陈皮中陈皮素和橙皮苷含量测定

仇 雪

(江苏省中医院， 江苏 南京 210029)



陈皮中陈皮素和橙皮苷含量测定

仇 雪

(江苏省中医院， 江苏 南京 210029)

目的：测定陈皮中陈皮素和橙皮苷的含量，为陈皮的有效利用提供科学依据。方法：用70%的乙醇回流提取，采用HPLC法测定陈皮素和橙皮苷的含量。橙皮苷采用甲醇-醋酸-水(35∶5∶60)流动相,检测波长为284nm，柱温为30℃，流速为0.8mL/min；陈皮素采用0.05%磷酸-乙腈(45∶55)为流动相，检测波长为335，柱温为35℃，流速为0.8mL/min。结果：橙皮苷线性方程为：Y1=2.95×106X1+3.46×104(r=0.999 9)，线性范围为0.74～7.4μg/mL；陈皮素线性方程为:Y2=5.68×106X2-1.16×105(r=0.999)，线性范围为：0.174～1.740μg/mL。测得的陈皮中橙皮苷、陈皮素含量分别为3.619g/100g药材、0.331g/100g药材。结论：此方法简便、快速、准确可靠，可作为陈皮药材的质量控制方法。

陈皮；陈皮素；橙皮苷；含量测定

陈皮为芸香科植物橘CitrireticulataBlanco及其栽培变种的干燥成熟果皮[1]，有陈皮和广陈皮之分。陈皮性温，味苦、辛，具有理气健脾之功效，临床药理作用广泛，可用于治疗胸脘胀满、食少吐泻、咳嗽痰多等。陈皮中含多种化学成分，如黄酮类、生物碱类、挥发油类，陈皮素和橙皮苷属于黄酮类成分。据有关文献[2]报道，黄酮类化合物具有抗氧化、抗自由基、抗肿瘤、抗菌等药理活性。本文旨在测定陈皮中陈皮素和橙皮苷的含量，为陈皮的有效利用提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津高效液相色谱仪：包括LC-20AT高压输液泵、SPD-20A紫外检测器、N2010色谱工作站；CP225D十万分之一电子天平(德国赛多利斯)；W201B型恒温水浴锅(郑州长城科工贸有限公司)；色谱柱为菲罗门(Phenomenex)C18柱(4.6mm×250mm，5μm)。

1.2 试药

标准品：橙皮苷和陈皮素购自中国食品药品检定研究院，纯度在98%以上,批号分别为JKB032c1、JKB395a1。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂皆为分析纯。陈皮药材购自亳州药材市场，经专家鉴定为芸香科植物橘CitrireticulataBlanco及其栽培变种的干燥成熟果皮。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

日本岛津HPLC,包括LC-20AT高压输液泵、SPD-20A紫外检测器、N2010色谱工作站，色谱柱为菲罗门(Phenomenex)C18柱(4.6mm×250mm，5μm)。橙皮苷检测流动相为甲醇-醋酸-水(35∶5∶60),检测波长为284nm，柱温为30℃，流速为0.8mL/min；陈皮素检测流动相为0.05%磷酸-乙腈(45∶55),检测波长为335nm，柱温为35℃，流速为0.8mL/min。

2.2 对照品溶液制备

分别精密称取橙皮苷和陈皮素对照品9.25、2.21mg,置于25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得370μg/mL、88.4μg/mL的对照品溶液,备用。

2.3 供试品溶液制备

取样品研磨成粉，过3号筛，精密称取0.4g陈皮粉于具锥形瓶中，用70%乙醇[3]回流提取，料液比设置为1∶19，提取温度设置为77℃，提取时间为1.5h，冷却至室温后再次精密称重，用70%乙醇补足减少的重量，摇匀，滤过，转移至容量瓶中，在30℃恒温水浴锅中挥干乙醇溶剂后用甲醇定容至刻度，0.45μm滤头过滤至EP管中备用。

2.4 波长确定

分别精密吸取橙皮苷和陈皮素对照品储备液5μL注入液相仪，在200～800nm范围内进行扫描，发现橙皮苷的最大吸收波长为284nm，陈皮素的最大吸收波长为335nm，且与查阅的有关文献相一致[4]，因此选择284nm、335nm分别作为橙皮苷、陈皮素的检测波长。

2.5 线性关系考察

用移液枪精密吸取各自储备液2、5、8、10、15、20μL于1mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。按照“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到橙皮苷和陈皮素的线性方程。橙皮苷线性方程为：Y1=2.95×106X1+3.46×104(r=0.999 9)，线性范围为0.74～7.4μg/mL；陈皮素线性方程为:Y2=5.68×106X2-1.16×105(r=0.999)，线性范围为：0.174～1.740μg/mL。

2.6 精密度实验

分别精密量取对照品溶液20μL，连续进样5次，在色谱条件下测量峰面积，结果橙皮苷的相对标准偏差(RSD)为1.59%，陈皮素的相对标准偏差(RSD)为2.10%，符合精密度要求，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性实验

分别取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h进样20μL，在色谱条件下测量峰面积，经计算橙皮苷的相对标准偏差(RSD)为1.73%，陈皮素的相对标准偏差(RSD)为1.16%，表明溶液在12h内稳定性较好。

2.8 重复性实验

分别取同一批次样品5份，按照样品制备方法制备，在色谱条件下各进样20μL，测量峰面积，经计算橙皮苷的相对标准偏差(RSD)为1.76%，陈皮素的相对标准偏差(RSD)为1.84%，表示该方法重复性良好。

2.9 回收率实验

分别取供试液样品5份每份1mL于3mL容量瓶中，分别加入橙皮苷、陈皮素对照品0.8、1、1.2mL，混合均匀后甲醇定容至刻度，按色谱条件下进样20μL，计算加样回收率，结果橙皮苷的RSD为2.02%，橙皮素的RSD为2.12%。

3 含量测定

按“2.3”项方法分别制得3批供试样品，按“2.1”项色谱条件进样 20μL，计算含量。结果见表1。

表1 陈皮中橙皮苷和陈皮素含量测定结果 (g/100g药材)

橙皮苷、陈皮素的含量经三次测定取平均值分别为3.619g/100g药材、0.331g/100g药材。

4 讨论

陈皮中所含的有效成分颇多，但橙皮苷为其主要成分，在某种程度上能够反映陈皮药材质量的好坏[5]。在溶剂提取方面，本实验组做了预实验，采取了甲醇、70%乙醇、水为溶剂进行探索，结果70%乙醇提取方法的提取率较好，故采用70%乙醇作为提取溶剂。本文采用的是单泵，未能进行梯度洗脱，若实验室条件适合，可选用双泵液相进行梯度洗脱，能同时测定橙皮苷和陈皮素两种成分的含量，做到更简便、快速、经济、省时。

[1] 邓锋,梁蔚阳.陈皮质量研究进展[J].今日药学,2012,22(10):638-640.

[2] 韦正,杨丽,李晏,等.Box-Behnken效应面法优化陈皮中橙皮苷及川陈皮素提取工艺[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(10):17-20.

[3] 蔡庆顺,钟小群,余华.陈皮不同提取工艺橙皮苷提取率分析[J].中成药,2010,32(6)1067-1070.

[4] 罗文华,李文贵,陈桦.HPLC法测定不同产地陈皮中橙皮苷的含量[J].现代测量与实验室管理，2009,17(5):8-9.

[5] 袁金斌,魏玲,张敏,等.高效液相色谱法测定枳壳中柚皮苷、新橙皮苷、川陈皮素和红橘素的含量[J].中国医院药学杂志,2010,30(6):515-517.

(责任编辑：魏 晓)

2014-12-04

仇雪(1987-)，女，江苏省中医院中药师，研究方向为医院药学。

R284.2

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1673-2197(2015)07-0019-02

10.11954/ytctyy.201507010