氧化苦参碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用及其机制研究
2015-04-26蒋莹,李辉
蒋 莹,李 辉
(1.江西医学高等专科学校,江西 上饶 334000;2.江西中医药大学 药学院,江西 南昌 330004)
氧化苦参碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用及其机制研究
蒋 莹1,李 辉2
(1.江西医学高等专科学校,江西 上饶 334000;2.江西中医药大学 药学院,江西 南昌 330004)
目的:研究氧化苦参碱对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及其机制。方法:通过结扎左冠状动脉构建心肌缺血再灌注损伤动物模型。将SD大鼠随机分为三组:对照组、缺血再灌注组、氧化苦参碱预处理组。光镜检查心肌病理变化,测定血清肌酸激酶(CK)和超氧化物歧化酶(SOD)活性含量,测定心肌组织中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性。结果:氧化苦参碱预处理组光镜下心肌细胞变性坏死程度及细胞超微结构改变较之缺血再灌注组显著减轻;氧化苦参碱预处理组大鼠血清中CK活性显著降低(P<0.05),SOD、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性显著提高(P<0.05)。结论:氧化苦参碱对大鼠冠状动脉结扎所构建的再灌注心肌损伤有显著保护作用,可能与改善心肌微循环以及抗氧化自由基生成、减轻钙超载等机制相关。
氧化苦参碱;缺血再灌注损伤;心肌;细胞凋亡
心肌缺血再灌注损伤病理学机制主要与氧自由基过多、炎症反应、钙超载以及细胞凋亡等因素有关[1]。氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)是从苦参中提取的一种生物碱,具有诸如抗氧自由基等多种生物活性[2]。本实验拟考察OMT对大鼠心肌缺血再灌注损伤过程的作用及机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康SD大鼠30只,雄性,体重(230±10)g,购自南昌大学医学院实验动物中心。将其随机分为三组:正常对照组(0.9%氯化钠2 mL,bid×6 d,ip)、缺血再灌注组(I/R,其他处理同前组)、OMT预处理组(O+I/R;OMT博尔泰力药业股份有限公司OMT注射液4g/2m,bid×6 d,ip)。第6天处死损伤模型大鼠。
1.2 试剂
氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)试剂盒(南京建成生物工程有限公司)。
1.3 模型构建[3]
通过大鼠心冠状动脉左前降支结扎法,构建缺血再灌注损伤模型。动物麻醉后气管插管,呼吸机支持、自左侧第1至第3肋开胸后暴露心脏,以乳胶片垫底的0号丝线穿过左前降支中上1/3。除对照组不结扎外所有组别结扎30 min后,松开结扎线恢复灌注。于第6天处死大鼠,取心尖3 mm处心肌标本。
1.4 CK、SOD、Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶测定
实验结束后,立即于左颈总动脉取血5.0mL测定血清CK、SOD活性。结束后,立即取左室游离心肌组织0.5g,制备组织匀浆,取上清液备用,按试剂盒说明书进行测定。心肌组织中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶用无机磷测定法。
1.5 心肌组织病理学观察
将心肌置于甲醛溶液(90mL·L-1)中固定,石蜡包埋后常规切片染色,光镜下观察病理变化。
1.6 统计学方法
2 结果
2.1 OMT对血清CK、SOD,心肌组织中Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的影响
缺血再灌注组血清CK活性显著高于正常对照组(P均<0.01)。OMT预处理组CK显著低于缺血再灌注组(P<0.05)。与正常对照组相比,缺血再灌注组心肌组织Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性均降低(P<0.05),OMT预处理组Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性均显著高于缺血再灌注组(P<0.05)。详见表1。
2.2 光镜下病理观察
正常对照组心肌纤维排列整齐,无变性坏死,无肿胀断裂,未见其他明显异常(图1A);缺血再灌注组则见片状心肌细胞变性坏死,心肌纤维肿胀断裂(图1B);OMT预处理组心肌组织病变较模型组减轻(见图1C)。
表1 OMT对血清CK、SOD,心肌组织中Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的影响
注:与缺血再灌注组比较,#P<0.05。
图1 大鼠心肌组织病理形态学 (HE,×400)
3 讨论
目前认为心肌缺血再灌注损伤是急性心肌梗死后再灌注治疗中出现的一种常见病理现象。其主要特征表现为:缺血再灌注后,发生活性氧增加,钙超载,引起细胞因子释放,启动凋亡反应,诱导心肌细胞凋亡,从而引起心肌细胞功能丧失,心脏舒缩功能障碍。SOD是一类广泛存在于动物体内的金属酶,其可清除体内在利用氧过程中产生的超氧离子,在生命体的自我保护系统中起着重要作用[4]。氧化苦参碱可减少缺血再灌注引起的ROS产生,从而抑制胞质内钙升高,使Ca2+转移到线粒体减少,抑制线粒体通透转换孔开放和其引起的细胞色素C和凋亡诱导因子(AIF)释放,从而抑制诱导的细胞凋亡,至于氧化苦参碱抗凋亡的具体信号传导途径及机制还有待进一步研究。
综上所述,氧化苦参碱对大鼠冠状动脉结扎所构建的再灌注心肌损伤有显著保护作用,其可能与改善心肌微循环,以及抗氧自由基生成、减轻钙超载等机制相关,可能是通过其抗凋亡作用来实现的。
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(责任编辑:宋勇刚)
2015-04-06
蒋莹(1980-),女,江西医学高等专科学校助理实验师,研究方向为生理学实验研究。
R285.5
A
1673-2197(2015)17-0012-01
10.11954/ytctyy.201517006