5株江西源猪丹毒杆菌微生物学性状及药敏试验分析

李辉鸿 ，潘美慧 ，陈如圣 ，张祥华 ，熊加明 ，黎纯林 ，何后军 ，陈瑞光 ，邬向东 *

（1.江西农业大学动科院，江西 南昌 330045；2.江西农业大学兽医院）

猪丹毒是由猪丹杆菌（红斑丹毒丝菌）引起的一种急性、热性传染病，主要侵害架子猪，母猪及哺乳仔猪也可发生。该病广泛分布于美国、日本、澳大利亚、巴西及欧洲等世界各地，以炎热多雨季节流行最盛，常呈暴发流行。20世纪80年代和90年代初，猪丹毒与猪瘟、猪肺疫为我国养猪业的三大传染病，给养猪业造成了严重的经济损失。随着猪瘟-猪丹毒二联苗等疫苗研制成功，我国防控该病取得重大成绩，进入21世纪该病几乎在规模猪场消失。但近几年，猪丹毒在我国各地又出现流行的趋势，该病在我省各地报道迅速增多，给养猪企业造成巨大损失。2013年至2014年，江西农业大学兽医院连续接诊多例猪丹毒病例，初步分离鉴定出5株细菌，并对其进行了药物敏感试验，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料。急性死亡猪脾脏、肝脏等病料。

1.1.2 试剂及培养基。鲜血培养基、TSB培养其自行配制，琼脂糖、麦康凯培养基等均购自长城生物公司；细菌微量生化反应管、药敏纸片，购于杭州天和微生物试剂有限公司。

1.1.3 主要设备。上海苏坤小型恒温摇床，Eppendorf移量移液器，苏净集团单人单面超净工作台。

1.2 方法

1.2.1 细菌分离。无菌提取病死猪肝脏、脾脏等病料，在超净台划线接种于鲜血培养基，置37℃恒温箱培养24～48h，观察可疑菌落生长情况。如有细小溶血不明显的可疑菌落，再进行革兰氏染色，观察有无细小杆状或丝状阳性可疑细菌生长。

1.2.2 细菌生化鉴定。根据猪丹杆菌生化特点，将细菌接种于相应微量生化反应管、葡萄糖蛋白胨水和明胶穿刺，置37℃恒温培养24～48h，观察生化反应管的颜色反应，同时进行甲基红（M-R）、维培二氏（V-P）、吲哚等试验检测。

1.2.3 细菌药敏试验。采用药敏纸片扩散法进行试验。

2 结果

2.1 细菌分离结果

图1 5株可疑菌株在鲜血培养基上培养性状

图2 5株可疑菌在麦康培养基上培养性状

图3 5株可疑菌革兰氏染色结果

细菌分离分别得到5株可疑菌株，分别是：JXAUV-29、JXAUV-31、JXAUV-77、JXAUV-103、JXAUV-105。37℃恒温箱培养24～48h后，鲜血琼脂培养基上有光滑、露滴状针尖大小菌落（图1），溶血不明显；麦康凯培养基上不生长（图2）。

革兰氏染色为革兰氏阳性细小弯曲丝状或稍弯曲杆菌（图3）。

2.2 细菌生化鉴定结果

表1 5株可疑菌株生化鉴定结果

5株可疑菌均可以发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖，不发酵木糖、鼠李糖、棉籽糖、阿拉伯糖、蕈糖、甘露醇；硫化氢产生试验、过氧化氢酶试验、吲哚试验、M-R试验、V-P试验皆为阴性。其中JXAUV-29、JXAUV-31 不发酵蔗糖，JXAUV-77、JXAUV-103、JXAUV-105发酵蔗糖（见表1）。初步鉴定5株细菌均为猪丹杆菌。

2.3 细菌药敏试验结果

表2 药敏试验结果mm

见表2，结果表明5株细菌仍对青霉素类、酰胺醇类药物氟苯尼考和大环内酯类药物药物敏感，对氨基糖苷类药物耐药。

3 小结与讨论

3.1 本试验从猪群暴发临床急性死亡7个病例中分离到5个可疑菌株，经培养性状观察、染色镜检和生化鉴定，初步判断为猪丹毒杆菌，并命名为：JXAUV-29、31、77、103、105。

3.2 对5株细菌分别进行了药物敏感试验，结果5个菌株的药敏特性基本相同：对青霉素类药物（青霉素、氨苄西林、先锋霉素Ⅳ、头孢曲松）、酰胺醇类药物氟苯尼考和大环内酯类药物（红霉素、阿奇霉素）仍高度敏感；对四环素类药物（多西环素）和喹诺酮类药物（环丙沙星）敏感；对氨基糖苷类药物（链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素）和林可胺类药物林可霉素耐药。

3.3 试验仍证实了江西省猪场流行的猪丹毒杆菌耐药性无明显变化，对青霉素类药物仍然是敏感的。临床上通过青霉素及同类药物使用，可以很好的控制该病。说明近几年出现的猪丹毒暴发应与变异无关，最可能的原因与猪场长期停用疫苗、国家对饲料中添加抗菌素控制加强，导致抗菌素使用减少；而猪丹毒杆菌的抵抗力很强，养殖业一直零星有发生，在各种因素的综合作用下，导致该病近几年连续在多省暴发，而且一些防疫不到位的规模猪场也有发生，损失巨大，说明猪丹毒仍是危害养猪业重要的传染病，不可掉以轻心。

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