抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对脑缺血再灌注大鼠的抗氧化作用

陈金 吴丽娥

·实验研究·

抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对脑缺血再灌注大鼠的抗氧化作用

陈金 吴丽娥

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体对脑缺血再灌注大鼠的抗氧化作用。方法 76只健康雌性SD大鼠, 随机分为假手术组(4只)、抗体组(36只)和生理盐水组(36只), 采用Zea Longa线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型, 测定大鼠血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 TNF-α单克隆抗体在再灌注3、6 h后可降低血清中MDA含量, 提高SOD活性。结论 抗TNF-α单克隆抗体在一定时间内能提高脑缺血再灌注大鼠的抗氧化作用。

抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体；脑缺血再灌注损伤；丙二醛；超氧化物歧化酶

脑缺血再灌注损伤是指脑组织缺血一段时间, 当重新恢复血流后, 组织的损伤程度较缺血时进一步加重、功能进一步恶化的现象。TNF-α是较早释放的, 具有多种生物效应的重要的炎性细胞因子, 在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用并被广为关注［1］。本研究观察大鼠脑缺血再灌注损伤后抗氧化功能的变化, 为治疗脑缺血再灌注损伤方法探索新思路。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雌性SD大鼠76只, 体重220～250 g；MDA和SOD试剂盒；抗大鼠TNF-α单克隆抗体。将大鼠随机分三组,假手术组(4只)、抗体组(36只)和生理盐水组(36只)。

1.2 方法 抗体组和生理盐水组于再灌注0、3、6、12 h 4个时间点, 每时间点9只, 采用Zea Longa［2］线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型, 10%水合氯醛0.3 ml/100 g腹腔麻醉, 分离颈内、外动脉, 在颈内动脉离分叉处4 mm剪一切口, 栓线插入18 mm左右, 可感阻力, 把露在体外的栓线和外科缝合线剪掉, 缝和, 放入笼内。脑栓塞持续3 h, 缓慢把栓线拔出到颈内、外动脉分叉处, 实现大鼠脑缺血再灌注。凡动物苏醒后出现霍纳综合征(Horner征)、提尾悬空时栓塞对侧前肢屈曲内收或行走时向栓塞对侧转圈的大鼠为栓塞成功, 否则被剔除。假手术组：栓线插入颈内动脉段, 仍保持大脑中动脉血液的畅通。抗体组在4个时间点,按0.1 mg/kg给予颈总静脉注射TNF-α抗体, 生理盐水组给予等量生理盐水。15 min取眼眦或眼眶后静脉血1.0 ml, 按SOD、MDA检测说明书进行检测。

1.3 统计学方法 采用SPSS15.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 血清SOD含量变化 抗体组和生理盐水组在再灌注后第3、6小时SOD比较, 差异具有统计学意义 (P＜0.05) ；在第0、12小时比较, 差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

2.2 血清MDΑ含量变化 抗体组和生理盐水组在再灌注后第3、6小时MDA比较, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；在第0、12小时比较, 差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表1 抗体组和生理盐水组各时间点血清SOD含量比较( x-±s, U/ml)

表2 抗体组和生理盐水组各时间点血清MDΑ含量比较( x-±s, nmol/ml)

3 小结

短暂的脑缺血后再灌注, 常可导致较脑缺血本身更为严重的损害, 急性炎性反应在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用［3］。本研究发现, 在缺血再灌注3、6 h后, SOD含量抗体组较生理盐水组升高, MDA含量较生理盐水组降低, 二者与生理盐水组比较差异均存在统计学意义(P＜0.05), 在0 h时可能是由于TNF-α抗体早期对SOD酶系统和MDA的氧化激活作用较弱, 在12 h时可能是由于TNF-α的浓度基本降低至发病前水平, 使用TNF-α抗体后, 并不能对内源性抑制系统起到抵抗作用；而且由于再灌注时间的延长, 脑损害变成不可逆性, 使用TNF-α抗体可能已经无作用。因此, 在脑梗死中期, 根据TNF-α含量, 使用TNF-α抗体后, SOD活性增高, MDA下降, 说明TNF-α抗体具有抗氧化能力,对细胞具有保护作用。但由于实验条件限制, 潜在的副作用和作用机制尚需进一步的深入研究。

［1］ Αlkam T, Nitta Α, Mizoguchi H, et al.Restraining tumor necrosis factor-alpha bythalidomide prevents the amyloid beta-induced impairment of recognition memory in mice.Behav Brain Res, 2008, 189(1):100-106.

［2］ Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.Stroke, 1989, 20(1):84-91.

［3］ Van der Bijl ΑE, Emmer BJ, Breedveld FC, et al.Advanced magnetic resonance imaging of the brain in patients treated with TNF-alpha blocking agents.Clin Exp Rheumatol, 2007, 25(2):301-304.

Antioxidation effect by anti-tumor necrosis factor-α monoclonal antibody for cerebral ischemia- reperfusion rats

CHEN Jin, WU Li-e.
Department of Neurology, Inner Mongolia Autonomous Region People’s Hospital, Hohhot 010017, China

Objective To investigate antioxidation effect by tumor necrosis factor-α (TNF-α) monoclonal antibody for cerebral ischemia-reperfusion rats.Methods A total of 76 health male SD rats were randomly divided into sham operation group (4 cases), antibody group (36 ases), and normal saline group (36 cases).Model of focal cerebral ischemia-reperfusion rats was established by Zea Longa line plug method.Serum malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) activity were detected.Results 3 and 6 h of TNF-α monoclonal antibody reperfusion reduced serum MDA content and improvded SOD activity.Conclusion Anti-TNF-αmonoclonal antibody can improve antioxidation effect in cerebral ischemiareperfusion rats for a certain time.

Anti-tumor necrosis factor-α monoclonal antibody; Cerebral ischemia-reperfusion injury; Malondialdehyde; Superoxide dismutase

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.27.212

2015-05-08］

010017 内蒙古自治区人民医院神经内科(陈金)；包头医学院第一附属医院神经内科(吴丽娥)