虎杖降尿酸作用初步研究

闫云霞，杨中林*，萧 伟，王振中，黄文哲

(1.中国药科大学 现代中药教育部重点实验室，江苏 南京 210009；2.江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001)



虎杖降尿酸作用初步研究

闫云霞1，杨中林1*，萧 伟2，王振中2，黄文哲2

(1.中国药科大学 现代中药教育部重点实验室，江苏 南京 210009；2.江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001)

目的：研究虎杖醇提液对高尿酸血症小鼠的降尿酸作用，并初步探讨其作用途径。方法：灌胃给予小鼠不同剂量虎杖醇提液，7天后采用腹腔注射黄嘌呤和氧嗪酸钾诱导建立小鼠高尿酸血症模型，并对小鼠血清尿酸(SUA)、尿液尿酸(UUA)及肝脏中黄嘌呤氧化酶活性(XOD)进行检测。结果：虎杖醇提液可显著降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，促进尿酸排泄，并抑制肝脏中XOD活性。结论：虎杖醇提液可通过抑制肝脏XOD活性而促进尿酸排泄，从而发挥降尿酸作用。

虎杖；降尿酸作用；黄嘌呤氧化酶

痛风是由于嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄障碍所致的一种临床综合征，以高尿酸血症为主要特征。目前，对于虎杖为蓼科植物虎杖PolygonumcuspidatumSieb. et Zucc.的干燥根茎和根，味微苦，性微寒，具有利湿退黄、清热解毒、散瘀止痛、止咳化痰的功效，可用于湿热黄疸、风湿痹痛等证的治疗。侯建平等[1-3]研究发风的治疗以西药为主，虽有一定效果，但副作用较多。近年来，越来越多的学者致力于天然药物的开发，以期从中筛选出降尿酸活性成分。

现虎杖提取物可通过减少痛风性关节炎大鼠血清中前列腺素(PGE2)含量等途径改善痛风性关节炎部位病理变化。也有研究报道[4]称其水提物可抑制黄嘌呤氧化酶活性。本实验通过腹腔注射氧嗪酸钾和黄嘌呤致小鼠高尿酸血症模型来研究虎杖醇提物的降尿酸作用及其可能的作用途径，现报道如下。

1 材料与试剂

1.1 仪器

HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)，RE52CS-1旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，epoch型酶标仪(BIOTEK)，80-2型电动离心机(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂)，BS 124S型万分之一天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

1.2 试药

虎杖(产地：湖北，批号：131111，购自先声再康江苏药业有限公司)，氧嗪酸钾(Sigma，批号：STBD5759V)，黄嘌呤(Sigma，批号：SLBF7120V)，别嘌醇片(世贸天阶制药有限责任公司，批号：20140606)，痛风定胶囊(四川升和药业股份有限公司，批号：1304104)，尿酸试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20141013)，XOD试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20141015)，考马斯亮蓝试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20141013)。

1.3 动物

KM小鼠，雄性，SPF级，18～22g，84只，购自上海杰思捷实验动物有限公司。

2 实验样品溶液制备

2.1 虎杖醇提液制备

2.1.1 高浓度虎杖醇提液制备 称取虎杖药材粗粉18.00g，加11倍量70%乙醇浸泡2h后，分别以11倍、10倍、9倍量70%乙醇水浴加热回流，时间分别为2h、1.5h、1h。合并3次提取液，滤过，减压回收乙醇至50mL，加入1% CMC-Na溶液定容至100mL，即得浓度为0.18g·mL-1的药液。

2.1.2 中浓度虎杖醇提液制备 称取虎杖药材粗粉9.00g，提取方法同上，得浓度为0.09g·mL-1的药液。

2.1.3 低浓度虎杖醇提液制备 称取虎杖药材粗粉4.50g，提取方法同上，得浓度0.045g·mL-1的药液。

2.2 阳性药溶液配制

2.2.1 别嘌醇溶液配制 取别嘌醇片3片，称重后置于研钵中研碎，精密称取0.196 2g(约含别嘌醇150mg)，加0.5%CMC-Na溶液定容至100mL，即得别嘌醇浓度为1.5mg·mL-1的药液。

2.2.2 痛风定溶液配制 精密称取3.600 7g痛风定粉末，加0.5%CMC-Na溶液定容至100mL，即得痛风定浓度为36.0mg·mL-1的药液。

2.3 造模剂配制

精密称取氧嗪酸钾和黄嘌呤适量，加入0.8%CMC-Na溶液超声溶解，使二者终浓度分别为10mg·mL-1和5mg·mL-1。

3 方法与结果

3.1 实验方法

将84只KM小鼠随机分为七组，分别为空白组、模型组、别嘌醇组、痛风定组、虎杖高剂量组(HH)、虎杖中剂量组(HM)、虎杖低剂量组(HL)。于每天上午灌胃给药，空白组小鼠给予等体积生理盐水，模型组小鼠给予等体积0.5%CMC-Na溶液，其他各组小鼠给予相应药液，体积剂量为20mL·kg-1。别嘌醇组、痛风定组、HH组、HM组、HL组小鼠给药剂量分别为30.03mg·kg-1、0.72g·kg-1、3.6g·kg-1、1.8g·kg-1、0.9g·kg-1，持续给药7天。于第7天采用腹腔注射进行造模，空白组小鼠给予等体积生理盐水，其余各组小鼠给予造模剂，体积剂量为20mL·kg-1，造模剂量为氧嗪酸钾200mg·kg-1、黄嘌呤100mg·kg-1。造模1h后灌胃给予小鼠相应药物。

给药1h后对小鼠进行眼底静脉丛取血，约0.5mL，室温自然凝血1h，离心分取血清(4 000rpm，10min)，按照试剂盒说明书测定各血清样品中的尿酸浓度。取血后，将小鼠脱颈处死，迅速解剖小鼠，取适量肝脏组织，置于离心管中，加9倍量生理盐水匀浆(10 000rpm，1min)，离心匀浆液(2 500rpm，10min)，分取上清液。按照试剂盒说明书测定肝脏组织中的XOD活性。收集小鼠造模后1h和给药后1h的尿液，混合尿液，按照试剂盒说明书测定尿液中尿酸的排泄量。

3.2 统计学方法

3.3 结果

实验结果显示，与空白组比较，模型组小鼠血清尿酸水平明显升高(P<0.01)，表明高尿酸血症模型造模成功。与模型组比较，别嘌醇组及痛风定组小鼠血清尿酸浓度明显降低(P<0.05)，肝脏XOD活性亦明显降低(P<0.05)，表明别嘌醇及痛风定可通过抑制肝脏XOD活性而降低血清尿酸水平；与模型组比较，虎杖醇提液高、中、低剂量组小鼠血清尿酸浓度明显降低(P<0.05)，尿酸排泄量明显增大(P<0.01)，肝脏XOD活性明显降低(P<0.01)，表明虎杖可通过促进尿酸排泄，抑制肝脏XOD活性而降低血清尿酸含量。

各药物对高尿酸血症小鼠的血清尿酸、尿酸排泄量及XOD活性影响结果见表1。

表1 各药物对高尿酸血症小鼠相应指标的影响 ±s)

注：Δ表示模型组与空白组比较(ΔP<0.05，ΔΔP<0.01)；*表示各给药组与模型组比较(*P<0.05，**P<0.01)。

4 讨论

以往痛风多发于欧美等发达国家，近年来，随着经济的发展和社会的进步，该病在我国的发病率也逐年提高[5]。高尿酸血症是痛风的病理基础，因此本研究联合应用氧嗪酸钾和黄嘌呤诱导建立小鼠高尿酸血症模型，其中氧嗪酸钾为尿酸酶抑制剂，黄嘌呤为尿酸生成的前体物质，腹腔注射后其可在增加尿酸生成的同时抑制尿酸被氧化成尿囊酸，从而升高小鼠血清尿酸水平。

本研究结果表明，虎杖高、中、低剂量醇提液均可明显降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，增加尿酸排泄量，降低黄嘌呤氧化酶活性。黄嘌呤氧化酶既能催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，进而生成尿酸，又能直接催化黄嘌呤生成尿酸。而虎杖醇提物可通过抑制尿酸生成、促进尿酸排泄两条途径对高尿酸血症小鼠发挥降尿酸作用。尿酸排泄过程中涉及肾小管上皮细胞上的多种转运蛋白[6]，虎杖醇提物对其作用机制还需要进一步深入研究。

[1] 王斌,侯建平,李敏,等.虎杖提取物对模型大鼠滑膜组织黏附分子与核转录因子表达的影响[J].中药新药与临床药理,2008,19(6):434-437.

[2] 王斌,侯建平,李敏,等.虎杖提取物对急性痛风性关节炎大鼠血清PGE-2水平的影响[J].中国中医基础医学杂志, 2008,14(12): 944-945.

[3] 侯建平.虎杖提取物对尿酸钠致痛风性关节炎家兔滑膜组织PPAR-γ的影响[J].中药药理与临床, 2010,26(5):76-79.

[4] KONG LD, CAI Y, HUANG WW,et al.Inhibition of xanthine oxidase by some Chinese medicinal plants used to treat gout[J].J Ethnopharmacol,2000,73(1):199-207.

[5] 邵继红,徐耀初,莫宝庆,等.痛风与高尿酸血症的流行病学研究进展[J].疾病控制杂志,2004,8(2): 152-154.

[6] 朱立然,陈光亮.尿酸转运蛋白研究进展[J].中国临床药理学与治疗学,2012,17(11):1289-1294.

(责任编辑：尹晨茹)

Study on the Anti-hyperuricemia Effect ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix

Yan Yunxia1,Yang Zhonglin1*,Xiao Wei2,Wang Zhenzhong2,Huang Wenzhe2

(1.Key Laboratory of Modern Chinese Medicines of Ministry of Education, China Pharmaceutical University,Nanjing 210009, China;2.Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.Ltd, Lianyungang 222001, China)

Objective:To study the effect of ethanol extract ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix in hyperuricemic mice and investigate its possible mechanism. Methods:Different doses of ethanol extract of Polygoni Cuspidate Rhizoma et Radix were administrated to mice for 7 days, then hyperuricemia was induced by potassium oxonate and xanthine and the serum uric acid (SUA), urinary uric acid (UUA) and the hepatic xanthine oxidase activities (XOD) were detected. Results:Three doses of ethanol extract of Polygoni Cuspidate Rhizoma et Radix can significantly reduce the level of SUA, promote uric acid excretion and inhibit the XOD in hepatic. Conclusion:Ethanol extract ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix can significantly reduce the level of SUA in hyperuricemic mice by promoting uric acid excretion and inhibiting the XOD in hepatic.

PolygoniCuspidateRhizoma et Radix;Anti-trioxypurine; Xanthine Oxidase

2014-12-01

闫云霞(1989-)，女，中国药科大学硕士研究生，研究方向为抗痛风药物。E-mail：yanyunxia16@163.com

杨中林(1950-)，女，满族，中国药科大学教授，研究方向为中药新药研发。 E-mail：yzl1950@126.com

R285.5

A

1673-2197(2015)08-0007-03

10.11954/ytctyy.201508004