胆宁片中蒲公英、金钱草提取工艺优化研究

陈娇婷，杨范莉

(1.赣南医学院 药学院，江西 赣州 341000；2.西北药学杂志社，陕西 西安 710061)



胆宁片中蒲公英、金钱草提取工艺优化研究

陈娇婷1，杨范莉2

(1.赣南医学院 药学院，江西 赣州 341000；2.西北药学杂志社，陕西 西安 710061)

目的：优选胆宁片中蒲公英、金钱草的提取工艺。方法：以咖啡酸含量、浸膏得率为指标，设计正交试验优选提取工艺。结果：蒲公英、金钱草浸泡0.5h后加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.0h，第2次加水10倍量水，煎煮1.0h；咖啡酸含量为50.69%，浸膏得率为25.58%。结论：该提取工艺稳定性高，可节约能源，适于工业应用。

胆宁片；咖啡酸；浸膏得率；提取工艺

胆宁片收载于部颁标准中药第十二册[1]，由蒲公英、金钱草、人工牛黄等药物组成，具有清热化湿、疏肝利胆的作用，主要用于治疗急慢性胆囊炎、胆道感染、胆结石等疾病。工艺规定蒲公英、金钱草为水煎煮提取，本实验对浸泡时间、煎煮时间、提取次数、加水量等因素进行考察，选取蒲公英中主要抗菌成分咖啡酸[2]为考察指标，设计正交实验[3-5]，确定水提工艺参数并优化。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(美国Waters2695)；蒲公英对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110753-200413)；蒲公英、金钱草(购于安徽亳州青源药材站)；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 检测波长的确定

根据2010版《中国药典》(一部)蒲公英药材中咖啡酸的检测波长[2]，选择本品测定波长为323nm。见图1。

2.2 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS2 C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

图1 咖啡酸紫外吸收光谱

流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(20∶80)，取磷酸二氢钠1.56g，加水1 000mL溶解，再加1%的磷酸溶液调节pH为3.8～4.0；检测波长：323nm；柱温：25℃；流速：0.8mL·min-1。

2.3 对照品溶液的制备

精密量取110℃干燥至恒重的咖啡酸对照品3.8mg，置25mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，精密吸取1mL，置10mL棕色容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得(咖啡酸浓度为15.2μg/mL)。测定结果见图2。

2.4 供试品溶液的制备

水提液加水定容至1 200mL，精密量取10mL，置50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，封口静置30min，吸取上清液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。测定结果见图3。

图2 咖啡酸对照品HPLC图谱

图3 供试品溶液HPLC图谱

2.5 水提工艺参数的确定

2.5.1 正交实验结果 称取药材(蒲公英75g、金钱草100g)各9份，以浸泡时间、煎煮时间、提取次数、加水量为考察因素，按L9(34)正交表设计试验。见表1。

表1 因素水平

结果显示：以咖啡酸提取量为指标，极差分析结果为C>D>B>A，即影响水提效果的因素顺序为：煎煮次数>加水倍量>煎煮时间>浸泡时间，最佳组合为A2B1C2D3。以浸膏得率为指标，极差分析结果为C>B>A>D，即影响提取效果的因素顺序为：煎煮次数>煎煮时间>浸泡时间>加水倍数，最佳组合为A1B3C3D3。正交试验方案及试验结果见表2。

2.5.2 水提工艺优化 将各提取液定容至1 200mL，过滤，取滤液，按“2.2”项色谱条件测定提取液中咖啡酸的含量，并测定其浸膏得率，采用统计学软件SPSS10.0进行极差和方差分析。结果见表3、表4。

表2 正交试验方案及试验结果分析

结果分析：煎煮次数和加水倍量对咖啡酸提取量影响差异显著(P<0.05)；煎煮次数对浸膏得率影响差异显著(P<0.05)。因此，从活性成分含量的重要性和能源方面考虑，煎煮次数选择2次，煎煮时间选择每次1h。由于浸泡时间对该两项指标影响均无显著性差异，酌情选择浸泡0.5h。加水倍量为12倍量，但考虑到生产实际中药材在第1次提取时已充分吸水，第2次提取时不再吸水。因此，确定最佳工艺为：加水浸泡0.5h，提取2次，加水量分别为12倍、10倍，提取时间分别为1.0h、1.0h。

表3 咖啡酸含量方差结果分析

注：F0.05(2，2)=19.00 ；F0.01(2，2)=99.00。

表4 浸膏得率方差结果分析

注：F0.05(2，2)=19.00 ；F0.01(2，2)=99.00。

2.5.2 验证试验 称取药材(蒲公英75g、金钱草100g)3份，按优选工艺进行验证。实验方法同上，各组提取液浓缩定容至1 200mL，测定咖啡酸提取量和浸膏得率。结果显示：咖啡酸的平均提取量为52.52 mg；浸膏得率为23.85%。验证试验结果表明，优选工艺提取所得咖啡酸和浸膏得率稳定可行。

综上所述，胆宁片剂中两味主药的提取工艺为蒲公英、金钱草浸泡0.5h后加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.0h；第2次加水10倍量水，煎煮1.0h，合并煎煮液，滤过。提取液浓缩后与方中其他药物提取所得浸膏按处方比例混合，其中间体与辅料混匀后符合片剂成型工艺要求。

3 讨论

提取溶剂倍量一般比药材吸收量高3～5倍，本研究对蒲公英和金钱草的溶剂吸收量进行考察，确定蒲公英吸水量约为原药材量的3倍，故正交试验加水量定为8～12倍。

《中国药典》中咖啡酸含量HPLC测定方法较为稳定，但分离度较差，本实验对流动相进行适当调整，增大水相比例，分离度较好，无干扰，理论塔板数达到要求。

[1] 国家食品药品监督管理局.中华人民共和国卫生部颁标准[S].北京：中国医药科技出版社，2005：136.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:化学工业出版社, 2010:244-245.

[3] 杨军宣，黄元红，陈虹静，等.不同预处理方法对淫羊藿减压回流提取效果的影响[J].中国实验方剂学杂志，2013,19(16)：48-50.

[4] 张锐，张旭，刘建群，等.党参的亚临界水提取工艺优选[J].中国实验方剂学杂志，2013,19(10)：34-37.

[5] 黄建猷，刘智生，黄瑞松，等．正交试验法优选乳康酊渗漉提取工艺研究[J]．中国实验方剂学杂志，2007，13(11)：19.

(责任编辑：李岚春)

Optimization of Extraction Process of Dandelion in Danning Tablet

Chen Jiaoting1,Yang Fanli2

(1.Gannan Medical University,JiangXi Provice,Ganzhou 341000,China; 2.Pharmaceutical Journal of Northwest , Xi'an 710061,China)

Objective:To optimize the extraction process of Danning tablet.Methods:The optimum extraction process was selected by orthogonal test．The content of caffeic acid and extraction rate as indexes.Results:Extraction process of dandelion and christina loosestrife herb was as follows：soaked 30 min, added 15 times water in the first, 1h per time and 12 times water in the second, 1h per time. The transfer rate of caffeic acid and extraction rate were 50.69% and 25.58%.Conclusion:The optimum extraction technology is resource-saving，stable and practicable．

Danning Tablet;Caffeic Acid;Extraction Rate;Extraction Process

2015-04-14

陈娇婷 (1980-)，女，江西省赣南医学院讲师，研究方向为药物新剂型与新技术。E-mail:chenjiaoting80119@126.com

R284;TQ461

A

1673-2197(2015)16-0021-03

10.11954/ytctyy.201516010