公共场所公共用品的微生物检测分析

2015-05-06祝艳云曹萍

中国卫生产业 2015年36期

关键词：平皿肉汤公共场所

祝艳云，曹萍

吉林省敦化市疾病预防控制中心，吉林敦化 133700

公共用品的微生物检验对公共场所的卫生监督和传染病的预防至关重要，能够提供安全可靠的科学依据，有利于各种规章和制度的制订和实施[1]。

1资料与方法

1.1一般资料

2015年对该市4类公共场所：洗浴场所、美容院、旅店、美发理发共435户、946份公共卫生用品进行了微生物检测。

1.1.1 采样种类及检测项目毛巾、浴袍、床单（细菌总数、大肠菌群、、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌）、拖鞋（真菌和酵母菌）。

1.2采样方法

1.2.1一般要求随机抽取清洗消毒后准备使用的公共用品用具，无菌操作，使用灭菌干燥棉拭子，于10 mL灭菌生理盐水内浸润（吸取约1 mL溶液）后，在用品用具的适当部位来回均匀涂抹进行样品采集，再用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放入剩余的9 mL生理盐水内，4 h内送检。

1.2.2采样部位及采样面积 ①在毛巾、枕巾、浴巾对折后两面的中央5 cm×5 cm面积范围内分别均匀涂抹5次，每25 cm2采样面积为1份样品，每件用品共采集2份样品。

②在床单、被单的上下两部即与颈部、脚部接触部位5 cm×5 cm（25）面积范围内分别均匀涂抹5次，每25 cm2采样面积为1份样品，每件用品共采集2份样品。

③睡衣、睡裤随机选择 2个 5 cm×5 cm（25 cm2）面积范围内均匀涂抹5次，每25 cm2采样面积为1份样品，每件用品共采集2份样品。

④在每只鞋的鞋内与脚趾接触处5 cm×5 cm面积范围内均匀涂抹5次，1双鞋为1份样品，采样总面积为50 cm2。

1.2.3试验器材及培养基高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、恒温培养箱：（36±1）℃、无菌（试管、平皿、刻度吸管、剪刀）等。生理盐水、营养琼脂、乳糖胆盐发酵培养液、伊红美兰琼脂、乳糖发酵管、胰酪胨大豆肉汤、氯化钠肉汤（75 g/L）、BairdParker平板、血琼脂培养基、孟加拉红培养基、沙氏琼脂培养基、葡萄糖肉浸液肉汤、匹克氏肉汤。

1.2.4 检验步骤（1）样品稀释：将放有采样后棉拭子的试管充分震荡，此液为1∶10的样品匀液。用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注入盛有9 mL生理盐水稀释液的无菌试管中，震摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混匀，制成1:100的样品匀液。按同法制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释1次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。

（2）细菌总数的检验∶根据对样品污染状况的估计，选择1～2个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内，同时分别取1 mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。将15～20 mL、冷却置45～50℃的营养琼脂倾注平皿，混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿，置（36±1）℃培养箱培养（48±2） h。

（3）菌落计数：选取菌落数在 30～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数；若所有稀释度的菌落数均大于300 CFU，按稀释度最高的平板进行计数；若所有稀释度的菌落总数均小于30 CFU，按稀释度最低的平板进行计数；若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，以小于1乘以最低稀释倍数计算。若所有稀释度的菌落数均不在30～300 CFU之间，以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

（4）大肠菌群的检测:①乳糖胆盐发酵试验：将检样倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中，置（36±1）℃培养箱内培养（24±2）h，观察是否产酸、产气，如不产酸产气为大肠菌群阴性，若变黄和气体产生，要进行分离培养和证实试验。

②分离培养：自产酸产气发酵管中取一接种环培养液，转接伊红美兰琼脂平板上，置（36±1）℃培养箱培养18～24 h，取出，观察菌落形态，革兰氏染色镜检。（深紫黑色，具有金属光泽的菌落;紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落;淡紫红色、中心较深的菌落）。

③证实试验∶在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落接种乳糖发酵管，置（36±1）℃培养箱培养（24±2） h。

（5）金黄色葡萄球菌的检测：①将1 mL样品放入9 mL氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基中，（36±1）℃培养24 h。从培养液中取1～2接种环划线接种在，Baird Parker平板或用血琼脂培养基，于（36±1）℃培养 24 h，在Baird Parker平板培养基上菌落为圆形、金黄色、凸起、表面光滑、周围有溶血环。挑取典型菌落作涂片染色镜检，为革兰氏阳性，成葡萄状排列。

②血浆凝固酶试验∶吸取1∶4新鲜血浆0.5 mL放入灭菌小试管中，再加入待检菌24 h肉汤培养物0.5 mL。混匀，放（36±1）℃温箱或水浴中，每30 min观察1次，24 h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5 mL，分别加入灭菌小试管与1∶4血浆0.5 mL混匀，作为对照。

③报告：凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，血浆凝固酶试验阳性，可报告检出金黄色葡萄球菌。

（6）溶血性链球菌的检测：①取1 mL液体检样，加入9 mL葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，同时按上述量接种匹克氏肉汤，经（36±1）℃培养 24 h，接种血平板，置（36±1）℃培养 24 h，挑起有溶血圆形的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色。链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。血平板上该菌为灰白色，半透明或不透明。

表2 公共用品的检出情况

②报告：在血平板上为灰白色菌落，半透明或不透明，表面光滑有乳头，镜检为革兰氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列，菌落周围有溶血环，可报告为样品中检出溶血性链球菌。

（7）真菌和酵母菌的检测：①用灭菌吸管吸取1:10稀释液2 mL，分别注入到2个灭菌平皿内，每皿1 mL。另取1 mL注入9 mL灭菌盐水管中，换1支1 mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1:100稀释液。按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释1次，换1支1 mL灭菌吸管，根据样品的污染情况，选择3个合适的稀释度。将溶化并冷却至45℃左右的培养基注入平皿内，凝固后，倒置于25～28℃温箱中，3 d后开始观察，共培养观察1周。

②菌落计数：通常选择菌落数在5～50 CFU之间的平皿进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每毫升检样中所含菌落数。若两个稀释度的菌落数皆在规定范围之间或3个稀释度皆不在此范围，按菌落总数方法计数。

2结果

该市公共场所的公共卫生用品的合格率为91%，致病菌检出率较低，真菌和酵母菌的检出率略高为8%。大型公共场所的合格率相对较高[2]。

3讨论

通过该次调查发现，该市公共场所的公共卫生用品的合格率为91%，致病菌检出率较低，真菌和酵母菌的检出率略高为8%。大型公共场所的合格率相对较高，与大型公共场所的消毒意识强、基本上能按规定做到一客一换一消有关。小型浴池和小型理发店的合格率略低，与这些场所服务员流动大、缺乏消毒意识有关。为此，建议卫生监督部门，要以公共用品用具的清洗消毒为重点，特别是小型浴池拖鞋的清洗消毒，进行经常性的卫生监督，定期进行公共用品的微生物检测，督促经营部门完善消毒设施建立健全消毒制度，指导消毒人员掌握简便易行正确的消毒方法，确保消毒质量和效果，保证卫生质量符合国家要求[3]。同时，完善微生物检验室的设施，提高检验人员的技术水平，保证检验结果的科学性、准确性。