环孢素A对免疫功能的影响

白鹤

环孢素A对免疫功能的影响

白鹤

目的 研究环孢素A对免疫功能的影响。方法 通过2, 4-二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型变态反应考察该药对细胞免疫功能的影响；用L929作为靶细胞的MTT染色法测定该药对小鼠腹腔巨噬细胞经脂多糖(LPS)刺激产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。结果 环孢素A能明显抑制DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应；高剂量能促进小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α生成。结论 环孢素A有较强的免疫抑制作用。

环孢素A；免疫功能；肿瘤坏死因子-α

环孢素A是目前广为推荐的一种兼有抗有丝分裂和抗炎效应的强力免疫抑制剂［1］。主要选择抑制T细胞活化, 对B细胞的抑制作用弱, 对巨噬细胞的抑制作用不明显, 对自然杀伤(NK)细胞活力无明显抑制作用, 但可间接通过干扰素(interferon-γ, INF-γ)的产生而影响NK细胞的活力［2］。本文就其对免疫功能的调节作用和对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α生成的影响进行初步研究, 为该药的临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 30只昆明种小鼠随机分为不致敏组、致敏组和环孢素组, 每组10只除不致敏组外, 每鼠腹部去毛, 面积约3 cm ×3 cm大小, 均匀涂抹1% DNFB溶液50 μl致敏, 次日强化1次。小鼠自致敏当日起给药1次/d, 连续6 d, 于致敏第5天后, 各组小鼠左耳(两面)均匀涂抹1% DNFB溶液10 μl进行攻击。24 h后将小鼠颈椎脱臼处死, 剪下双耳, 用直径为8 mm的不锈钢铳子分别在左右耳同一部位冲下圆耳片,电子天平分别称重, 以左右耳片重量之差作为肿胀程度。同时取小鼠胸腺及脾脏称重, 分别以小鼠每10 g体重的脾重(mg)和胸腺重(mg)作为脾脏指数和胸腺指数, 统计各组的差别, 并计算抑制率(%)。

1.2 方法 L929细胞MTT染色法测定样品TNF-α活性。L929细胞长满单层后, 用0.25%胰酶消化, 重悬细胞于RPMI-1640培养液中, 细胞计数后调浓度为1×105cells/ml接种到96孔平底培养板中, 200 μl/孔, 设3个复孔, 37℃, 5%CO2培养箱培养24 h。弃上清, 每孔加入含0.5 μg/ml放线菌素D的培养液100 μl, RPMI-1640培养基或上述待测样品100 μl, 设3个复孔, 37℃, 5%CO2培养箱培养20 h后, 向上清中加入MTT(5 mg/ml) 20 μl, 继续培养4 h。弃去上清, 100 μl/孔DMSO裂解10 min, 待细胞完全融解后置于酶标仪中570 nm处测定O.D.值。以1640培养基孔为对照, 以细胞毒百分率表示样品所含TNF-α含量。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 环孢素A对DNFB诱导小鼠迟发型变态反应的影响 环孢素A(80 mg/kg)经皮下注射给药对DNFB诱导小鼠迟发型变态反应有显著的抑制作用。见表1。

表1 环孢素A对DNFB诱导小鼠迟发型变态反应的影响±s)

表1 环孢素A对DNFB诱导小鼠迟发型变态反应的影响±s)

注： 与不致敏对照组比较,aP＜0.01,bP＜0.01,cP＜0.05；与模型组比较,dP＜0.05,eP＜0.01；括号内数值为抑制率(%)

组别例数耳肿胀度(mg)胸腺指数(mg/10 g体重)脾脏指数(mg/10 g体重)环孢素组(mg/kg, s.c, ×5 d)10 3.1±1.4e(73.2) 16.4±2.8e(43.0) 58.9±7.7d(18.1)致敏组1011.6±5.6b29.2±6.2a71.8±14.3c不致敏组1.3.1±2.837.3±4.859.1±6.3

2.2 环孢素A对小鼠腹腔巨噬细胞生成TNF-α的影响 初步实验结果显示, 环孢素A在剂量5 g/ml时对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α分泌具有明显的促进作用,增加率为127.6%。见表2。

表2 环孢素A对小鼠腹腔巨噬细胞TNF α分泌的影响

3 小结

环孢素A是一种兼有抗炎效应的免疫抑制剂, 主要用于器官移植排斥反应, 近年来发现它对角膜炎症, 多发性心肌炎, 类风湿性关节炎均有一定的治疗效果［3,4］。

本实验结果表明, 环孢素A对免疫功能调节作用的实验研究也表明该药能明显抑制DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应, 表现为明显减轻小鼠耳肿胀, 对胸腺和脾脏抑制作用显著。

综上所述, 环孢素A具有较强的免疫抑制作用。

［1］ 蒋催蓉, 左丽 , 钟志强. 赤灵芝孢子粉对环孢素A免疫抑制模型小鼠固有免疫功能的影响.贵阳医学院学报, 2009, 34(5): 546-549.

［2］ 李靖, 程桂芳, 朱秀媛. Gn类化合物对小鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α的影响. 药学学报, 2000, 35(5):335-338.

［3］ Zhong M, Cheng GF, Wang WJ, et al. Inhibitory effect of resveratrol on interleukin 6 release by stimulated peritoneal macrophages of mice. Phytomedicine, 1999(6):79.

［4］ Zhang M, Yao Q, Sun BH, et al. Inducement and production of tumor necrosis factor by murine peritoneal macrophage. J Immunol, 1991(7):254.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.23.204

2015-03-13］

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