一例农户小型种猪场伪狂犬病的净化

党晓鹏，宁明正

（陕西金冠牧业有限公司，西安 710018；陕西省蒲城县龙阳畜牧兽医站，陕西 蒲城 715507）

猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种急性传染病[1]，我国将其列为二类传染病。近年来，猪伪狂犬病在陕西省流行范围较广，特别是农户散养猪场和小规模种猪场，野毒感染率较高。该病对种猪的危害主要是侵害繁殖系统，导致猪群繁殖力下降，产死胎、木乃伊数量增加，新生仔猪成活率下降[2]。

农户小型种猪场（基础母猪100头左右）在猪病净化方面难度较大，猪场卫生隔离消毒防疫等设施较差，种猪来源复杂多样，猪瘟（HC）、猪2型圆环病毒（PCV-2）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪传染性胸膜肺炎（APP）、副猪嗜血杆菌病（HPS）等混合感染普遍，感染猪及带毒猪淘汰措施难以执行等。但针对猪伪狂犬病的净化条件目前已基本具备，一是有商品化基因缺失疫苗免疫接种，二是有可区分疫苗免疫抗体与野毒感染抗体的PRV gE抗体ELISA试剂盒和检测PRV病原的实时荧光PCR检测试剂盒，在此基础上结合消毒隔离等生物安全措施，逐步淘汰阳性感染猪，引入阴性种猪，在2～3年的时间里完全可以将猪伪狂犬病彻底净化。国内许多大型规模化种猪场已经按照此方案对伪狂犬病成功进行净化，消灭了伪狂犬病野毒感染[3]。本试验用伪狂犬病病毒 gE抗体ELISA检测试剂盒，对陕西省蒲城县一农户小型种猪场的伪狂犬病野毒感染情况进行连续抽样监测，同时应用实时荧光PCR检测试剂盒，对表现有临床症状的乳仔猪进行实时荧光PRV病原检测。然后根据抗体和病原检测结果制定切实可行的净化方案。

通过科学严格的疫苗接种，连续对猪群进行5次抽样检测，包括PRV gE抗体和疑似病仔猪病原检测，严格隔离饲养抗体阳性猪，并实时逐步淘汰处理。该猪场的伪狂犬病野毒感染率由最初的45.45%逐步降低至1.72%，发病仔猪伪狂犬病野毒阳性率由48.28%降至0%，基本达到净化猪群伪狂犬病的目标。

1 材料与方法

1.1 试验材料

陕西蒲城某种猪场。存栏种公猪7头，能繁母猪135头。年出售商品仔猪近2 000头。将猪群分组：哺乳仔猪、保育猪、中大猪、后备母猪、空怀母猪、妊娠母猪及种公猪。种公猪逐只采样，其他每组分别抽样20%。

1.2 猪群接种疫苗

猪场伪狂犬病免疫接种采用基因缺失弱毒疫苗。

1.3 检测试剂盒

伪狂犬病gE缺失ELISA诊断试剂盒，购自武汉科前公司；猪伪狂犬病病毒(gE基因)实时荧光PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨公司。

1.4 血样采集时间

猪伪狂犬病病毒gE抗体检测在2014年3月、6月、9月、12月和2015年3月各采集血样1次，按照猪伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒说明书要求检测PRV野毒感染抗体效价。

检测结果判定：在酶标仪上测各孔OD630 nm值。试验成立条件是阴性对照孔平均OD630 nm值与阳性对照孔平均OD630 nm值之差≥0.4.

S=样品孔OD630 nm值，N=阴性对照孔平均OD630 nm值。

若S/N比值≤0.6,样品判为PRV抗体阳性。

若S/N比值≤0.7但＞0.6,该样品必须重测，如果结果相同，则过一段时间后重新采集血样进行检测。

若S/N比值＞0.7,样品判为PRV抗体阴性。

1.5 猪伪狂犬病病毒实时荧光PCR检测

对有临床症状的仔猪采集淋巴结组织，处理后进行病原检测，操作方法按照试剂盒生产厂家说明书操作。

检测结果判定：被检组织样品Ct 值≤30并出现特定的扩增曲线为猪伪狂犬病病毒野毒阳性，被检样品30＜Ct＜37并出现特定的扩增曲线，需要重新取样提取DNA，扩增后进行结果判定，如仍为可疑，则判定为阳性；被检样品Ct值＞37时，判定为阴性；对于某些未呈现特定的扩增曲线，但本底值较高的样品，判为阴性。

1.6 免疫程序

2014年3月以来，选用猪伪狂犬病基因缺失弱毒疫苗进行全群免疫。新生仔猪3日龄滴鼻免疫，8周龄时再肌注加强免疫1次；种公猪及后备母猪每3个月免疫1次。

1.7 饲养管理措施

每天及时打扫圈舍卫生，清理生产垃圾，保持舍内外干净整洁，及时清理猪粪，尽量做到猪、粪分离，保持猪体、圈舍干净。猪舍空圈后要清洗、消毒，种猪上床或调圈，要把空圈先冲洗后用广谱消毒药消毒，产房每断奶一批、育成每育肥一批、育肥每出栏一批，先清扫，再用火碱喷雾消毒。注意通风换气，冬季做到保温，舍内空气良好。夏季通风防暑降温，排出有害气体。使用过的药盒、药瓶、疫苗瓶、消毒剂瓶、一次性输精瓶等应及时焚烧或销毁处理。料袋能利用的返回饲料厂，不能利用的焚烧掉。四季灭鼠，夏季灭蚊蝇。

2 结果

2.1 PRV gE抗体检测结果（见表1）

猪群gE野毒抗体的阳性率由首次检测的45.45%降至第5次检测的1.72%，说明猪群伪狂犬病野毒抗体逐步降低，净化初步成功。最后1头阳性带毒猪建议猪场尽快淘汰，半年后应再复查1次。

2.2 伪狂犬病野野毒实时荧光PCR检测结果（见表2）

表 1 PRV gE 野毒抗体检测结果

表2 伪狂犬病野野毒实时荧光PCR检测结果

在净化之初，对有临床症状的仔猪进行伪狂犬病野野毒实时荧光PCR检测，结果表明猪场新生仔猪及保育猪群呈现较为严重的感染状态，阳性率高达48.28%。采取净化方案后，猪群繁殖性能明显改善，产仔数、健仔数、新生仔猪成活率等指标明显提高。3个月后进行第2次检测时，新生仔猪群伪狂犬病野毒阳性率已降至27.78%，效果明显；到2015年3月，猪场新生仔猪抽样结果显示伪狂犬病野野毒实时荧光PCR检测阳性率已经为0%，且再无新的伪狂犬病仔猪出现。

3 讨论

我国预防猪伪狂犬病主要采取免疫接种的方式，首选疫苗为猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗。猪伪狂犬病基因缺失疫苗免疫原性好、抗体产生快，保护力强，可把疫苗免疫猪与野毒感染猪区分开。伪狂犬病gE抗体ELISA检测试剂盒能区分伪狂犬病野毒和疫苗毒所产生的抗体，通过检测结果可判断猪只是否感染伪狂犬病野毒。猪伪狂犬病病毒(gE基因)实时荧光PCR检测试剂盒可对病料进行野外强毒病原检测。通过5次连续监测结果表明，农户小型种猪场在实施科学免疫接种的基础上，结合抗体和病原检测，严格隔离、淘汰、净化，完全能够清除野毒感染,使种猪场成为伪狂犬病阴性猪场。

[1] 殷震，刘景华.动物病毒学[M].第2版. 北京：科学出版社，1997：998—1009.

[2] 赵德明，张仲秋，沈建忠，译.猪病学[M].第9版.北京：中国农业大学出版社，2008：465—476.

[3] 万遂如.关于养猪场伪狂犬病的净化问题[J].今日畜牧兽医，2014(8)：1—4.