胆管癌组织中Wnt2b蛋白表达及其临床意义

陈宗凯，赵伟，路键，颜丙松，姬文超，张炳远

(青岛大学附属医院肝胆外科，山东 青岛 266003)



胆管癌组织中Wnt2b蛋白表达及其临床意义

陈宗凯，赵伟，路键，颜丙松，姬文超，张炳远

(青岛大学附属医院肝胆外科，山东 青岛 266003)

目的 观察Wnt2b蛋白在胆管癌组织的表达，并探讨其在胆管癌发生发展及浸润转移过程中的临床意义。方法 采用免疫组化染色方法检测60例胆管癌及30例胆管正常组织中Wnt2b蛋白的表达情况，并分析其与胆管癌临床特征的关系。结果 Wnt2b在胆管癌组织的阳性率(90.00%)明显高于正常胆管组织(3.33%)，差异有显著性(χ2=38.13，P<0.01)。Wnt2b表达与胆管癌的浸润深度和淋巴结转移程度相关(Z=-3.171、-3.316，P<0.01)，而与病人的年龄、性别、胆管癌发生部位及胆管癌的分化程度无关(Z=-0.048～-1.020，P>0.05)。结论 Wnt2b蛋白可能作为评估胆管癌临床分期与淋巴结转移的一种有价值的生物学标记。

Wnt2b蛋白；胆管肿瘤；病理学,临床

胆管癌是一种原发于左右肝管汇合部至胆总管下端的肝外胆管恶性肿瘤，其临床特点是具有高侵袭性和转移早，临床可采用手术、放射、化学等方法进行治疗，但预后较差[1-3]。胆管癌恶性程度高，是最致命的恶性肿瘤之一[4]。临床上胆管癌主要表现为伴有上腹部不适的进行性黄疸，早期没有典型的临床体征。因此，研究胆管癌发生及其转移的分子机制，可以提高对胆管癌病人的诊治水平。Wnt2b是Wnt家族中具有高度保守性的分泌型因子，近年来诸多研究已证实，Wnt2b与多种肿瘤的发生、发展密切相关。并且Wnt途径是调控细胞生长发育和分化的关键途径，通路的异常激活或调节通路的蛋白功能发生改变均可导致肿瘤的发生[5]。本实验旨在通过免疫组织化学方法观察Wnt2b在胆管癌及正常胆管组织的表达，进而探讨Wnt2b与胆管癌发生发展的关系及其临床意义。

1 材料和方法

1.1 材料来源

2008年12月—2013年12月，我院经手术切除后石蜡包埋的胆管病理组织标本90例，其中胆管癌组织标本60例，正常胆管组织标本30例(均来源于肝移植病人的正常胆管组织，并经病理证实)。60例胆管癌均为腺癌，其中男43例(占71.67%)，女17例(占28.33%)，年龄为30～82岁，中位数年龄为56岁。在胆管癌病人中有淋巴结转移者46例(占76.67%)，无淋巴结转移者14例(占23.33%)。按病理分型，高分化18例(占30%)，中低分化42例(占70%)。按国际抗癌联盟(UICC)TNM分期，其中T1+T2期16例(占26.67%)，T3+T4期44例(占73.33%)。所有病人术前均未做过放、化疗治疗。所有标本均采用40 g/L中性甲醛溶液固定后，石蜡常规包埋，4 μm厚连续切片。采取苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色。

1.2 方法

采用免疫组化PV-6000二步法检测Wnt2b在胆管癌及正常胆管组织的表达，并分析其差异性及与临床特征的关系。试剂来源：鼠抗人Wnt2b多克隆抗体(ab50575)购自Abcam公司，小鼠超敏二步法免疫组化PV-6000和DAB检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。操作步骤按试剂盒说明书进行，每批实验均设阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果及判定

以细胞核及细胞质出现棕褐色颗粒状作为Wnt2b蛋白阳性判断标准。Wnt2b蛋白阳性分级标准如下：通过随机选择8～10个视野(100倍)的阳性细胞核的数目来进行半定量评估，分为4级：阳性细胞<5%为阴性(-)，5%～25%为弱阳性(+)，26%～50%阳性()，>50%为强阳性()。所有标本均经2名病理科高年资主治医师审核证实。

2 结 果

2.1 Wnt2b在胆管癌、正常胆管组织中的表达

Wnt2b蛋白在胆管癌组织和正常胆管组织的阳性率分别为90.00%(54/60)和3.33%(1/30),前者明显高于后者，差异有显著意义(χ2=38.13，P<0.01)。见图1和表1。

2.2 Wnt2b在胆管癌组织表达及其与临床病理因素关系

胆管癌组织中Wnt2b的表达与胆管癌的浸润深度及有无淋巴结转移有关(Z=-3.171、-3.316，P<0.01)，而与病人年龄、性别、胆管癌发生部位和分化程度等无关(Z=-0.048～-1.020，P>0.05)。Wnt2b蛋白在T3+T4期的表达阳性率明显高于T1+T2期(Z=-3.171，P<0.01)，且有淋巴结转移的胆管癌标本Wnt2b的表达率明显增高(Z=-3.316，P<0.01)。提示Wnt2b可能参与了胆管癌的浸润及转移。见表2。

3 讨 论

胆管癌在我国人群中的发病率较高，约占全球的55%[6]。胆管癌的手术切除是最主要的治疗方案，然而尽管近几年胆管癌R0根治性切除率上升到64%～71%，但切除后的5年生存率仅提高到21%～30%[7]，这可能是由于肿瘤早期便发生浸润转移，而手术无法完全切除转移灶所致。因此，研究胆管癌发生及其转移的分子机制，可以提高对胆管癌病人的诊治水平。近年来的研究结果表明，Wnt家族在调节细胞的迁移、增生和凋亡中发挥非常关键的作用[8-10]。Wnt2b位于人的常染色体1p13上，在19个人类的Wnt基因家族中属于高保守的分泌型因子，主要是通过经典的Wnt途径来发挥其生物学效应[11]。Wnt2b是与胚胎相关基因[12]，也是目前Wnt家族中研究发现的与消化道肿瘤的关系较为密切的一个基因[13-14]。近年来诸多研究已证实，Wnt2b与胃癌、食管鳞状细胞癌、恶性胸膜间皮瘤、乳癌、胶质瘤和恶性黑色素瘤等的发生、发展密切相关[13]。而KATOH[14]的研究也证实，Wnt2b在肿瘤组织中有明显的上调。迄今为止Wnt2b与胆管癌关系的研究报道较少。本研究结果表明，Wnt2b在胆管癌组织表达率明显高于正常胆管组织，并且与胆管癌的浸润深度及淋巴结是否转移有关，差异具有统计学意义。本研究结果提示，Wnt2b蛋白可能参与了胆管癌的发生发展。另外，也提示Wnt2b可能参与了胆管癌的浸润和转移。

表1 Wnt2b在胆管癌及正常胆管组织表达(例)

a：Wnt2b蛋白在正常胆管组织中的表达；b：Wnt2b蛋白在胆管癌组织的表达。PV-6000染色，200倍。

表2 Wnt2b在胆管癌组织表达与临床病理特征关系

综上所述，本实验结果表明Wnt2b蛋白可能作为评估胆管癌临床分期与淋巴结转移的一个有价值的生物学标记。

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(本文编辑 牛兆山 于国艺)

EXPRESSION OF Wnt2b IN CHOLANGIOCARCINOMA AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE

CHENZongkai,ZHAOWei,LUJian,YANBingsong,JIWenchao,ZHANGBingyuan

(Department of Hepatobiliary Surgery, The Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao 266003, China)

ObjectiveTo observe the expression of Wnt2b protein and investigate its clinical significance in the development, progression, invasion and metastasis of cholangiocarcinoma (CLC).MethodsEmploying immunohistochemical method, the expression of Wnt2b protein in tissues of 60 cases of CLC and 30 normal bile duct tissues was detected, and its relationship with clinical characteristics of this malignancy was analyzed.ResultsThe positive rate of Wnt2b was significantly higher in CLC than that in normal bile duct tissue (90.00% vs. 3.33%,χ2=38.13,P<0.01). The expression of Wnt2b was positively correlated with depth of tumor invasion and lymph node metastasis (Z=-3.171,-3.316;P<0.01), but it was not related to patient’s age, gender, tumor location and cell differentiation (Z=-0.048--1.020,P>0.05).ConclusionWnt2b is probably to be used as a useful biological marker for assessing clinical stage and lymph node metastasis of cholangiocarcinoma.

Wnt2b protein; bile duct neoplasms; pathology, clinical

2015-03-10;

2015-06-01

陈宗凯(1986-)，男，硕士研究生。

张炳远(1962-)，男，硕士，主任医师，硕士生导师。E-mail:bingyuanzhang@126.com。

R735.8

A

1008-0341(2015)04-0409-03