老年患者胰腺癌组织中USP9X 的表达及其临床意义

张秀忠，丁伟超，张蓬波，张 冲，任泽强

0 引 言

近年来，我国的胰腺癌发病率已呈逐渐上升趋势［1］。迄今为止，胰腺癌仍是最难诊断和治疗的恶性肿瘤之一［2－3］。因其具有临床症状的不典型和发病较隐匿等特点，加之老年人对腹部疼痛不适等症状不敏感，对早期发现疾病造成很大困难。因此，分析研究老年患者胰腺癌的发病机制、探索有效的早期诊断指标及预后评价指标有重要的临床意义。本研究应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-perosidase，SP)对老年患者胰腺癌组织进行泛素特异性蛋白酶9X(ubiquitin-specific protease 9X，USP9X)检测，旨在探讨USP9X 的表达与老年患者胰腺癌的发生、发展及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院2006－2010 年行根治性手术切除的老年患者(年龄≥60 岁)胰腺导管腺癌标本30 例。其中，男18 例，女12 例，年龄60 ～85岁，平均年龄(68.93±6.78)岁。高分化+中分化腺癌和低分化腺癌分别为22 例和8 例;TNM 分期Ⅰ期和Ⅱ～Ⅳ期分别为15 例和15 例。选取距离肿瘤边缘2 cm 以上的组织作为癌旁非肿瘤标本。所有患者均获随访，随访日期截止至2013 年12 月，随访方式为电话、书信随访或/和门诊复查。纳入标准:①经病理诊断为原发性胰腺导管腺癌;②术前均未行放疗、化疗及免疫治疗。排除标准:①其他病理类型的胰腺癌;②术前行其他特殊治疗者。

1.2 主要实验试剂和仪器 兔抗人USP9X 单克隆抗体、链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)试剂盒、浓缩型3，3-二氨基联苯胺(DAB)显色剂均购于北京中杉金桥生物技术有限公司;所使用免疫组织化学专用湿盒购于海门志达实验器材公司，抗原修复盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司，光学显微镜购于日本Olympus 公司，正置荧光显微镜购于尼康(中国)公司。

1.3 免疫组织化学检测 采用SP 法，具体步骤按照SP 试剂盒说明书进行。USP9X 抗体工作浓度为1∶100，4 ℃过夜。细胞质和/或细胞膜染成棕黄色为阳性。每张切片任选5 个400 倍光镜视野观察。免疫组织化学结果评分［4］如下:不着色计0 分，浅黄色计1 分，棕黄色计2 分，棕褐色计3 分;着色细胞占计数细胞的百分率为0 计0 分，≤10%计1 分，10%～50%计2 分，51%～80%计3 分，≥80%计4 分;每张切片平均染色程度得分与平均染色细胞百分率得分各自相乘为最后得分;≤4 分为阴性，＞4 分为阳性。

1.4 统计学分析 采用SPSS16.0 软件进行统计分析，定性资料采用χ2检验或Fisher 确切概率法。单因素与多因素生存分析采用Cox 比例风险模型(单因素分析中P ＜0.05 的变量纳入多因素分析)。以P≤0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 USP9X 的表达及其与临床病理指标的关系

30 例胰腺癌组织中17 例USP9X 表达阳性，阳性率56.7%，癌旁非肿瘤组织中均未见USP9X 表达，差异有统计学意义(P ＜0.05)。见图1。

USP9X 的表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关(P ＞0.05)，而与有无淋巴结转移及TNM 分期显著相关(P ＜0.05)。见表1。

图1 USP9X 在胰腺癌组织中的阳性表达(SP ×400)Figure 1 USP9X positive expression in pancreatic carcinoma tissue(SP ×400)

表1 USP9X 的表达与临床病理指标的关系(n)Table 1 The relationship between expression of USP9X and clinicopathological parameters(n)

2.2 老年胰腺癌患者预后的COX 比例风险分析单因素COX 比例风险分析显示，TNM 分期、有无淋巴结转移及USP9X 表达影响胰腺癌患者临床预后(P ＜0.05)。见表2。

多因素COX 比例风险分析显示，TNM 分期、有无淋巴结转移及USP9X 表达是影响预后的独立危险因素(P ＜0.05)。见表3。

表2 老年胰腺癌患者的单因素COX 比例风险分析Table 2 The univariate Cox proportional hazards analysis in pancreatic carcinoma of elderly patients

表3 老年胰腺癌患者的多因素COX 比例风险分析Table 3 The multivariate Cox proportional hazards analysis in pancreatic carcinoma of elderly patients

3 讨 论

作为去泛素化酶家族的亚家族泛素特异性蛋白酶的成员之一［5－6］，USP9X 与一些肿瘤的生物学行为密切相关［7－8］。Schwickart 等［9］研究表明，USP9X通过稳定抗凋亡蛋白MCL-1，从而促进肿瘤细胞的生长;同时也可通过稳定凋亡信号调控激酶，促进肿瘤细胞凋亡［10］。Trivigno 等［11］研究认为，USP9X 稳定抗凋亡蛋白MCL-1，可能是肿瘤细胞对放疗产生耐受的机制之一。而Harris 等［12］研究发现，通过降低USP9X 表达，可以激活结肠癌细胞的凋亡信号通路，并增强5-氟尿嘧啶(5-FU)的化疗作用。

众所周知，胰腺癌是一种发展十分迅速、恶性程度极高的消化系肿瘤，因其早期诊断困难且预后差，已成为威胁人类健康的重要疾病之一［13－14］。关于USP9X 与胰腺癌的关系，既往报道少见。本研究应用免疫组织化学SP 法对老年患者胰腺癌组织进行USP9X 检测。结果显示:30 例胰腺癌组织中17 例USP9X 表达阳性，阳性率56.7%，癌旁非肿瘤组织中未见表达，差异有统计学意义(P ＜0.05);USP9X 的表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关(P ＞0.05)，而与有无淋巴结转移及TNM 分期显著相关(P ＜0.05)。USP9X 在胰腺癌组织中表达阳性，在癌旁非肿瘤组织中不表达，提示USP9X 在老年患者胰腺癌的发生中发挥了重要作用;胰腺癌组织中USP9X 表达与有无淋巴结转移及TNM分期显著相关，提示USP9X 在老年患者胰腺癌的发展过程中也发挥重要作用，USP9X 表达阳性的胰腺癌组织可能具有更强的侵袭性。此外，COX 比例风险分析显示，TNM 分期、有无淋巴结转移及USP9X 表达是影响预后的独立危险因素(P ＜0.05)。

综上所述，USP9X 在老年患者胰腺癌的发生、发展及预后中发挥重要作用，有望成为胰腺癌有效的诊断与预后评价指标，有助于指导老年胰腺癌患者术后的综合治疗与随访，改善患者的预后。

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