HPLC法测定奥美拉唑镁原料药中醋酸的残留量

李菊平，刘效平，金永亮

(1.山东大学药学院，山东 济南 250012;2.寿光富康制药有限公司，山东 潍坊 262700;3.西北农林科技大学资源环境学院，陕西 咸阳 712100)

在奥美拉唑镁工艺合成中使用了醋酸［1～4］调节pH，醋酸残留在文献中一般采用气相色谱法［5～9］测定醋酸的残留，但在试验过程发现气相色谱GCFID色谱条件下方法的冰醋酸的响应值很小，且重现性受GC色谱条件如溶剂、不同批次的色谱柱、不同品牌的仪器灵敏度影响大。因此我们使用更为稳定的高效液相色谱法(HPLC)系统使用外标法对奥美拉唑镁冰醋酸的残留进行控制，由于奥美拉唑在此波长210 nm下没有吸收，因此对冰醋酸的吸收峰没有干扰，且在实验中发现，若成品中的醋酸残留超过0.05%很容易使奥美拉唑镁降解［2］，UV吸光度变化明显，导致药物不稳定，《中国药典》2015年版［10］和人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)中均将醋酸列为三类溶剂，因此需要对它的残留量进行检测［11］。文献没有用HPLC法C18色谱柱进行检测原料药中醋酸的报道，相对于已有的离子色谱法［12］，C18色谱柱比离子色谱柱更耐用、更稳定。本文建立了HPLC方法C18色谱柱测定醋酸在奥美拉唑镁的残留，方法灵敏，色谱柱耗材易于采购，稳定性好，检测成本低，操作简便、结果准确，方法重现性好 符合《中国药典》2015年版［10］的有关规定。

1 仪器与试药

Agilent 1200液相色谱仪，UV检测器，自动进样器，柱温箱，X －Bridge TM C18(4.6mm ×250mm，5μm)色谱柱;奥美拉唑镁原料药(寿光富康制药有限公司，批号:52111505001、52111505002、52111505003)。

2 方法

2.1 色谱条件 色谱柱:X－Bridge C18(4.6mm×250mm，5μm)检测波长:210nm;流速:1.2mL·min－1;进样量:20μL;柱温:35 ℃;流动相:0.07%磷酸溶液(用氢氧化钠溶液调节pH至3.0):甲醇 =950∶50;溶媒:50%甲醇。

2.2 方法 标准贮备液:取醋酸100mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，用溶媒稀释至刻度。

对照品溶液:准确量取5mL标准贮备液置于100mL容量瓶中，用溶媒稀释至100mL。

供试品溶液:称取样品1.0g，精密称定，置于10mL容量瓶中，用溶媒溶解，漩涡振荡器振荡1min，混合均匀，用溶媒稀释至刻度，微孔滤膜过滤。

系统适用性:①对照溶液连续进样6次，RSD≤2%;②分离度溶液中杂质峰与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。图谱见图1。

外标法计算:奥美拉唑镁中残留的醋酸不得超过0.05%(即10%的ICH限度)。

图1 HPLC图谱

2.3 线性关系考察 分别精密量取“2.2”项下的标注贮备液1、2、4、5、6mL 分置于5 个100mL 容量瓶中，分别用溶媒稀释至100mL，摇匀，得系列浓度的溶液，按“2.2”项下的色谱条件测定，分别以浓度X(mg·mL－1)为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，醋酸在其浓度范围内线性关系良好)。线性方程为:Y=0.01209X+582.94186;相关系数 r=0.999994。结果:冰醋酸检测浓度线性范围为0.01 ～0.06mg·mL－1。

2.4 精密度试验 取对照溶液，按，按“2.1”项下的色谱条件测定，连续进样6次，醋酸峰面积的检测结果为29.82、29.26、28.51、28.74、29.62、28.58，平均值为29.09，RSD 为1.92%，精密度良好。

2.5 检测限定量限试验 将对照品浓溶液逐级稀释后，依法测定，直至信噪比 S/N=10.4 不低于10∶1，所得的最低检测浓度即为定量限度 25.0 μg·mL－1(250 ppm);直至信噪比 S/N=3.1 不低于3∶1，所得的最低检测浓度即为检测限度 5.0 μg·mL－1(50 ppm)，且检测限低于定量限的30%。

2.6 回收率试验 分别称取奥美拉唑镁(批号:52111505001)5 g，精密称定，置于9个50mL容量瓶中，按照限度要求对限度浓度的80%、100%、120%3个水平对9份样品进行加标，即加入4、5、6mL标准储备液，每个水平浓度重复3次，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，计算醋酸的回收率和RSD，结果见表1。

表1 回收率试验结果

结果表明，3个浓度下方法的回收率满足要求。

2.7 样品测定 分别量取对照溶液和供试品溶液按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中醋酸的残留，结果3批样品(批号:52111505001、52111505002、52111505003)均未检出。

3 讨论

冰醋酸在奥美拉唑镁的工艺中既是反应物又调节pH值，酸性物质的存在会对奥美拉唑镁的稳定性产生影响，酸性条件下产品很容易降解，为增加产品的稳定性，需要用稳定、经济的方法对冰醋酸在原料药奥美拉唑镁中的残留进行严格控制。《中国药典》2015年版和人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)中均将醋酸列为三类溶剂，残留限度是5000 ppm。用常规的顶空－气相色谱(HS－GC)法检测发现其峰面积响应值很小，信噪比S/N低于3.0;而用气相色谱－质谱(GC－MS)检测会增加产品的检测成本。因此我们开发HPLC法对冰醋酸的残留进行控制，冰醋酸能够与奥美拉唑镁中的可检测组分完全分离，准确度高，并且检测成本低。虽然法定限度是NMT 5000 ppm，但我们对冰醋酸制定了更严格的内控标准NMT 500 ppm(10%的ICH限度)，保证了产品在整个生命周期内的稳定性。

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