生脉注射液质量分析与热原控制探讨

唐健新

广州医科大学附属第五医院，广东 广州 510180

生脉注射液质量分析与热原控制探讨

唐健新

广州医科大学附属第五医院，广东 广州 510180

目的：对国家食品药品监督管理局公告的苏中药业的生脉注射液(批号：14081413)进行全面检测，探索引起不良反应的原因。方法：按照生脉注射液质量标准进行全面检测。结果：热原存在批内差异，不符合标准规定要求。结论：建议企业扩大批内批间检查批次，确保临床用药安全。

生脉注射液；热原；质量分析

生脉注射液是根据中医经典古方“生脉散”研制而成的中药注射液，由红参、麦冬、五味子组成，收载于2009 年版国家基本药物目录。具有理气开窍、益气强心、生津复脉、回阳救逆、扶正祛邪、活血化瘀、抗凝等功效[1]，临床用于治疗冠心病，心肌梗死，心功能衰竭，各种休克及肿瘤患者化疗的辅助治疗。现行生脉注射液质量标准收载于《国家食品药品监督管理局国家药品标准》( WS3-B-2865-98-2011)。该药于1983年由华西药业首家上市，1995年经国家中医药管理局批准为“必备急救中药”，目前全国共有8家企业生产[2-4]。但生脉注射液在2007年即列为国家食药监“中药注射剂高风险品种名单”，2012年国家食药监发布过《药品不良反应信息通报》提示生脉注射液存在严重过敏反应现象。2004～2011年间国家药品不良反应监测中心共收到生脉注射液严重不良反应/事件病例报告508例[5-7]。

生脉注射液在临床上会产生“过敏样反应”，严重者可导致其体克甚至死亡。国家食品药品监督管理局于2015年4月24日公告苏中药业的生脉注射液(批号：14081413)个别患者用药后出现寒战、发热症状的质量问题[8]。实验根据《国家食品药品监督管理局国家药品标准》( WS3-B-2865-98-2011)对生脉注射液(批号：14081413)进行全面分析，探讨生脉注射液热源不合格的判断依据及引起不良反应的原因，为临床用药提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津LC2010-A系列高效液相色谱仪。

1.2 材料 人参皂苷Rb1对照品、Re对照品、Rgl对照品、麦冬对照药材；五味子对照药材；五味子醇甲对照品(以上材料均由中国药品生物制品检定所提供)；生脉注射液(批号：14081413，江苏苏中药业)样品抽自普宁市里湖镇中心卫生院。标准缓冲液(默克公司)试剂。

2 方法与结果

2.1 性状 标准规定应本品为淡黄色或淡黄棕色的澄明液体，对该批样品进行观察发现该批样品为淡黄色的澄明液体，符合标准规定要求。

2.2 薄层鉴别2.2.1 人参皂苷Rb1、Re、Rgl的薄层鉴别 取生脉注射液约10ml，置水浴上蒸干，残渣加2ml乙醇使溶解，作为供试品溶液。另分别取人参皂苷Rb1、Re、Rgl对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。按照2010年版《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，在温度为20℃，湿度为65%的条件下，以三氯甲烷-甲醇-水(75∶20∶2)为展开剂展开，取出，晾干；喷10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色淸晰，置紫外光灯(365nm)下检视，结果见图1。

由图1可知，人参皂苷Rb1、Re和Rgl混合对照的分离度良好，斑点清晰，并与生脉注射液样品在相同位置上显示相同颜色的斑点。符合《中国药典》规定的要求。

2.2.2 麦冬薄层鉴别 取本品40ml，加盐酸3ml，置水浴中加热1小时，放冷，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷l ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材2g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约40ml，同法制成对照药材溶液。按照2010年版《中国药典》薄层色谱法试验，分别吸取上述溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，在温度为20℃，湿度为65%的条件下，以三氯甲烷-丙酮(4∶1)为展开剂展开，取出，晾干；喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，结果见图2。

由图2可知，麦冬对照药材的斑点清晰，与生脉注射液样品在相同位置上显示相同颜色的斑点。符合《中国药典》规定的要求。

2.2.3 五味子薄层鉴别 取本品50ml，水浴上浓缩至约25ml，移至分液漏斗中，加正己烷振摇提取3次，每次10ml滤过，合并滤液，蒸干，残渣加三氯甲烷l ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材2g，加水煎煮30min，滤过，滤液浓缩至约40ml，同法制成对照药材溶液。再取五味子醇甲对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。按照2010年版《中国药典》薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液10μl、对照约材溶液和对照品溶液各1μl，分别点于同一硅胶板上，在温度为20℃，湿度为65%的条件下，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-甲酸(14∶5∶1)为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，结果见图3。

由图3可知，五味子对照药材、五味子醇甲与生脉注射液样品在相同位置上显示相同颜色的斑点，Rf值适中，分离度良好。符合《中国药典》规定的要求。

2.2.4 液相色谱鉴别 制备供试品溶液和对照提取物溶液(见含量测定项)。按照2010年版《中国药典》高效液相色谱法试验，色谱柱为Alltech Prevail Carbohydrate ES，乙腈-水(80∶20)为流动相，用蒸发光散射检测器检测。结果供试品色谱中检出与对照品(药材)保留时间相同的四个主要色谱峰。

2.3 检查项

2.3.1 pH值 参照2010年版《中国药典》一部附录VⅡ G进行pH值检测，在温度为20℃，湿度为65%的条件下，采用默克公司生产的标准缓冲液为校准试液，对该批样品进行检测，结果样品的pH值为5.7，符合标准规定要求。

2.3.2 溶液的颜色 参照2010年版《中国药典》二部附录XI A笫一法进行溶液颜色检测，结果表明，样品溶液浅于黄色9号标准比色液，符合标准规定要求。

2.3.3 炽灼残渣 根据标准，参照2010年版《中国药典》一部附录IX J对样品炽灼残渣进行检查，结果炽灼残渣为0.5% (g/ml)，符合标准规定要求。

2.3.4 总固体 精密量取本品10ml置已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干后，在105℃干燥3 小时，移置干燥器中冷却30min，精密称定重量，测得样品总固体为5.0% (g/ml)，符合标准规定要求。

2.3.5 有关物质 依据2010年版《中国药典》一部附录IX S的要求，分别对蛋白质、树脂、草酸盐和钾离子进行测定，结果均符合药典规定要求。

2.3.6 热原 依据2010年版《中国药典》一部附录XIII A，依法检查，发现家兔升温明显。在排除外源性污染的可能性后再次重复热原检查，每次均取两支样品混匀作为供试液，结果两次结果符合规定，一次结果边缘，其原因可能是样品之间的质量不均一引起。按照2010年版《中国药典》一部附录“热原检查法”规定，热原检查无须复试即可直接判定为不合格。同时，中药注射液属于相对高危的注射剂，且该批样品在临床上已经出现“发热”情况，该品种也曾出现“发热”等有关报道。因此认为该批产品不符合标准规定要求。

2.3.7 其他检查 对该批样品的异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、无菌以及其他项(装量、可见异物)按照2010年版《中国药典》一部附录进行检查，均符合药典规定要求。品的渗透压摩尔浓度为288 mos mol/kg，不溶性微粒中10μm和25μm分别为298粒和7粒，均符合标准规定。

2.4 色谱对比及含量测定

2.4.1 色谱条件 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)试验，以Alltech PrevailTM Carbohydrate ES色谱柱为固定相，以乙腈-水为流动相，按表1进行梯度洗脱；检测波长为203nm。

表1 梯度洗脱表

2.4.2 供试品溶液的配置 取本品l ml，加50%乙腈稀释至约10ml，混匀，作为供试品溶液。

2.4.3 对照品溶液的配置 取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rb1对照品及五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成毎1ml分别含0.10mg、0.08mg、0.20mg 和0.02mg的混合溶液，摇匀即得。

2.4.4 典型指纹图谱 分别精密量取10 μl供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定。经过比较所测定和纪录的色谱图，生成标准指纹图谱。见图4。

由图4可知，供试品指纹图谱在8～95min范围内，共有17个特征色谱峰，且特征色谱峰基本能达到基线分离。按《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》以特征峰计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为0.86。另外，对供试品色谱中峰面积高于Rb1峰面积5%的色谱峰进行积分，发现非特征峰面积之和为43%，符合标准规定低于50%的要求。

2.4.5含量测定 采用外标单点校正法测定该批样品中人参皂苷Rg1、Re和Rb1以及五味子醇甲的含量，平行测定三份，取平均值。该样品中每1ml含红参以人参皂苷Rg1、Re的总量计为0.20mg，符合标准规定不少于0.1mg的要求；以人参皂苷Rb1计为0.23mg，符合标准规定不少于0.1mg的要求；以人参皂苷Rg1、Re和Rb1的总量计为0.43mg，符合标准规定(0.2～0.7mg)的要求。五味子以五味子醇甲计，该批样品中每1ml含五味子为22.3μg，符合标准规定不低于3.0μg的要求。

3 讨论

3.1 整体质量评 药品的质量稳定、均一是保证有效性和安全性的前提。中药注射剂，尤其是复方中药注射剂与口服制剂相比，更应开展严格的品质评价研究，确保质量稳定，避免治疗中因质量不达标而影响药效或产生不良反应。研究依据2010版《中国药典》一部的要求，采用兔法对江苏苏中药业所生产的生脉注射液进行检测，在平行实验中，一次兔子体温明显升高，其他三次体温无明显变化，与国家食品药品监督管理局公布的结果一致。初步认为“发热”是由该批样品不均匀所致。此外，该批产品除热原不合格外，其他均符合标准规定要求。

3.2 热原不合格的原因分析 中药注射液的“热原”主要产于革兰氏阴性细菌的细胞壁，由脂多糖、磷脂、蛋白质等组成的复合物。而脂多糖是一种微生物代谢产物，是内毒素的主要成分，具有较强的热原活性。热原可以通过原料、溶剂、容器具带入，制备过程中污染，灭菌不彻底或包装不严也可产生热原[9]。原料带入的主要原因为原料质量不佳，存放不当，包装不好，贮存时间太长，受污染等。另外，注射用水等溶剂制备不严格、蒸馏水器结构不合理或注射用水贮存时间过长等，也有可能引入热原[10]。

由于原料等不可避免的给中药注射剂带来热原，随之也开发了诸多控制热源的技术[10]，如超滤膜分离法[11]、活性炭吸附法[12]、蒸馏法、离子交换法、酸碱处理法、高温法以及反渗透等方法[13-14]除热原的方法。中药注射剂含有热原量稍高就可引起严重不良反应，甚至危害生命，因此企业应该越来越重视注射液中热原的控制。

3.3 教训与建议

3.3.1 品质评价 仅凭合格与不合格不能达到控制生脉注射剂安全，对于高危品种，特别是中药注射剂的品质评价应包含批内产品的均一性、同一厂家不同批次之间的均一性，这就对厂家提出了更高的生产要求。

3.3.2 对质量标准和抽样建议 通过对生脉注射液的全面分析，生脉注射液现行标准是可行的，对产品质量能起到一定的控制作用。但还应该完善和提高现行标准，对高危中药注射剂品种可以适当增加检查批次，减少或杜绝因批内和批间差异引起的质量问题。

3.3.3 加强监管 要求企业完全要按GMP相关要求进行生产检验，强化生产企业的技术能力，通过行政监管来促进生产企业检验技术的提高。

生脉注射液由红参、麦冬、五味子组成，其功效由药物相互作用、相互协调而共同体现 ，而不良反应的产生也是多方面因素的综合表现。因生脉注射液由多种中药成分组成，存在中药类注射液常见的缺点，而临床应用广泛且用量较大，如何在临床安全应用需要进行更深入的研究。

[1] 易艳，李春英，唐仁茂，等. 生脉注射液工艺改进前后类过敏反应比较[J]. 中国中药杂志，2012,37(13)：1875-1879.

[2] 李廷谦，刘雪梅，冯敏，等. 生脉注射液临床应用及不良反应的系统评价 [J] . 中国中西医结合杂志，2009，29(11)：965-969.

[3] 刘倩，秦媛媛，张媛，等. 高华不同来源生脉注射液体外细胞毒性的比较及原因分析[J]. 中国中药杂志，2012,37(5)：643-647.

[4] 夏晶、王钢力、季申，等. HPLC测定生脉注射液中4种成分的含量[J].中成药，2006，28(1)：27-31.

[5] 国家食品药品监督管理局.2012年药品不良反应监测年度报告[EB/OL].[2013-03-14] http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0051/79058.html.

[6] 国家食品药品监督管理局.国家药品不良反应监测年度报告(2013年) [EB/OL].[2014-05-14 ] http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0078/99794.html.

[7] 国家食品药品监督管理局.警惕生脉注射液的严重过敏反应，[EB/OL].[2012-01-10 ] http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0078/68318.html.

[8] 国家食品药品监督管理局.关于江苏苏中药业集团股份有限公司生脉注射液质量问题的通告(2015年第12号)，[EB/OL].[2015-04-24 ] http://news.sda.gov.cn/WS01/CL0050/117962.html.

[9] 徐维.中药注射液生产过程中热原控制探讨[J].临床合理用药，2012，5(8A)：140-141.

[10] 刘春兰. 浅谈中药注射剂生产过程中热原的产生与处理[J]. 黑龙江医药，2011,24(4):58-570.

[11] 姜翠莲，史新元，王耀，等. 超滤去除清开灵注射液中热原的研究[J].北京中医药大学学报,2009,32(11):776-778.

[12] 范能全. 活性炭去除注射液中热原的工艺条件考察[J].中国药师2012，15(9): 1301-1303.

[13] 毕殿洲.热原及消除注射液中热原的方法[J].中国药学杂志，1979，14(3):102-105.

[14] 李奉勤，史东霞，薛艳朝，等. 中药注射剂生产过程中热原的防止与处理[J].中国现代中药，2006,8(12):31-32.

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2015.06.30)