自发性高血压痰湿壅盛型大鼠动物模型的构建和分析评价

陈腾蛟，徐 男

(1.枣庄市峄城区食品药品监督管理局，山东 枣庄 277300;2.山东中医药研究院，国家中医药管理局中药分析重点学科，山东 济南 250014)

中医学认为高脂血症与中医的痰浊密切相关，而对于痰浊的认识，现代医学家张景岳曰:“痰涎之化本由水谷，使脾强胃健如少壮者流，随食随化皆成血气，焉得留而为痰”。可见痰是由津液不行，自积而成。高血压病与高脂血症密切相关，脂质代谢异常也可促进高血压病的形成，高血压病痰湿壅盛型易伴发高脂血症。目前各种自发性高血压动物模型非常驳杂，故以饮食诱导构建方法［1］，规范建立符合中医痰湿壅盛型高血压特征的大鼠模型。

1 材料和方法

1.1 仪器与材料 BP－6型动物无创血压测试仪(成都泰盟科技有限公司);DDL－5低速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);Beckman CX7全自动生化分析仪(美国贝克曼库尔特公司);Cobase411全自动化学发光分析仪(电化学发光免疫检测仪器，美国罗氏诊断有限公司);LXJ－Ⅱ型离心沉淀机(上海第三分析仪器厂);BL－420E+型生物机能实验系统(四川成都泰盟电子公司);双河颗粒饲料机KL－A型(浙江余杭);全自动血液细胞分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司);血清超滤器(上海德宏生物医学科技发展有限公司);ACS－6型电子秤(山东济南风华电子衡器有限公司);游标卡尺(中国宁波量具一厂);定量取液器(上海金林生化试剂仪器厂);环形塑料管。

雄性Wistar大鼠，体重180～200g(由山东中医药大学实验动物中心提供，合格证编号:SCXR〈鲁〉20090012);自制造模饲料。

1.2 检测项目及方法［2～4］

1.2.1 宏观表现 检测实验大鼠的体重并观察大鼠的皮毛、活动度(包括纳呆、嗜睡、懒动、不思饮水、大便不成形等)。

1.2.2 体重 实验期间，每2周于进食前称取体重。

1.2.3 血压的测定［5］采用BP－6无创运动血压仪测量收缩压(SBP)、舒张压(DBP)。

1.2.4 生化指标的测定［6］用10%的水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，剖开腹腔，肝门静脉取血，全血分别置于EP管中，4℃离心(3500 rpm，20min)。用全自动生化分析仪测血脂(血清总胆固醇CHO、三酰甘油 TG、高密度脂蛋白 HDL、低密度脂蛋白LDL)、血糖GLΜ;用电化学发光免疫分析仪测空腹血胰岛素FINS;GLM与FINS乘积的倒数为胰岛素敏感指数ISI，计算ISI。

1.3 实验方法 健康雄性Wistar大鼠40只，随机分为4组:普通膳食对照组(NC)、高脂膳食组(FN)、高脂高盐膳食组(FS)、高脂高糖膳食组(MS)，每组10只。分笼喂养，自由摄食饮水。每日早晚喂食，隔日换水。每日明暗时间间隔12 h，室温控制在25℃，湿度50%左右。对照组喂普通饲料，模型组分别喂高脂饲料、高脂高盐饲料、高脂高糖饲料。

4组大鼠持续喂养16周，每隔2周测量体重、空腹血糖GLM，并测量尾动脉收缩压、舒张压。16周时取尾静脉血测定空腹胰岛素FINS、血脂(血清总胆固醇CHO、三酰甘油TG、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL);计算胰岛素敏感指数ISI;肝组织经石蜡切片HE染色后观察肝组织病理学变化。

2 实验结果

2.1 宏观表现 模型组大鼠出现行动迟缓，纳呆，嗜睡，懒动，不思饮水，大便不成形等症状，出现的症状例数FS组＞MS组＞FN组＞NC组。毛发的颜色无明显差异。

2.2 实验大鼠体重、收缩压、舒张压、空腹血糖的测定［7，8］FN组大鼠体重从第8周开始超过对照组，其他模型组体重从第10周开始显著均超过对照组(P＜0.01);血压从第8周至第16周，FS组、FN组、MS组大鼠较对照组收缩压和舒张压均显著增加(P＜0.01);空腹血糖MS组从第6周较对照组显著升高(P＜0.01);FN组、FS组较对照组从第10周开始升高(P＜0.01)。实验大鼠体重、收缩压、舒张压、空腹血糖变化见表1～4。

表1 实验大鼠体重(g)的比较

表2 实验大鼠收缩压(mmHg)的比较

表3 实验大鼠舒张压(mmHg)的比较

表4 实验大鼠空腹血糖(mmol·L－1)的比较

2.3 实验大鼠各项生化指标的测定［9］16周时大鼠血脂(血清总胆固醇CHO、三酰甘油TG、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL)、血糖GLM、空腹胰岛素FINS和胰岛素敏感指数ISI的测定结果，见表5。

表5 实验大鼠各项生化指标的比较

根据《中药新药临床研究指导原则》关于“治疗高血压病的临床研究指导原则”确定的辨证标准，“眩晕头痛、头重如裹、胸闷腹胀、心悸失眠、口淡食少、呕吐痰延、舌苔白腻、脉滑”。综合考虑痰湿壅盛型高血压辨证分型与血脂、血糖和胰岛素敏感性的关系，参照2005年国际糖尿病联盟(IDF)提出的人类代谢综合征诊断标准，确定收缩压≥140mmHg和/或舒张压≥90mmHg。中心性肥胖以模型组大鼠的体重大于NC组平均体重+2倍标准差，甘油三酯、低密度脂蛋白大于NC组平均值+2倍标准差，高密度脂蛋白低于NC组平均值－2倍标准差;同时形体肥胖，体重明显增加，纳呆嗜睡，懒动，不思饮水，大便不成形者为痰湿壅盛型高血压大鼠动物模型［10，11］。

3 讨论

3.1 根据实验结果并计算成模率，各模型组大鼠均出现高脂血症特征，但出现高血压特征仅有FS组成模率能满足实验要求，确定高脂高盐膳食喂养16周大鼠作为痰湿壅盛型动物模型。

3.2 《丹溪心法·头眩》云:“无痰不作眩”。痰湿也是高血压发病重要病机之一。在高血压病的发病中，中医以五脏为中心的理论，将高血压病的病位认定为肝、脾，继而影响至心、肾，最终导致心、肝、脾、肾诸脏俱损。肝失疏泄，胆汁排泄不利，可导致脂膏蓄积，形成高脂血症。而由于脂膏蓄积，不能为人体所用，又可导致肝肾因得不到精微物质的充养而虚损，以致引起高血压病。这是高脂血症引起高血压病的病机之一。若各种致病因素损害了肾的功能，引起肾阴不足，下焦虚衰，使之不能化气行水，清从浊化，形成痰浊。痰浊痹阻，既可导致清阳不升，引起高血压病，又可造成形体肥胖，形成高脂血症。另外，若脾失健运，津液不归正化，亦可导致浊脂生痰，痰浊中阻从而引起高血压病和高脂血症。可见，痰浊是高血压病和高脂血症的共同致病因素。研究证实，血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量的升高是“痰浊”特有的重要生化指标和物质基础［12］。

3.3 糖尿病病程长久，耗阴伤津，可使肝肾精血不足，髓海不充，引发为高血压病。若糖尿病患者肝气郁结，气郁化火，肝阴耗伤，肝阳上亢而致高血压病。中医认为高血压并发糖尿病属于阴虚阳亢型高血压。高脂高糖饮食诱导的大鼠模型可作为代谢综合征模型。血压病、糖尿病及高脂血症是代谢综合征的3个重要方面，高脂高糖饮食可诱导大鼠形成代谢综合征肾病模型［13］。代谢综合征和中医痰湿壅盛不是等同的关系。血压病、糖尿病及高脂血症是代谢综合征的3个重要方面，高血压病患者常伴发糖尿病及高脂血症，但又并不是每个高血压病患者均会发生糖尿病或高脂血症。结合临床调查结果，糖尿病患者在高血压中医证型的比重均呈现出“阴阳两虚和(或)阴虚阳亢＞痰湿壅盛＞肝火亢盛”的特点，并发高脂血症的患者中，痰湿壅盛证的比重最高［14～16］。

3.4 高血压动物模型除遗传性外，目前文献报道有关高血压实验模型的建立方法有很多，包括遗传、外科干预或药物诱导等。但上述方法建立的高血压模型，只是具备了高血压的临床特征，其发病过程与人类的高血压发生的自然病程有一定的差距。本实验通过高脂、高脂高盐、高脂高糖饮食诱导，优选最符合中医痰湿壅盛型高血压动物模型的方法。通过实验验证，高脂饮食可诱导痰湿证动物模型［16］;高脂高糖饮食可诱导建立大鼠痰湿壅盛型糖尿病模型［17］;高脂组、高脂高糖组血压均有上升，但成模率低，无法满足实验要求，不能获得稳定的高血压模型。模型组大鼠空腹血糖均出现不同程度的升高，其中高脂高糖组升高极为显著，有糖尿病并发症。

3.5 高血压病多属中医“眩晕”“头痛”范畴，不同中医证型间盐敏感性有较大差异，有研究显示，依“阴阳两虚证、阴虚阳亢证、肝火亢盛证、痰湿壅盛证”顺序盐敏感性逐渐增强［18，19］，以痰湿壅盛证的盐敏感性最高。并且高血压病中医证型与血脂也有密切关系，以痰湿壅盛证的血脂异常较为明显［20，21］。过食食盐的盐敏感者中肝火上炎证及痰湿中阻证要显著多于其他非过食食盐的盐敏感者及盐不敏感者［22］。

因此，确定高脂高盐饮食诱导建立痰湿壅盛型高血压大鼠动物模型，出现行动迟缓，纳呆，嗜睡，懒动，不思饮水，大便不成形等症状;肝细胞肿胀，细胞质中出现大小不等的脂滴空泡，以大泡性脂肪滴为主，居核边，细胞界限不清，肝窦狭窄，存在小叶内及汇管区炎症细胞浸润，部分出现点片状、碎屑样坏死;体重、血糖、空腹胰岛素比对照组均有显著性差异，血脂水平升高，出现胰岛素抵抗，血压普遍升高，符合中医痰湿壅盛型高血压的辨证分型特点，成模率较高，满足实验要求。

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