远志及其炮制品解酒作用研究

葛 方，郑 琢，萧 伟，王振中，黄文哲，杨中林*

(1.中国药科大学 天然药物活性物质与功能国家重点实验室，江苏 南京 210009；2.江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001)



远志及其炮制品解酒作用研究

葛 方1，郑 琢1，萧 伟2，王振中2，黄文哲2，杨中林1*

(1.中国药科大学 天然药物活性物质与功能国家重点实验室，江苏 南京 210009；2.江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001)

目的：研究远志及其炮制品(甘草炙和蜜炙)对急性酒精中毒小鼠的防醉解酒作用。方法：ICR小鼠给药30min后，灌胃给予52°白酒诱导建立小鼠急性酒精中毒模型，并对小鼠共济失调发生潜伏期、攀附时间及醉酒率进行观察，并检测肝组织乙醇脱氢酶(ADH)的活性。结果：远志及其炮制品水提液可显著改善急性酒精中毒小鼠的醉酒情况，其中甘草炙远志高剂量组可显著延长共济失调发生潜伏期，延长小鼠攀附时间，降低醉酒率，并提高肝组织乙醇脱氢酶(ADH)活性。结论：甘草炙远志高剂量组具有显著的解酒效果。

远志；炮制品；急性酒精中毒；解酒；乙醇脱氢酶

急性酒精中毒是指短时间内饮入过量的酒，出现先兴奋后抑制的状态，中毒后主要出现中枢神经系统抑制，进而造成对呼吸和循环系统的影响。急性酒精中毒轻者可引起身体不适，影响正常工作；重者可造成脏器功能损害，甚至危及生命[1]。我国酒文化源远流长，醉酒已成为一种普遍现象，急性酒精中毒的发病率亦随之增加，并已成为显著的公共卫生问题。中医药治疗醉酒方法优势独到，研究中药材的解酒功效具有显著应用价值。

远志为远志科植物远志(PolygalatenuifoliaWilld.)或卵叶远志(PolygalasibiricaL.)的干燥根[2]，具有益智、抗衰老和脑保护等广泛药理作用，并具有解酒、利胆利尿、消肿、保护肝脏的作用[3-5]。但目前尚无远志不同炮制品解酒作用比较的相关研究。经考证，远志炮制方法较多，本文主要对生远志、甘草炙远志、蜜炙远志三种药材的解酒作用进行初步探究。

1 实验部分

1.1 仪器

BS124S型万分之一电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)，80-2型低速离心机(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂)，TU-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，Tissue-Tearor型手持高速组织匀浆机(北京市世安科兴科技开发有限公司)，Epoch型酶标仪(美国BioTek)，KD-160型鼠称(TANITA公司)，HH-6型恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；96孔细胞培养板(Costar公司)，10μL、50μL、200μL和1 000μL的移液器(大龙医疗设备(上海)有限公司)，垂直金属(孔径0.6cm×0.6cm，长宽50cm×50cm)。

常用器具：手术器械、离心管、离心管架、烧杯、移液枪头、注射器、小鼠灌胃针等。

1.2 试剂

远志(南京同仁堂药店，批号：141204)，甘草(南京同仁堂药店，批号：141207)；海王金樽(深圳市海王健康科技发展有限公司)，52℃红星二锅头(北京红星股份有限公司)；ADH试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20150113)，考马斯亮蓝试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20150109)。

1.3 动物

ICR小鼠(上海杰思捷实验动物有限公司)，雄性，体重23～30g。小鼠饲养于(22±2)℃恒温环境，给予12/12h间隔的明暗周期。饲养期间，给予充足食物和水。

1.4 实验样品液制备

1.4.1 远志不同炮制品制备 根据2010版《中国药典》相关记载进行炮制。

1.4.2 远志不同炮制品水提液的制备 (1)生远志高剂量组水提液的制备：称取生远志粗粉8.109 0g，加水浸泡2h，以水作为溶剂，加27倍量(分别为10倍量、9倍量、8倍量)，煎煮3次(分别为2h、1.5h、1h)，抽滤，合并滤液，常压浓缩至30mL；加1%的CMC-Na溶液定容至60mL，即得浓度为0.135 15g生药/mL的药液，给药剂量为2.703 0g生药/kg。

(2)生远志低剂量组水提液的制备：称取生远志粗粉4.054 5g，制备方法同上，即得浓度为0.0675 75g生药/mL的药液，给药剂量为1.351 5g生药/kg。

按上述方法制备甘草炙远志高剂量组水提液、甘草炙远志低剂量组水提液、蜜炙远志高剂量组水提液、蜜炙远志低剂量组水提液。

1.5 阳性药的配制

取2片海王金樽(2.0g)，研成细粉，精密称取1.35g，加0.5%的CMC-Na溶液20mL，超声混匀，得浓度为0.067 5g/mL的药液，给药剂量为1.35g/kg。

1.6 实验方法

1.6.1 动物分组 ICR小鼠，雄性，体重23～30g，适应性饲养1周后，按体重随机分为空白组、模型组、阳性组、生远志高剂量组、生远志低剂量组、甘草炙远志高剂量组、甘草炙远志低剂量组、蜜炙远志高剂量组、蜜炙远志低剂量组各11只。

1.6.2 小鼠急性酒精中毒模型建立 各组小鼠实验前禁食(不禁水)12h。空白组及模型组小鼠按0.2mL/10g的标准给予0.5%的CMC-Na溶液，同时各给药组按0.2mL/10g的标准给予相应药液；给药30min后，空白组按0.14mL/10g的标准给予生理盐水，其他各组小鼠均按0.14mL/10g的标准灌胃给予52°红星二锅头[6]。

1.7 实验各组药液解酒防醉作用考察

1.7.1 实验各组药液对急性酒精中毒小鼠运动协调性的影响——攀附实验 给酒后，将小鼠立即放在垂直悬挂金属网(孔径0.6cm×0.6cm，长宽50cm×50cm)的正中间(距上下左右边缘各25cm)，金属网距桌面20cm。

(1)记录小鼠在金属网上的攀附时间t1，即从小鼠放金属网上开始计时直至小鼠从金属网上掉落所持续的攀附时间，单位为秒(s)，记为共济失调发生潜伏期。若小鼠持续攀附时间超过15min，均按15min记录[7]。

(2)于给酒后0.5h、给酒后1.5h和给酒后3h分别重复上述操作。记录小鼠在金属网上的攀附时间，对于攀附时间超过10min的小鼠，其攀附时间均记为10min(即600s)。

1.7.2 实验各组药液对急性酒精中毒小鼠翻正反射的影响——醉酒率 结合实验操作可行性，以小鼠1min内能否进行3次翻正反射为醉酒标准[7]，记录给酒后0.5h、给酒后1.5h和给酒后3h的醉酒率。

1.7.3 实验各组药液对急性酒精中毒小鼠肝中乙醇脱氢酶(ADH)的影响 于给酒灌胃6h后，将各组小鼠脱颈椎处死，取肝脏。肝脏取出后，在肝脏相同部位精密称取0.2g肝组织，按重量(g)∶体积(mL)=1∶9加9倍体积的生理盐水，制成10%的匀浆液，按试剂盒说明书测定乙醇脱氢酶(ADH)的活性。

1.8 统计方法

3.5 3 0 岁以上的男性开始关注心脏问题,且随年龄增加,选择心脏检查的项目增多,此现象符合医学建议。

2 实验结果

2.1 各组药液对急性酒精中毒小鼠共济失调发生潜伏期的影响

实验结果表明，小鼠灌胃给予52°白酒建立急性酒精中毒模型，与空白组比较，模型组差异具有显著统计学意义(P<0.01)，说明造模成功；与模型组比较，阳性组(海王金樽组)、甘草炙远志高剂量组和蜜炙远志高剂量组差异具有统计学意义(P<0.05)，生远志高剂量组差异具有显著统计学意义(P<0.01)。说明生远志高剂量组、甘草炙远志高剂量组和蜜炙远志高剂量组均有较好的解酒效果，有效延长急性酒精中毒小鼠的共济失调发生潜伏期，延缓小鼠进入醉酒昏睡期。结果见表1。

2.2 各组药液对急性酒精中毒小鼠攀附时间的影响

小鼠灌胃给予52°白酒建立急性酒精中毒模型，与空白组比较，模型组差异具有显著统计学意义(P<0.01)，说明造模成功。给酒后0.5h，与模型组比较，甘草炙远志高剂量组攀附时间增加，差异具有统计学意义(P<0.05)；蜜炙远志高剂量组小鼠攀附时间有一定增加，但差异无统计学意义(P>0.05)。给酒后1.5h，与模型组比较，各组差异均无统计学意义(P>0.05)。给酒后3h，与模型组比较，甘草炙远志高剂量组攀附时间显著增加(P<0.01)；生远志高剂量组、生远志低剂量组攀附时间有一定增加，但差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。

表1 各组药液对急性酒精中毒小鼠共济失调

发生潜伏期的影响

组别共济失调发生潜伏期(s)空白组900.000±0.000模型组294.83±26.531▲▲阳性组409.80±35.194*生远志高剂量组533.45±66.587**生远志低剂量组368.00±37.010甘草炙远志高剂量组425.90±37.505*甘草炙远志低剂量组244.60±10.358蜜炙远志高剂量组450.90±72.844*蜜炙远志低剂量组271.82±24.976

注：与空白组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 各组药液对急性酒精中毒小鼠翻正反射的影响——醉酒率

与空白组比较，模型组醉酒率较高，说明造模成功。与模型组比较，生远志高剂量组和甘草炙远志高剂量组醉酒率较低，且给酒1.5h后，生远志高剂量组差异具有统计学意义(P<0.05)。实验结果以各项醉酒只数和醉酒率表示，结果见表3。

2.4 各组药液对急性酒精中毒小鼠肝中乙醇脱氢酶(ADH)的影响

表2 各组药液对急性酒精中毒小鼠攀附时间的影响 ±s，n=11)

注：与空白组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

表3 各组药液对急性酒精中毒小鼠醉酒率的影响 ±s，n=11)

注：与空白组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较，*P<0.05。

表4 各组药液对急性酒精中毒小鼠肝中ADH活力的影响 ±s，n=11)

注：与空白组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.5 实验结果综合分析

2.5.1 各药效指标试验结果 通过分析各药效指标试验结果，按频次统计汇总。综合行为学指标及生化指标(肝组织ADH活力)各组方出现频次显示，甘草炙远志高剂量组具有显著的解酒效果。见表5。

2.5.2 各组方药液对急性酒精中毒小鼠解酒效果的权重分析 对6个组方药液急性酒精中毒小鼠共济失调发生潜伏期(A)、给酒0.5h后攀附时间(B)、给酒1.5h后攀附时间(C)、给酒3h后攀附时间(D)和肝组织中ADH活力(E)的结果进行权重分析，其解酒防醉效果趋势一致，均为数值越大解酒防醉效果越好。权重方法为：[A×0.3+(B+C+D)×0.1+E×0.4]，其中权重结果数据越大，解酒效果越好。结果表明，生远志高剂量组和甘草炙远志高剂量组解酒效果显著。结果见表6。

根据表5、表6数据综合分析得出，甘草炙远志高剂量组具有显著的解酒效果。

表5 各组药液对急性酒精中毒小鼠各药效指标总结 ±s，n=11)

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

表6 各组药液对急性酒精中毒小鼠解酒效果权重分析 ±s，n=11)

3 讨论

乙醇为强亲神经性毒物，对中枢神经系统的影响显著[12]。急性酒精中毒过程中可出现运动功能异常，如步态蹒跚、共济失调等症状。当乙醇摄入体内后，经胃肠吸收入血，在肝脏进行代谢，通过血液进入全身循环，在肝脏中乙醇主要被乙醇脱氢酶(ADH)系氧化，少部分由微粒体的乙醇氧化系统(MEOS)酶系和过氧化物体系的过氧化氢酶系统代谢消化。本研究中，主要采用小鼠急性酒精中毒模型，观察小鼠共济失调发生潜伏期、不同时间点攀附时间和醉酒率，以此考察远志及其炮制品的抗神经毒作用；检测模型小鼠肝组织中ADH活性，以此来考察远志及其炮制品促进乙醇代谢的作用。实验采用52°白酒成功诱导小鼠急性酒精中毒模型，与空白组比较，模型组差异具有显著统计学意义(P<0.01)。

本实验研究发现，远志及其炮制品均具有延长共济失调发生潜伏期、延长攀附时间、降低醉酒率和提高ADH活性的解酒效果，尤其是甘草炙远志，其高剂量组解酒防醉效果显著(P<0.05)。根据文献报道，远志具有抑制吸收乙醇[4]、清除自由基抗氧化[9-10]、消除水肿和利尿[5]等作用。实验发现，远志及其炮制品可有效提高小鼠肝组织ADH活性，促进乙醇代谢，进一步抑制乙醇的吸收，降低乙醇的神经毒作用，从而显著延长小鼠共济失调发生潜伏期，延长给酒后不同时间点小鼠在垂直金属网的攀附时间，降低醉酒率。经炮制后远志(尤其是甘草炙远志)解酒防醉效果加强，可能是由于化学成分发生变化，但确切有效物质群有待研究，有关远志解酒作用的研究报道较少。本实验对远志及其炮制品的解酒防醉作用进行初步探索，为远志防治急性酒精中毒提供参考依据。

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(责任编辑：李岚春)

Study on the Anti-alcoholism Effect ofPolygalatenuifoliaWilld.and its Processed Products

Ge Fang1,Zheng Zhuo1,Xiao Wei2,Wang Zhenzhong2,Huang Wenzhe2,Yang Zhonglin1*

(1.State Key Laboratory of Natural Products and Functions,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009, China;2.Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.,LTD,Lianyungang 222001,China)

Objective:To study the anti-alcoholism effect ofPolygalatenuifoliaWilld.and its processed products which were processed by glycyrrhizae and refined honey.Methods:Water extractions were administrated to ICR mice,30 minutes later,acute alcoholism model was established by alcohol gavage (52%U/U).Then we observed the ataxia incubation period,cling time and the rate of alcoholism;And the serum Alcohol dehydrogenase (ADH) activity was detected.Results:The water extraction ofPolygalatenuifoliaWilld. and its processed products could improve the hangover significantly.Especially the high dose of Polygala tenuifolia processed by glycyrrhizae could apparently extend the ataxia incubation period and the cling time,reduce the rate of alcoholism and enhance ADH activity.Conclusion:The high dose ofPolygalatenuifoliaprocessed by glycyrrhizae had a significant effect of anti-alcoholism.

PolygalatenuifoliaWilld.;Processed Product;Acute Alcoholism;Anti-alcoholism;Alcohol Dehydrogenase

2015-04-03

葛方(1989-)，女，中国药科大学硕士研究生，研究方向为中药制剂学。E-mail：GFcpu1989@163.com

杨中林(1950-)，女，满族，中国药科大学教授，研究方向为中药炮制与中药制剂。E-mail：yzl1950@126.com

R283.1

A

1673-2197(2015)16-0012-04

10.11954/ytctyy.201516006