盐酸曲美他嗪对肾间质纤维化防治作用的研究

郝雷亮（潞安集团总医院，山西 长治 046204）

临床上慢性肾脏疾病继续发展下去就会发生肾间质纤维化，最后造成末期肾功能衰竭。肾间质纤维化是受到各种致病因素的作用，增加了间质细胞和细胞间质，尤其是基质蛋白质合成增多，基质降解减少，导致肾小管间质堆积着大量的细胞外基质，最后造成纤维组织增生，破坏了正常组织及结构。若肾脏出现纤维化独自向恶化发展，就非常有必要逆转及阻止肾间质纤维化。出现肾间质纤维化是很多不良因素作用的结果，有细胞表型转化、TGF-β1表达的增多及氧化应激等是最主要的因素[1]。本研究通过单侧输尿管梗阻（UUO）对大鼠肾间质纤维化模型进行诱导，观察并分析盐酸曲美他嗪对肾纤维化肾组织中TGF-β1表达、a-SMA表达和MDA、SOD含量的变化，对盐酸曲美他嗪在抗肾纤维化防治作用进行研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料：抽取健康wistar大鼠28只，体重185～205 g，对其分开饲养，使用颗粒饲料喂养，自由饮水。

1.2 实验方法：将28只大鼠进行随机分组，分为观察组与对照组，每组14只，操作方法如下：用2%戊巴比妥钠30 mg/kg，通过腹腔注射进行麻醉，去大鼠毛，备皮，按照顺序打开皮肤—皮下组织—腹膜，然后进入腹腔，将肾门输尿管充分暴露出来，采用无菌手术线在接近肾门输尿管连接位置对输尿管进行结扎，为了避免发生感染，再使用8万U的硫酸庆大霉素对腹腔进行冲洗，再逐层切口缝合。对照组使用生理盐水灌胃，每天每只1.0 ml，观察组使用盐酸曲美他嗪溶液，每天每只1.0 ml。

1.3 采集、处理标本：在术后1周、2周、3周使用心脏采血法将大鼠处死，立即将术侧肾脏取出，对肾上腺、包膜、脂肪组织等进行剥离，取100 mg分离出来的肾脏，将其制作为组织匀浆，留取作为检测ELISA检测使用，剩余的肾脏放置在10%福尔马林里，作为病理检查及免疫组织化学用，将血清提取出来，对血尿素氮及肌酐值进行检测。

1.4 检测方法：采用化学法检测血肌酐及血尿素氮；试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中TGF-β1水平、MDA水平，SOD含量测定采用改良黄嘌呤氧化酶法。

1.5 统计学分析：使用SPSS 13.0对各项资料进行统计、分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肾功能变化情况：观察组和对照组血肌酐、尿素氮在术后第1周、第2周及第3周没有出现明显变化，两组对比差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 两组肾小管损伤程度评分情况（，分）

表1 两组肾小管损伤程度评分情况（，分）

组别 第1周 第2周 第3周对照组 0.016±0.003 0.019±0.004 0.018±0.003观察组 1.438±0.092 2.057±0.124 2.398±0.105

表2 两组a-SMA的表达面积评分情况比较，分）

表2 两组a-SMA的表达面积评分情况比较，分）

组别 第1周 第2周 第3周对照组 0.13±0.12 0.14±0.12 0.12±0.11观察组 0.89±0.68 1.78±0.72 3.28±0.45

表3 两组TGF-β1、MDA及SOD表达含量比较

表3 两组TGF-β1、MDA及SOD表达含量比较

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2.2 对肾脏病理的影响：用肉眼观察可见对照组大鼠肾脏呈现暗红色，大小形态没有发生异常，而观察组大鼠结扎侧肾脏颜色比较淡，有出现明显肿大，有黄褐色混浊液体存在，肾盂扩张比较明显，肾乳头变平，将肾脏剖开可以看到肾实质变薄。两组肾小管损伤程度评分情况比较差异有统计学意义（P＜0.05），详见表1。两组a-SMA的表达面积评分情况比较差异有统计学意义（P＜0.05），详见表2。

2.3 两组TGF-β1、MDA及SOD表达含量比较：见表3。两组TGF-β1、MDA及SOD表达含量比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

造成末期肾功能衰竭的主要病理基础就是肾间质纤维化，具有非常复杂的发生及发展过程，主要表现为以下几方面。

3.1 细胞转型的转化：①成纤维细胞转型的转化，研究实践证明，在细胞外基质增多过程中，肾间质成纤维细胞增殖活化起到非常关键的作用，在正常状态下，成纤维细胞还处在静息状态，在受到刺激情况下，成纤维细胞由静息状态转化成了增殖活化状态，从而产生过量基质。由于活化成纤维细胞所产生的表型及功能发生改变，转化为表达a-SMA的MFB，MFB的主要来源是成纤维细胞。②肾小管上皮细胞表型转化，很多研究证明，肾小管上皮细胞在受到损伤、炎性反应、缺血、变性及坏死的情况下，可发生肾间质细胞表型转化[2]。

3.2 炎性反应细胞浸润：在肾间质纤维化发生及发展中，肾间质炎性反应细胞的浸润起着很关键的作用：①单核巨噬细胞，巨噬细胞可释放出致纤维化因子，细胞数量和纤维化程度成正比关系。②肥大细胞，从实验中发现，此种细胞可通过促进TGF-β1等多种细胞因子的表达，诱导间质成纤维细胞增殖及ECM生成，加快肾间质纤维化的发生及发展。

3.3 TGF-β1和肾脏纤维化：它是一种多肽，具有调节细胞生长及分化的作用，最主要的三种形式为TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3，而TGF-β1是肾纤维化治疗的靶点[3]。

3.4 氧化应激及肾脏纤维化：造成细胞衰老、损伤及死亡的重要原因就是氧化应激，它在肾间质纤维化中具有很重要的作用。肾组织在进行水、电解质转运及重吸收时，需要较高的氧耗，因此，在氧化应激下，肾小管容易发生损伤。

当前在现代医学上，对肾间质纤维化还没有特异性药物，本研究采取单侧输尿管结扎法制作大鼠肾间质纤维化模型，分析单侧输尿管结扎对大鼠肾组织损坏的主要病理表现，和有关细胞因子的表达变化，从研究结果可以看出，两组血尿素氮及肌酐数值差异无统计学意义（P＞0.05），染色显示对照组间质有大量蓝染胶原纤维增生，肾小球病变不明显，而观察组肾间质胶原纤维阳性染色面积下降比对照组低，差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，盐酸曲美他嗪大鼠梗阻侧肾脏病理损害程度比较轻，Masson，s染色的胶原纤维面积减少，从而说明盐酸曲美他嗪可减轻肾间质纤维化的作用。

[1] 楚 非,邹万忠,孙锁柱,等.大鼠肾小管间质纤维化中肾小管上皮细胞表型转化的研究[J].中华肾脏病杂志,2011,16(1):1.

[2] 张 峰,曾秋棠,李书国.曲美他嗪对糖尿病大鼠心室重塑的影响[J].中华老年医学杂志,2011,15(1):1.

[3] 郭 敏,刘海燕,陈孝文.肾间质纤维化的发生机制及三七总苷的防治作用[J].中国中西医结合肾病杂志,2012,28(1):2.