HPLC法测定环孢素胶囊的含量及有关物质

陈燕 齐衍超 郎益鹏 赵海鹏 杨丽蓉

潍坊市食品药品检验检测中心 山东潍坊 261105

环孢素是一种可以对机体免疫反应起到抑制作用的药物，它能有效抑制免疫相关细胞的增殖和功能，降低抗体的免疫反应，常用来作为器官移植后的抗排异反应药物。环孢素的发明是近几十年来医学领域对器官移植研究取得的重要进展。而环孢素中包含了多种杂质，要想发挥环孢素的治疗作用，确保用药安全性就必须精确控制环孢素中各种杂质的含量。基于此，本文参考相关研究资料，采用HPLC法测定环孢素胶囊中主要有效成分的含量及有关物质，为精确控制药品质量提供参考。

1 仪器与材料

安捷伦1260型HPLC仪，1200系列自动进样器、二极管阵列检测器、四元泵（美国安捷伦公司）；XS-205DU型电子天平(瑞士梅特勒公司)。环孢素对照品（瑞士Nvoartis公司，批号：130495-200202）；环孢素B、环孢素C、环孢素H、环孢素G、异环孢素A、异环孢素H对照品（诺华制药有限公司，批号分别为518-85、005-95、520-85、16-85、502-88、210-89）；环孢素胶囊（北京双鹭药业股份有限公司，批号：20090601）；四氢呋喃为色谱纯；磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

填充剂为C18柱，用长1米、直径0.25mm的不锈钢管连接色谱柱、进样阀，用于热交换；流动相为四氢呋喃-0.05mol/L磷酸溶液(45:55)；流速为1.0ml/min；检测波长220nm；色谱柱温度、不锈钢管温度为75℃；进样量10μL。

2.2 溶液的制取

(1)系统适用性溶液制取。使用电子天平分别称取3毫克环孢素B、环孢素C、环孢素H、环孢素G、异环孢素A、异环孢素H对照品，称取100毫克环孢素对照品，将它们放入50毫升的量瓶中，添加比例为80:20的四氢呋喃-水混合液溶解稀释到刻度制得系统适用性溶液。

（2）对照品溶液的制取。使用电子天平称取50毫克左右的环孢素对照品，将其放入25毫升的量瓶中，添加比例为80:20的四氢呋喃-水混合液溶解并稀释到刻度；精密量取1毫升置于200毫升的量瓶中，添加比例为80:20的四氢呋喃-水混合液溶解并稀释至刻度，获得对照品溶液。

（3）供试品溶液。取装量差异项下的内容物适量(含环孢素约100mg)精密称取，将其置于50毫升量瓶中，添加比例为80:20的四氢呋喃-水混合液溶解并稀释至刻度，摇匀后获得供试品溶液。

3 有关物质

3.1 系统适用性试验

使用电子天平精密称取适量的六种杂质对照品以及环孢素对照100mg，将它们放入50毫升的量瓶中，添加比例为80:20的四氢呋喃-水混合液溶解并稀释到刻度作为系统适用性试验溶液。

3.2 检出限和定量限

使用逐步稀释法测定，以S/N=3时计算出环孢素检出限为3ng。以S/N=10时计算出环孢素以及六种杂质的定量限分别为：9.9、20.3、19.5、31.3、18.28、50.6、45.2ng。

3.3 校正因子

使用电子天平分别称取适量的各杂质对照品、环孢素对照品配制对照品溶液，计算出环孢素及各种各杂质对应的校正因子。

4 含量测定

4.1 溶液的配制

供试品溶液的配制方法同上文所述。

对照品溶液：使用电子天平称取50毫克左右的环孢素对照品，将其放入25毫升的量瓶中，添加比例为80:20的四氢呋喃-水混合液溶解并稀释到刻度，摇匀后作为对照品溶液。

4.2 重复性试验

取样品根据上文所述方法配制供试品溶液、对照品溶液，根据上文所述的色谱条件开展分析，进行六次样品测定，平均含量为97.5%，RSD值 0.1%。

4.3 溶液稳定性试验

按照上述方法配制供试品溶液，在0、2、4、6、8h测定峰面积，得到峰面积均值16499，RSD0.2%。检测结果显示8小时之内供试品溶液稳定。

4.5 样品含量测定

精密称取环孢素胶囊样品，制备供试品溶液、对照品溶液，根据上文给出的色谱条件分析，根据外标法用峰面积计算环孢素胶囊样品含量。

5 讨论

环孢素生产、储存过程中存在的杂质主要包括环孢素G、异环孢素A、环孢素B、环孢素D等，含量都极少。本次研究对环孢素B、环孢素C、环孢素H、环孢素G、异环孢素A、异环孢素H这六种杂质进行控制。试验显示流动相为四氢呋喃-0.05 mol/L 磷酸溶液（45：55）时，环孢素与六种杂质的均能达到基线分离。

6 结语

综上所述，使用HPLC法对环孢素胶囊含量及有关物质的测定可以获得精准可靠的结果，可以为环孢素胶囊质量控制提供有价值的参考。