HPLC法测定山术运肠丸中阿魏酸的含量

刘黎明

(临沂市兰山区食品药品监督管理局，山东 临沂 276000)

山术运肠丸为山药、白术、当归、地黄、陈皮、何首乌组成的复方制剂，具有益肺运脾，补肝益肾，调肠理便之功效，主治初始性便秘。该验方收载于《山东省医疗机构制剂规范》［1］。该医院制剂质控标准较为简单，无相关定量测定项，为完善质量标准，选用高效液相色谱法(HPLC)测定当归中有效成分阿魏酸作为定量控制方法，该方法分离效果好，准确可靠，适合于该制剂质量控制。

1 仪器与试药

LC－20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司);Milipore超纯水制备系统;XS105D型电子天平(Mettler Toledo公司)。阿魏酸对照品(批号:110773－200611，中国药品生物制品检定所);供试品为临沂市某中医院提供;所用试剂甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 Sunfire C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，乙腈－0.1% 磷酸溶液(18∶82)，检测波长316 nm，流速1.0mL·min－1，进样量10μL，柱温35℃。理论塔板数按阿魏酸峰计算均不低于5000。在此色谱条件下，阿魏酸与相邻成分色谱峰达到基线分离，且阴性对照无干扰，结果见图1。

图1 HPLC色谱图

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取阿魏酸对照品11.85mg置100mL棕色量瓶中，加70%甲醇适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.2.2 供试品溶液 取本品约10g，研细，取约1.7 g，精密称定，加70%甲醇30mL，超声处理30min，过滤，加70%甲醇20mL洗涤残渣，过滤，合并滤液，蒸干，残渣加水15mL溶解，乙酸乙酯萃取4次(20、20、15、15mL)，合并萃取液并蒸干，残渣用70%甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，以70%甲醇定容，摇匀，以0.45μL微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 取缺当归的处方药，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备不含当归的阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察 精密量取对照品溶液各1、2、4、6、8、10、12μL 分别进样于液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归，绘制标准曲线，计算，得回归方程Y=355500X－8754.6，r=0.9999(n=7)，表明阿魏酸进样量在0.118～1.422 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取同一浓度的对照品溶液(118.5 μg·mL－1)重复进样5 次，各10μL，测得峰面积RSD为0.98，表明精密度良好。

2.5 重复性试验 精密量取同一批号供试品(批号:20140814)6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件各进样10μL进行测定，结果样品中阿魏酸含量平均值为0.065mg·g－1，RSD为1.56%，表明本法重现性良好。

2.6 稳定性试验 取同一批号供试品(批号:20140814)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别在 0、2、4、8、12、16、32、48 h 进样 10μL 进行测定，记录峰面积，结果RSD为1.24%，显示供试品溶液在48 h内稳定。

2.7 回收率试验 取已经测定阿魏酸含量的山术运肠丸(批号:20140814)细粉6份，每份约0.5 g，精密称定，用少量70%甲醇溶解，再分别加入对照品溶液0.5mL，按“2.2.2”项下方法制备溶液进行回收率试验，经计算得到加样回收率为98.46%，RSD为1.21%，结果见表1。

表1 回收率试验结果表

2.8 样品测定 取3批样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依上述色谱条件进行测定，记录峰面积，计算样品中阿魏酸的含量，结果见表2。

表2 3批样品含量测定结果表(n=5)

3 讨论

3.1 山术运肠丸的作用特点是通过调理与大肠转化功能有关的脏腑功能，促进大肠转化功能的恢复，使大便正常。方中当归发挥养血活血、润肠通便的功效，阿魏酸是当归的有效成分之一，具有多种生物活性［2］，《中国药典》2010 年版(一部)对当归中的主要有效成分阿魏酸规定了含量测定方法［3］，3批样品中的当归产地不同，测定阿魏酸的含量有差异，选用阿魏酸作为山术运肠丸质控指标是适宜和必要的。

3.2 中药中阿魏酸的提取方式有不同的方法［4～7］，本试验采用超声处理提取，再用乙酸乙酯萃取，大大降低了杂质的量，减少了对其进行含量测定时的干扰。试验表明，超声提取效率优于加热回流提取，超声处理30min提取完全，超声时间不宜过长，因为阿魏酸不稳定，长时间超声处理容易造成分解。

3.3 根据文献报道，阿魏酸对光不稳定［8］，因此对照品溶液及供试品溶液的制备应避光操作及保存，样品前处理时应该连续操作，尽量在短时间内完成。

［1］山东省食品药品监督管理局.山东省医疗机构制剂规范(第一册)［S］.济南:山东科学技术出版社，2012:31.

［2］梁娜，孙少平，罗跃娥，等.阿魏酸的研究进展［J］.黑龙江中医药，2009，38(3):87 －88.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:124.

［4］余健，江玉英，张弦.HPLC测定当归注射液中阿魏酸的含量［J］.安徽中医学院学报，1999，18(5):67 －68.

［5］顾民，张亮，张正行.HPLC测定逍遥散及当归中阿魏酸的含量［J］.中成药，2000，22(5):342 －344.

［6］周寒.HPLC法测定当归调经颗粒中阿魏酸的含量［J］.中医药导报，2010，16(1):70 －71.

［7］窦金凤.HPLC法同时测定宫炎康胶囊中阿魏酸的含量［J］.药学研究，2014，33(4):206 －207.

［8］陈芳，王刚，叶立红，等.HPLC法测定玫瑰乳膏中阿魏酸的含量［J］.中国药师，2010，13(1):87 －88.