery,First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medica University,Hangzhou(310006),China;2Department of Surgery,Zhejiang Provincial People's Hospital,Hangzhou(310014),China

Objective To investigate the effects of salvianolate and povidone-iodine on postoperative intestinal adhesion in rats.M ethods Fifty male SD rats were randomly divided into 5 groups:blank control group,model group,salvianolate group,povidone-iodine group and salvianolate combined with povidone-iodine group（combination group）,with 10 rats in each group.A intestinal adhesion modeling was established in rats,and then each group were given the corresponding drugs（intraperitoneal injection of 5%glucose solution,4mL/kg;salvianolate 10.9mg/kg; 0.625%povidone-iodine,4mL/kg)for 8d.On the 7th day,rats underwent open surgery in abdomen to observe and grade intestinal adhesion by macroscopy.The level of interleukin-1βand transform growth factor-β1 in blood samples and adhesive tissue samples was determined by ELISA.Results Compared with model group,the grade of intestinal adhesion in salvianolate group and combination group was significantly lower（P＜0.05）；the level of IL-1β in blood samples and tissue samples in salvianolate group,povidone-iodine group and combination group were lower（blood:75.75±6.67pg/mL vs 64.82±10.55pg/mL,70.93±16.06pg/mL,and 62.37±3.32pg/mL;tissue:220.78±18.31pg/ mL vs 178.90±17.28pg/mL,190.76±34.16pg/mL,168.40±25.14pg/mL;P＜0.05 or P＜0.01）;the level of TGF-β1 in blood samples and tissue samples in salvianolate group,povidone-iodine group and combination group were lower（blood:54.93±4.75pg/mL vs 36.77±5.25pg/mL,42.67±3.40pg/mL,and 21.90±1.15pg/mL;tissue:759.87±178.42pg/mL vs 639.62±118.31pg/mL,645.32±56.95pg/mL,609.87±64.88pg/mL;P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion Both of sal-vianolate and povidone-iodine and their combination can effectively prevent intestinal adhesion after abdominal operation in rats,which may be related to reduction of IL-1βand TGF-β1 in peripheral blood and tissues.

rats;intestinal adhesion;salvianolate;povidone-iodine;IL-1β;TGF-β1

浙江省医药卫生科学研究基金计划（No.2010KYA148）

1浙江中医药大学附属第一医院普外科（杭州 310006）；2浙江省人民医院外科（杭州 310014）

张勤，E-mail：hz66cn@163.com